注射用二丁酰環磷腺苷鈣的血管刺激性、溶血性和過敏性研究

宋曉娜 王子彪 周 麗

注射用二丁酰環磷腺苷鈣（Calcium Dibutyryladenosine Cyclophosphate for injection）為蛋白酶激活劑，可催化人體內一氧化磷酸反應和三羧酸循環，激活人體各種反應。同時產生大量ATP，改善細胞能量代謝，促進神經再生，擴張血管，舒張平滑肌，改善心肌缺氧缺血等作用。為確保藥品質量，保證患者用藥安全、有效，避免毒副反應發生，本文對注射用二丁酰環磷腺苷鈣的血管刺激性、溶血性及過敏性試驗結果進行了詳細闡述。

1 材 料

1.1 藥物

注射用二丁酰環磷腺苷鈣：濟南泰盛達醫藥技術開發公司提供。5%葡萄糖注射液：批號：08010903，浙江濟民制藥有限公司。過敏試驗陽性對照物（4%卵白蛋白葡萄糖水溶液，取新鮮蛋清臨用時在無菌條件下用5%葡萄糖注射液配制）。

1.2 受試動物

白色家兔9只，體質量2.22～2.51kg，雌雄各半。由河北醫科大學動物中心提供，合格證號：06036。豚鼠18只，體質量261～293g，雌雄各半，由河北醫科大學動物中心提供，合格證號：06037。

2 方法與結果

2.1 動物飼養環境

家兔：溫度：（22±2）℃；濕度：（50±5）%；每籠1只；喂以家兔專用顆粒飼料，輔以新鮮蔬菜。實驗前動物飲水、進食正常，狀態良好。豚鼠：溫度：（22±2）℃；濕度：（50±5）%；每籠3只；喂以豚鼠專用顆粒飼料，輔以新鮮蔬菜。實驗前動物飲水、進食正常，狀態良好。

2.2 試驗方法

2.2.1 溶血性試驗[1]

取健康家兔1只，頸動脈取血5mL至潔凈干燥小燒杯中，用玻璃棒攪拌去纖維蛋白，加5%葡萄糖注射液5mL，3000轉/min，離心10min，棄去上清液，再加10mL 5%葡萄糖注射液輕輕搖勻，離心，棄去上清液，如此反復幾次至上清液不呈紅色為止，然后按所得紅細胞比容，用5%葡萄糖注射液配制成2%紅細胞懸液，置冰箱備用；另取試管7支，1～5管分別加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL溶解后的注射用二丁酰環磷腺苷鈣（臨用時取1支注射用二丁酰環磷腺苷鈣，用250mL 5%葡萄糖注射液溶解）并用5%葡萄糖注射液稀釋至2.5mL，6號、7號試管中分別加入5%葡萄糖注射液2.5mL、蒸餾水2.5mL（完全溶血對照）。最后每管均加入2%兔紅細胞懸液2.5mL，輕輕搖勻，置37℃水浴中，分別記錄15、30min、1、2、4h各管的溶血和凝集情況。

溶液澄清，紅色，管底無紅細胞殘留為完全溶血；溶液澄清，紅色或棕色，管底尚有少量紅細胞殘留為部分溶血；紅細胞全部下沉，上層液無色澄明為不溶血；雖不溶血，但出現紅細胞凝集，振搖后不能分散，或出現藥物沉淀為凝集。

2.2.2 過敏性試驗

豚鼠18只，按體質量、性別隨機分為3組，每組6只，陰性對照組給予5%葡萄糖注射液0.5mL致敏，并以1.0mL該注射液進行攻擊；陽性對照組預先以4%雞蛋清0.5mL致敏，并以1.0mL該試劑進行攻擊；受試藥組以0.5mL溶解后的注射用二丁酰環磷腺苷鈣致敏，并以1.0mL該藥進行攻擊。各組首先隔日腹腔注射藥液0.5mL/只，共注射3次。然后將每組豚鼠分為2小組，其中1小組豚鼠在第一次腹腔注射藥液后14d由前肢靜脈注射溶解后的原藥液1.0mL/只；另一小組于第一次腹腔注射藥液后第21天從前肢靜脈注射溶解后的原藥液1.0mL/只。觀察靜脈注射后30min內的豚鼠過敏反應癥狀，并按表1評分標準進行評分。

表1 全身性過敏反應的評分標準

2.2.3 血管刺激性試驗

取家兔8只，隨機分為兩組，每組4只，第一組家兔每日耳緣靜脈緩慢滴注5%葡萄糖注射液24.0mL/kg，第二組動物亦每日由耳緣靜脈緩慢滴注溶解后的注射用二丁酰環磷腺苷鈣24.0mL/kg，連續滴注7d，末次給藥后24h，每組取2只動物，木棒擊斃家兔，剪取距注射部位1cm處和5cm處兔耳，放于10%福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋,HE染色，末次給藥后72h，處死每組剩下2只動物，剪取距滴注部位1cm處和5cm處兔耳，放于10%福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋，HE染色。光鏡下觀察注射用二丁酰環磷腺苷鈣給藥后24及72h對兔耳血管的刺激性反應。

表2 注射用二丁酰環磷腺苷鈣的溶血試驗結果

表3 注射用二丁酰環磷腺苷鈣過敏性試驗結果

表4 家兔耳緣靜脈滴注后肉眼觀察結果

表5 注射用二丁酰環磷腺苷鈣家兔耳緣靜脈滴注后病理組織學檢查結果

肉眼觀察注射部位兔耳靜脈有無充血、水腫變性、硬結及壞死現象，記錄病變程度及出現血管組織變化的家兔數目，血管充血及水腫程度分為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度，0度為無變化，Ⅰ度為輕微變化，Ⅱ度為明顯變化，Ⅲ度為嚴重變化；病理組織學檢查標準為觀察注射部位兔耳靜脈血管擴張充血、血栓形成、水腫及炎性細胞浸潤等改變，每項內容按病變程度分正常、輕、中、重，分別以–、+、++、+++表示。

2.3 結果

2.3.1 溶血性試驗

由表2所示注射用二丁酰環磷腺苷鈣1～5管在4h內均未引起溶血和凝集反應。

2.3.2 過敏性試驗

注射用二丁酰環磷腺苷鈣的兩組豚鼠分別于第1次腹腔注射后14d和第21天用溶解后的原藥液進行攻擊均未發生過敏性反應；而陽性對照組豚鼠于注射后3min內出現呼吸困難，抽搐倒下，而后死亡，豚鼠死亡均發生在注射后1～5min內。另外，陰性對照組6只豚鼠均未發生過敏反應，結果見表3。

2.3.3 血管刺激性試驗結果

表4所示為肉眼觀察結果，家兔耳緣靜脈緩慢滴注注射用二丁酰環磷腺苷鈣或5%葡萄糖注射液24.0mL/kg，1次/d，連續7d，末次給藥后24、72h，肉眼觀察給藥組與對照組無明顯區別。

表5所示為病理組織學檢查結果，鏡下可見給藥后24h，距注射部位1cm處兔耳緣靜脈可見炎性細胞浸潤、輕微充血等，未見硬結、壞死現象。與1cm處相比，距注射部位5cm處兔血管炎性細胞浸潤、充血明顯減輕。給藥后72h，1和5cm處兔血管炎性細胞浸潤、充血均明顯減輕。5%葡萄糖注射液組耳緣靜脈組織病理學呈現相似的變化，與注射用二丁酰環磷腺苷鈣給藥組相比較沒有明顯差別。

3 結 論

注射用二丁酰環磷腺苷鈣對家兔耳緣靜脈無明顯刺激作用，對家兔紅細胞無明顯體外溶血及致凝集作用，對豚鼠無致過敏作用，表明注射用二丁酰環磷腺苷用于注射是安全可靠的。

[1]錢之玉.藥理學實驗與指導[M].北京:中國醫藥科技出版社,1996:407-410.