頭頸部腫瘤多瘤抑制基因p16表達研究

傅新文 ，胡銀英 ，宋曉萍 ，袁 鏗 ，郭江梅 ，袁佳蕾 ，李龔瓊 ，劉 利 ，張民憲

(1、江西省人民醫院，江西 南昌 330006；2、江西省醫學科學研究所；3、贛南醫學院臨床醫學系；4、江西省婦幼保健院；5、南昌大學現代教育技術中心)

多瘤抑制基因p16(multiple tumor suppressor l，MTS 1)作為一種新型的抑癌基因，它直接參與細胞周期的調控，可抑制細胞增殖及分裂，具有明顯抑癌作用，p16基因或蛋白異常與腫瘤發生、發展及惡性程度密切相關。檢測p16基因表達水平對判斷患者腫瘤的易感性以及預測腫瘤的預后具有十分重要的臨床意義。本研究以頭頸部病變細針吸取及術中印片細胞學為研究樣本，采用免疫細胞化學方法，研究p16抑癌基因表達水平，探討原發性和繼發性頭頸部腫瘤的組織學類型、分化程度與生物學行為之間的關系，試圖建立基因診斷新方法，為腫瘤的臨床診斷、指導治療和預后判斷提供依據，現報告如下。

材料與方法

1 資料來源

本實驗組220例頭頸部良、惡性腫瘤選自2005年7月～2009年12月江西省人民醫院頭頸部病變細針吸取細胞學病例，其中顱內腫瘤標本取自南昌大學第一附屬醫院術中印片病例。本組男性138例，女性82例，男女比為1.68:1。年齡范圍為16歲～84歲，平均年齡54歲。

2 方法

2.1 所有病例均經細胞學及病理學明確診斷，同時留取針吸或印片細胞學涂片標本行p16基因檢測。

2.2 固定：將針吸組織顆粒物均勻涂片或腫瘤切面印片于經清潔處理過的載玻片上，于現配的4%多聚甲醛固定30min，自然干燥后密封置-30℃冰箱待測。

2.3 免疫細胞化學染色 采用DAKO公司p16檢測試劑盒產品，嚴格按照操作要求及步驟進行。

3 結果判定

3.1 生物顯微鏡下p16基因表達陽性為棕色顆粒。陽性染色主要定位于細胞核中，細胞漿中也可見著色，陽性產物顯現為染色強度不等的棕黃色顆粒，采用盲法計數，每張標本片至少計數500個有核細胞。

3.2 著色判定：①陰性(-)：細胞無棕色反應；②陽性(+)：淺染色顆粒散在分布；③中度陽性(++)：顯色強度適中；④強陽性(+++)：細胞呈均一棕黃色染色。

3.3 陽性率表達：p16基因表達率=p16表達陽性細胞數/p16表達陽性細胞數+陰性細胞數×100%。

4 統計學分析 利用SPSS 11.0軟件對研究結果進行分析。

結 果

220例頭頸部病變中，淋巴結針吸細胞學標本104例(含非腫瘤病變39例、惡性腫瘤65例)，涎腺腫瘤55例(良性腫瘤32例、涎腺癌23例)，甲狀腺腫瘤15例(甲狀腺瘤6例、甲狀腺癌9例)，顱內腫瘤46例(良性及低惡度腫瘤41例、惡性腫瘤5例)。

上述各部位來源病例的p16基因表達顯示：各同組間良性病變與惡性腫瘤的比較分析均具有顯著性差異(P＜0.05)；頭頸部良性病變與惡性腫瘤p16蛋白的陽性總表達率差異非常顯著(P＜0.05)；見表1。

討 論

表1 220例頭頸部病變/腫瘤p16基因的表達情況

腫瘤的產生是由于多種癌基因激活、抑癌基因失活致細胞增殖失控造成的，參與細胞周期調控的分子與腫瘤的發生與發展關系已成為腫瘤的研究熱點[1]。多瘤抑制基因p16為一種新型的抑癌基因，定位于第9號染色體短臂2區1帶(9p21)，編碼蛋白產物15845u，即p16蛋白。正常情況下p16蛋白通過與周期素依賴性激酶4(CDK4)結合(拮抗作用)，從而阻止細胞由G期進入S期，在細胞周期的調控中起負性調節作用，其丟失和突變在多種惡性腫瘤的發生、發展過程中起著重要作用。近年來人們已深入研究p16的抑癌機制，仍尚無統一定論。但研究表明，p16基因在大多數人類腫瘤組(下轉第452頁)像學、病理學等檢查最后確診。本文有6例患者心肺功能及重要臟器功能良好，對于早期前列腺癌老年患者能進行手術治療，術后兩年觀察TPSA和FPSA結果一直正常。但也有2例患者，因各器官功能有不同程度的衰退，免疫功能低下，并存疾病多，不適應手術，只有采取中醫治療，病情逐漸惡化。

圖4 2例前列腺癌中藥治療后FPSA動態變化

因此，老年男性健康查體檢測PSA對于前列腺癌的早發現、早治療具有重要意義。

[1]王自正主編.現代醫學標記免疫學[M].北京:人民軍醫出版社,2000:64-65.

[2]Catalona WJ,Yu X,Roehl,KA,et al.Serum PSA correlates more strongly with the percentage of prostate cancer and cancer volume than with prostate size[J].J Urol,2005,173(4):257.

[3]張升勤.PSA檢測對前列腺疾病的診斷價值 [J].中國實用醫藥,2007,2(36):113.