龍芽楤木皂甙對急性乙醇性肝損傷小鼠的保護作用

杜施霖 張亞平 姚晨玲 薛淵 欒驍 樊帆 童朝陽

(復旦大學附屬中山醫院,上海 200032)

龍芽楤木(Aralia Elata Miq Seem)是五加科藥用植物,又名遼東楤木、刺龍芽、刺老芽,其提取物的主要成分為皂苷(Aralosides,As)。現代藥理學研究[1-2]表明,龍芽楤木皂苷具有抗炎及抗氧化作用。我們既往的研究[3]發現,As能夠有效地對抗慢性乙醇攝入造成的過氧化損傷、防治乙醇性肝病。本研究通過觀察As對乙醇誘導的急性肝損傷小鼠肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)以及病理變化的影響,評價其對小鼠急性乙醇性肝損傷的預防作用。

1 資料與方法

1.1 藥品、動物及試劑 As由龍芽楤木根莖提取總皂甙。SPF級雄性昆明小鼠,平均體質量(20±2)g,購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司。56度白酒由北京順鑫農業股份有限公司牛欄山酒廠生產。GSH-Px、SOD、MDA試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 急性乙醇中毒模型的制備和動物分組 50只小鼠隨機分為5組：對照組(N 組)、模型組(M 組)、低劑量干預組(L組)及高劑量干預組(H組),每組10只。模型組以56度白酒按14 mL?kg-1體質量灌胃,每日1次,連續10 d。干預組于乙醇灌胃前30 min分別腹腔注射不同劑量As。對照組僅用等劑量的0.9%氯化鈉液代替乙醇灌胃腹腔注射。各組小鼠實驗期間均正常進食普通飼料,每日稱體質量以調整給藥劑量。

1.3 標本的留取 各組小鼠末次給藥后16 h,摘眼球取血,離心取血清,-20℃保存。取小鼠肝臟,0.9%氯化鈉液沖洗,濾紙吸干,稱體質量,然后分成2份,1份以甲醛溶液固定;另一份置于-70℃冰箱保存。

1.4 肝臟指數測定 按照公式：臟器指數(%)=臟器質量/體質量×100%。

1.5 生化指標測定 采用由Olympus AU 2700全自動生化分析儀測定血清丙氨酸轉氨酶(ALT)及天氡氨酸轉氨酶(AST)水平。采用硫代巴比妥酸比色法測定肝臟MDA含量;采用亞硝酸鹽法測定肝臟SOD活性;采用二硫代對硝基苯甲酸顯色法測定肝臟GSH-Px活性。操作按照試劑盒要求進行。

1.6 病理組織學檢查 將甲醛固定的肝臟標本常規脫水、石碏包埋、切片、HE染色,光鏡下觀察病理變化。

1.7 統計學分析 采用SPSS 11.0軟件進行統計分析。計量數據均以均數±標準差表示,2組間比較用t檢驗,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 一般情況 實驗期間模型組小鼠精神萎靡,體重增長緩慢,毛發光澤度差。As干預組小鼠醒酒后行動敏捷,毛發光澤度較好,體質量增長較快。

2.2 血清ALT、AST活性及肝臟指數 見表1。

表1 各組大鼠血清ALT、AST水平及肝臟指數變化(,n=10)

表1 各組大鼠血清ALT、AST水平及肝臟指數變化(,n=10)

注：與對照組相比,#P＜0.05;與模型組相比,△P＜0.05;與低劑量組相比,*P＜0.01

2.3 肝組織SOD、GSH-Px及MDA活性 見表2。

表2 各組小鼠肝組織SOD、GSH-Px及MDA含量變化(,n=10)

表2 各組小鼠肝組織SOD、GSH-Px及MDA含量變化(,n=10)

注：與對照組相比,#P＜0.05;與模型組相比,△P＜0.05;與低劑量組相比,*P＜0.05

2.4 肝臟病理組織學變化 對照組小鼠肝臟被膜光滑,呈紅褐色,邊緣銳利,質地柔軟。模型組小鼠肝臟彌漫性腫大,邊緣稍鈍,有油膩感,色澤較黯淡,質地稍硬。As干預組小鼠肝臟和對照組比較無明顯差別。HE染色顯示,對照組小鼠肝小葉結構清晰,肝細胞索排列整齊,呈放射狀,胞質分布均勻。模型組小鼠肝小葉界限不清,肝細胞索排列紊亂,胞質出現大小不等空泡,部分呈氣球樣變,可見炎癥細胞浸潤。As干預組肝小葉周邊部少數肝細胞輕度水腫及輕微脂肪變性,炎癥細胞浸潤不明顯,肝脂肪變性和炎癥程度輕于模型組,不同劑量組間無明顯差異。

3 討 論

血清轉氨酶活性升高是肝細胞受損的敏感指標。機體攝入大量乙醇,可導致肝細胞膜通透性增加,細胞內轉氨酶釋放入血,使血中轉氨酶活性升高。本研究結果顯示,與正常組相比,急性乙醇性肝損傷小鼠血清AST及ALT活性明顯升高。給予As后,血清AST及 ALT活性均明顯降低,而且ALT及AST的降低程度與劑量成正相關,說明As可以通過穩定肝細胞膜來減輕肝細胞損傷。

乙醇在肝臟代謝過程中產生大量自由基,可導致肝細胞的變性、壞死和炎癥細胞浸潤。MDA是脂質過氧化反應的終產物,與蛋白質或脂類聚合、交聯形成無活性的脂褐素堆積在溶酶體中,破壞細胞膜結構,引起細胞的衰老和死亡,因此MDA既能反映機體內氧化反應水平,也能作為機體損傷的損害因子。本研究的結果顯示,與正常組相比,急性乙醇性肝損傷小鼠MDA含量明顯升高;給予As后,肝組織中MDA含量明顯減少,說明As可降低急性乙醇性肝損傷小鼠的脂質過氧化產物的含量,但是As不同劑量組之間無顯著差異。

體內存在多種對抗活性氧(ROS)的保護系統,在細胞的損傷和凋亡過程中起著重要作用[4-5]。SOD是體內重要的抗氧化酶之一,乙醇的攝入使其活性減弱,引起不飽和脂肪酸氧化,使DNA、蛋白質和酶等的結構改變,從而加速肝臟損傷。本研究結果顯示,與正常組相比,急性乙醇性肝損傷小鼠SOD、GSH-Px活性明顯降低;給予 As后,肝臟組織中SOD、GSH-Px活性均明顯增強,而且其活性程度與劑量成正相關,說明As可以清除自由基及降低氧化應激水平。

綜上所述,As通過減少脂質過氧化產物MDA的含量及提高肝組織中SOD、GSH-Px活性,使活性氧的生成和清除重新獲得平衡,進而改善肝功能,減輕肝細胞的脂肪堆積,可以有效防治乙醇對肝臟的損傷。

1 周重楚,孫曉波,劉威.龍芽蔥木總甙的抗炎作用[J].中國藥理學與毒理學雜志,1991,5(1)：30-33.

2 周重楚,師海波,李文亭.龍芽蔥木總甙的抗缺氧作用[J].中草藥,1991,22(3)：114-116.

3 杜施霖,遲寶榮.龍芽蔥木皂苷對大鼠酒精性肝病的防治作用[J].吉林大學學報(醫學版),2005,31(1)：64-67.

4 Wu D,Cederbaum AI.Oxidative stress and alcoholic liver disease[J].Semin Liver Dis,2009,29(2)：141-154.

5 Cederbaum AI,Lu Y,Wu D.Role of oxidative stress in alcohol-induced liver injury[J].Arch T oxicol,2009,83(6)：519-548.