新生兒血培養出凝固酶陰性葡萄球菌的分析

李天嬌,鐘海英,郭紅荔,黃 濤

(海南省人民醫院檢驗科,海南海口 570311)

新生兒血培養出凝固酶陰性葡萄球菌的分析

李天嬌,鐘海英,郭紅荔,黃 濤

(海南省人民醫院檢驗科,海南海口 570311)

新生兒血培養中分離出凝固酶陰性的葡萄球菌(CNS)一直都占居新生兒血培養分離菌的第一位,但由于CNS是人皮膚正常菌群,在臨床新生兒采血過程中由于操作時間延長或是消毒不充分以及采用使用各種侵入性醫療器械時都會造成污染,因此導致血培養中分離出的CNS常見是污染菌,但又由于CNS可以產生毒力因子而具有嚴重的致病性,并且隨著CNS耐藥性的不斷增加,對于抵抗力弱的新生兒群體,它的致病性更顯突出。因此,在臨床工作中新生兒血培養中分離出CNS是污染菌還是病原菌一直困擾著很多臨床醫生和實驗室工作者;根據菌血癥病原菌的實驗室標準包括血培養在入院后48小時內陽性和多次血培養為同一細菌判斷為病原菌,3天以上陽性的CNS,或培養出多種皮膚寄居菌,或血培養雖多次呈陽性,但屬不同種的CNS或其他細菌等提示為污染[1,2]。我們綜合文獻推薦的標準,制定出一套實驗室評估標準,并對血培養分離出CNS以評估為病原菌或是污染菌;

1 對象與方法

1.1 對象 選擇我2007年1月到2009年12月我實驗室新生兒科血培養樣品1 789份,并對分離出113株CNS作為研究對象。

1.2 采血方法 在患兒住院抗感染藥物使用前或非感染性疾病患兒在住院過程中懷疑感染時進行血培養,對患兒進行局部消毒后在無菌操作下經橈動脈或股靜脈取血2-5 ml加入Bact/Alert-120儀器配套的需氧血瓶中半小時內送檢實驗室。

1.3 儀器 Bact/Alert-120全自動光電比色微生物檢測儀。其特點為檢測微生物濃度所致的酸堿度變化,該變化反映在瓶底的感光板上,進而被瓶外的光束捕獲,通過電腦的連續監測,分析判定,隨時報警。

1.4 鑒定 實驗采用法國梅里埃(VETIK-32)進行鑒定。對陽性培養瓶及時取樣作革蘭染色涂片及分離培養。分離培養后對鏡檢呈葡萄狀排列的革蘭陽性球菌的菌落進行血漿凝固酶陰性初步鑒定,繼之采用法國梅里埃VETIK-32系統作進一步鑒定。

1.5 質控菌株 金黃色葡萄球菌ATCC25923,購自“衛生部臨床檢驗中心”。

1.6 血培養分離出CNS如何區分病原菌或是污染菌

1.6.1 血培養分離出CNS實驗室評估標準(圖1)

1.6.2 菌血癥臨床評判標準[1,2]

菌血癥臨床標準應當符合以下至少一項條件:初次血培養陽性標本采集的當日體溫≥38℃,膿毒性休,白細胞升高或核左移,具有彌散性血管內凝血病變;具有由皮膚菌群引起感染的危險因素如長期靜脈插管或異體移植物;抗生素(包括萬古霉素或菌株敏感的抗生素)治療有效,或拔除導管或異物,感染得到控制。實驗室標準也應符合以下至少一項條件:從其他感染部位或導管尖端分離到相同的病原菌,且耐藥譜也相同;多次血培養為同一種細菌。

污染菌的臨床標準應符合以下至少一項條件:無明顯發熱及危險因素(如免疫功能低下或侵襲性操作);雖有上述危險因素但隨后多次血培養證明為其他病原菌;使用敏感抗生素治療無效;發熱可由其他原因解釋,且無明顯的感染征象。同時還應當結合實驗室的標準,如長時間培養后陽性;連續多次多日培養,僅1次為CNS;1次血培養分離出2種以上的皮膚菌群;收集CNS陽性標本的72 h內又分離出另1種細菌或真菌,卻沒有再分離到CNS。

1.6.3 結合臨床癥狀和實驗室數據,最終評估出分離出的CNS是病原菌還是污染菌。

1.7 統計處理 使用Bact/Alert分析軟件對每例的血培養次數、陽性次數、檢出時間等進行統計。

2 結果

2.1 一般資料 2007年1月到2009年12月共收到新生兒科血培養1 789份血標本,分離出143例菌株,其中G-桿菌14例占9.8%;G+葡萄球菌120例占83.9%,其中CNS 113例占79.0%(污染菌 89占78.8%,病原菌24占21.2%),金黃色葡萄球菌7例占4.9%;真菌5例占3.5%;其它細菌 4例占2.8%。

2.2 實驗室數據 Bact/Alert分析軟件分析血培養分離出CNS 113例;24小時內儀器報警為22例(占19.5%)25-48小時報警24例(占21.2%),49-168小時報警分離出67例(占59.3%),經分析24 h內報警有8例(36.3%)為污染菌,25-48 h報警有14例(58.3%)為污染菌,48 h以后全為污染菌。見圖2;

圖1 血培養分離出CNS實驗室評估標準

圖2 血培養中病原菌及污染菌的檢出時間比較

2.3 根據CNS實驗室評估113例CNS中24株為病原菌占分離 CNS的 21.2%,血樣本污染 89例78.8%,與文獻[3,4,5]70-90%之間報導相符,除去被污染分離出的CNS,新生兒科致病性CNS占總菌血癥病原菌44.4%(24/54)為感染病原菌的首位。

3 討論

近年來隨著抗生素的廣泛應用,新生兒病原菌種類也發生了變遷,國內外資料顯示新生兒CNS感染呈增多趨勢,2003年西班牙學者進行一項對新生兒病房感染的前瞻性研究發現,革蘭陽性菌占首位(76.4%),CNS占其中的72.5%,居新生兒細菌感染的第一位[6];汪復等人研究的新生兒CNS感染也居新生兒細菌感染的首位[7],本組數據新生兒科血培養除去分離出的污染菌,CNS引起的敗血癥為24例,占總的血培養分離出的病原菌的44.4%(24/54)位于新生兒菌血癥的第1位,與文獻相符。

新生兒敗血癥是威脅新生兒生命的危重疾病、尤其在低體重兒,早產兒較易感染,是新生兒死亡的重要疾病,而血培養分離出病原菌是新生兒敗血癥診斷和治療的主要依據。但在血培養中卻經常因各種原因造成血樣本的污染,因此在血培養中如果分離出CNS,那么如何辨別是病原菌還是污染菌尤其重要,需結合臨床癥狀和實驗室信息來綜合分析,如果僅依靠實驗室的數據來判定,就出現誤報的現象。例如,實驗室確定菌血癥的標準為陽性報警時間在48 h以內和多個血培養瓶陽性,而本研究結果顯示雖然病原菌陽性報警時間短于污染菌,但48 h以內血培養CNS仍有36.3-58.3%為污染菌,因此CNS菌血癥應當依據臨床癥狀、實驗室數據和微生物學三方面的資料來判定。

總之,CNS在新生兒菌血癥中感染率高,而在血培養時血樣本污染率也高,因此應減少操作時造成血培養瓶污染,實驗室應提高判斷血培養中分離出的CNS是病原菌還是污染菌的能力,這對于給臨床提供準確有意義的血培養報告單有著至關重要的意義。

[1]Chandasekar PH,Brown WJ.Clinical issues of blood cultures[J].Arch Interm Med,1994,154(4):841.

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[7]汪 復.小兒細菌耐藥性及防治對策[J].中國實用兒科雜志,2002,17(3):129.

1007-4287(2010)09-1451-03

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2010-02-14)