優(yōu)化手工制備濃縮血小板方法的應(yīng)用

袁小玲，李文斌，熊春梅，劉云華，白紅英，楊衛(wèi)紅

(宜春市中心血站，江西 宜春 336000)

對(duì)血小板減少引起的出血，輸注血小扳是特異性治療方法。隨著骨髓移植、外周造血干細(xì)胞移植、抗腫瘤治療以及免疫抑制劑等治療方法的應(yīng)用，血小板輸注逐年增加[1]。近年來，血小板的制備方法有手工法和機(jī)采法兩種，隨著血細(xì)胞分離機(jī)的推廣應(yīng)用，機(jī)采血小板的用量明顯大于手工分離濃縮血小板。機(jī)采血小板具有采集時(shí)間長(zhǎng)(50～90min)、成本高、獻(xiàn)血者招募困難等缺點(diǎn)。而手工濃縮血小板具有資源豐富、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，在歐美國家，手工血小板的臨床使用占所有血小板種類的40～50%[2]，如何有效提高手工分離血小板的質(zhì)量是血站人不斷努力探索的內(nèi)容。我站自2008年3月至今制備濃縮血小板在傳統(tǒng)法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良，采用濃縮血小板改良方法，制備的血小板其質(zhì)量符合《全血及成分血質(zhì)量要求》(GB18469-2001)，臨床應(yīng)用取得良好的治療效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 血液來源 血液來自本站無償獻(xiàn)血者，符合《獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)》，血小板計(jì)數(shù)大于150×109/L，每次獻(xiàn)血量為400ml，6min內(nèi)采血完畢，采血過程順利。

1.2 器材 CR-7大容量低溫離心機(jī) (日本日立公司)、熱合機(jī)、分漿夾、血小板振蕩保存儀、全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(邁瑞B(yǎng)C-3000Plus)。400ml折斷式壓延四聯(lián)袋；400ml塞頭式吹塑四聯(lián)袋。兩種血袋的工藝區(qū)別見表1。

1.3 操作方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組情況 將血小板計(jì)數(shù)大于150×109/L的獻(xiàn)血者隨機(jī)分為三組，第一組用塞頭式吹塑四聯(lián)袋采集400ml全血20袋，采血后6h內(nèi)用傳統(tǒng)富含法制備濃縮血小板；第二組用折斷式壓延四聯(lián)袋采集400ml全血20袋，采血后6h內(nèi)用傳統(tǒng)富含法制備濃縮血小板；第三組用折斷式壓延四聯(lián)袋采集400ml全血20袋，采血后6h內(nèi)用改良富含法制備濃縮血小板。

表1 折斷式壓延四聯(lián)袋與塞頭式吹塑四聯(lián)袋的工藝區(qū)別

表2 傳統(tǒng)富含法和優(yōu)化法制備血小板比較

1.3.2 分離離心后血液均采用分漿夾式分離方法。傳統(tǒng)富含法和優(yōu)化法制備血小板異同見表2，優(yōu)化法分離富含血小板血漿中如有紅細(xì)胞混懸，則輕離心285g，5min分離上層富含血小板血漿，袋底紅細(xì)胞棄除。離心溫度為22±2℃，成品在22±2℃振蕩保存。

1.4 成品觀察指標(biāo)

制備好的各組濃縮血小板在血小板振蕩保存儀中靜置1h，解聚后混勻，稱重、留樣，進(jìn)行血小板、紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)，取平均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用x±s表示。

2 結(jié)果

2.1 折斷式壓延袋和塞頭式吹塑袋對(duì)血小板含量和紅細(xì)胞、白細(xì)胞混入量的影響，見表3。

2.2 改良法和傳統(tǒng)法制備濃縮血小板的效果比較見表4。

表3 2種血袋制備的濃縮血小板中血小板含量和紅細(xì)胞、白細(xì)胞

表4 2種方法制備的濃縮血小板含量和紅細(xì)胞

3 討論

在手工制備濃縮血小板制品的過程中我們要注意到其質(zhì)量受多種因素的影響，如：血袋內(nèi)壁的光滑度、全血的采集時(shí)間、采集是否順暢，運(yùn)輸及貯存條件、環(huán)境溫度、離心條件等。此外制備過程中動(dòng)作要輕，避免較強(qiáng)的物理振蕩，造成血小板不可逆轉(zhuǎn)的聚集。

選用400ml血袋制備要比200ml血袋更佳，200ml全血離心后分離界面太小，從離心機(jī)內(nèi)移出到分離的過程，界面容易破壞；同時(shí)富漿中有大量的血小板粘附在血袋內(nèi)壁表面而損耗。而400ml全血制備血小板時(shí)，盡管有相同因素存在，但由于體積較大，分離界面清晰，血小板的收集率均能達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)。因此在手工制備濃縮血小板時(shí)，最好利用400 ml全血制備。另外由于選用壓延袋內(nèi)壁光滑平整，袋質(zhì)較硬，離心時(shí)袋體不易打折，袋壁不易粘掛紅細(xì)胞。折斷式壓延四聯(lián)袋離心后紅細(xì)胞不會(huì)粘掛在袋口，避免了塞頭式聯(lián)袋粘掛在塞子上的紅細(xì)胞混入血漿；表3數(shù)據(jù)表明，同樣使用傳統(tǒng)法，用折斷式壓延四聯(lián)袋制備的濃縮血小板中紅細(xì)胞混入量明顯低于塞頭式吹塑四聯(lián)袋。

利用富漿法手工制備濃縮血小板的收集率應(yīng)大于70%[3]，進(jìn)行成分制備時(shí)，離心條件的選擇是非常重要的一步。離心力的大小、時(shí)間的長(zhǎng)短、離心溫度以及剎車速度等均可能影響血小板的質(zhì)量及數(shù)量。離心力過大，時(shí)間過長(zhǎng)，導(dǎo)致血小板下沉，富含血小板血漿內(nèi)血小板含量減少；而離心力過輕，血液離心時(shí)紅細(xì)胞、白細(xì)胞不能很好地下沉，以致分離出來的富含血小板血漿紅細(xì)胞、白細(xì)胞嚴(yán)重超標(biāo)，所制備出來的手工血小板的質(zhì)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不達(dá)標(biāo)。傳統(tǒng)富含法制備濃縮血小板時(shí)首次離心采用輕離心，紅細(xì)胞不宜壓實(shí)，易懸浮、掛壁，造成濃縮血小板中的紅細(xì)胞混入量超標(biāo)，若為減少紅細(xì)胞混入而加大離心力則易導(dǎo)致血小板含量不達(dá)標(biāo)。通過應(yīng)用改良方法有效去除了紅細(xì)胞、白細(xì)胞，酌情增加輕度離心，能很好去除殘存在袋口的紅細(xì)胞和在搬運(yùn)和分離過程中因血袋晃動(dòng)而混懸的紅細(xì)胞。表4數(shù)據(jù)表明，與傳統(tǒng)法相比，改良法制備的濃縮血小板其紅細(xì)胞白細(xì)胞混入量明顯降低，從而降低了輸血不良反應(yīng)的發(fā)生，血小板含量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明離心參數(shù)設(shè)置恰當(dāng)，增加離心次數(shù)，對(duì)血小板含量影響較小，血小板含量與相關(guān)報(bào)道相符[4]。

改良富含法雖然影響因素較多，但只要能嚴(yán)格認(rèn)真地進(jìn)行操作，不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，就能制備符合標(biāo)準(zhǔn)的血小板制品，既能節(jié)約血液資源，避免浪費(fèi)，又能為臨床提供充足的血小板制品，且其操作流程易于掌握、安全可靠、成本低，且制備的濃縮血小板質(zhì)量穩(wěn)定，符合國家標(biāo)準(zhǔn)，值得推薦。我站運(yùn)用改良法制備濃縮血小板合格率80.7%，質(zhì)量?jī)?yōu)良，臨床應(yīng)用效果良好，作為機(jī)采血小板的補(bǔ)充，很好地保證了臨床供應(yīng)[5]，有效地節(jié)約了血液資源。

[1]楊成民,李家增,季 陽.基礎(chǔ)輸血學(xué)[M].北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社,2001:670.

[2]Sullivan MT,Cotten R,Read EJ,et al.Blood collection and transfusion in the United States in 2001[J].Transfusion,2007,47(3):385-394.

[3]王培華.臨床輸血學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:3.

[4]胡曉成.改良白膜法制備匯集濃縮血小板的臨床應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2008,10(3):234-235.

[5]盧 申,梅 靜,呂 霞.濃縮血小板制備和臨床應(yīng)用分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2008,10(2):160-161.