完善血液相容性試驗降低輸血反應(yīng)的發(fā)生

魏廷恒 房杰

輸血反應(yīng)其實質(zhì)就是機體的免疫反應(yīng)。在臨床輸血中,最重要的是在輸血前預(yù)判這次輸血是否成功,并且不出現(xiàn)急性或遲發(fā)性輸血副反應(yīng)。由于輸血本質(zhì)上是同種異體間血液的移植,除同卵雙生子外,就幾乎沒有相同的血型的人。因此輸血時發(fā)生在同種之間的免疫應(yīng)答是較難完全杜絕的,交叉配血就是檢查血型及亞型之間是否相合,減少輸血反應(yīng)的發(fā)生。目前各國血液輸血預(yù)警系統(tǒng)的資料顯示,超過 60%的輸血不良反應(yīng)來自于同種免疫反應(yīng)。隨著免疫血液學(xué)相關(guān)新技術(shù)的應(yīng)用,能盡可能的避免一些輸血反應(yīng)的發(fā)生,提高輸血的有效性和安全性。

1 ABO/Rh變異型的鑒定與輸血

實驗室發(fā)現(xiàn) ABO/Rh血型變異日益增多。例如:惡性腫瘤、細(xì)菌吸附導(dǎo)致血型抗原的減弱或獲得性A或 B抗原;造血干細(xì)胞移植導(dǎo)致的血型轉(zhuǎn)換;血型抗原本身的多態(tài)性;各亞種亞型和變異型的存在等,使輸血實驗室工作者無法立即準(zhǔn)確判定受檢樣本的血型。此時需要各種附加試驗,如吸收放散試驗鑒定 ABO亞型;特異性 D表位分析試驗鑒定 D變異型;紅細(xì)胞膜酸處理鑒定獲得性 A和 B抗原等,可部分解決血型亞型和變異型血型鑒定的難題。

2 提高血庫常規(guī)檢測試驗的靈敏度和穩(wěn)定性

輸血實驗室有 2個最基本的試驗用于血型鑒定,即直接血凝試驗和用于抗體鑒定與配血的間接抗球蛋白試驗(IAT)。IAT技術(shù)現(xiàn)在仍然被認(rèn)為是經(jīng)典的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。但I(xiàn)AT技術(shù)重現(xiàn)性差和不便于自動化檢測。從 20世紀(jì) 90年代開始,凝膠技術(shù)、親和柱凝集技術(shù)和紅細(xì)胞固相黏附分析這 3中新的技術(shù)被相繼應(yīng)用到輸血領(lǐng)域中。盡管這 3種技術(shù)從操作步驟,所用實驗儀器方面都與試管法不同,但實驗原理上仍是抗原抗體相互作用后,通過紅細(xì)胞的凝集來顯示結(jié)果。這些新技術(shù)的設(shè)計目的是試管法試驗的完善,即形成穩(wěn)定的終點和便于自動化。而且這些新方法在血型檢測時,所需的樣本量較少,試驗的重復(fù)性很好。且具有無需細(xì)胞洗滌以及對技術(shù)的依賴性降低等優(yōu)點,特異性與靈敏度被認(rèn)為是可與低離子強度間接抗人球蛋白試驗相媲美。當(dāng)然它也有一定的缺點,如在 ABO和 Rh定型試驗也比較耗時,需 20min(10 min孵育,10m in離心);以及在獲得試驗體系高靈敏度的同時,也較易產(chǎn)生假陽性。

3 交叉配血試驗顯示不配合時的輸血策略

隨著輸血前檢查項目的增多和診斷試劑、實驗體系靈敏度的提高,主次側(cè)交叉配血不合的現(xiàn)象也日益增多。從實驗室或醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)中我們知道,許多因素將影響紅細(xì)胞的免疫性破壞和體內(nèi)存活。目前較明確的因素包括 IgG的亞類、抗體激活補體的能力、抗體的總量、紅細(xì)胞上抗原的數(shù)量、抗原從紅細(xì)胞上解離的能力以及受血者單核吞噬系統(tǒng)的活力等。通過研究這些常規(guī)血清學(xué)試驗的結(jié)果來推斷輸血后供血紅細(xì)胞在受體內(nèi)存活的狀態(tài),有時也是可能的。如利用預(yù)熱技術(shù),在37℃條件下進(jìn)行配血試驗,以判斷抗體在正常生理體溫條件下是否具有活性等等。但在另外一些情況下,則不得不采取一些非常規(guī)的方法,例如,同位素 Cr51來測定紅細(xì)胞的存活率;以功能細(xì)胞試驗預(yù)判血型同種抗體的臨床意義。這類功能細(xì)胞試驗有 3種:單核細(xì)胞單層檢測、抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗和化學(xué)發(fā)光試驗。這些試驗都是通過抗體包被的紅細(xì)胞和單核細(xì)胞之間的相互作用,以模擬致敏紅細(xì)胞在體內(nèi)被破壞的過程,同時結(jié)合抗體的紅細(xì)胞被單核細(xì)胞吞噬后,在吞噬細(xì)胞內(nèi)被裂解的這種紅細(xì)胞在體內(nèi)調(diào)理性吞噬的方式進(jìn)行設(shè)計的。這些功能細(xì)胞試驗可為我們在輸血前提供一個該血型同種抗體是否有臨床意義的評估,即在體外給我們模擬了一個輸血后體內(nèi)免疫應(yīng)答的預(yù)試驗。

4 血型基因診斷和臨床應(yīng)用

隨著血型遺傳學(xué)的迅速發(fā)展,通過分子遺傳學(xué)技術(shù)已經(jīng)能夠獨立地使血清學(xué)上的血型鑒定的困難或者不可能定型的血型鑒定出來。分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,使人們不斷報道出以前未知的血型等位基因。但同時常常發(fā)生假陰性和假陽性結(jié)果。隨著技術(shù)上的發(fā)展,定義不同的等位基因在人類血細(xì)胞上的表達(dá)已成為隨之而來的更為重要的工作。而發(fā)現(xiàn)等位基因的時代也隨之過渡到了探明基因表達(dá)階段的時代。比如,用為矩陣的自動定型方法來取代血清學(xué)定型。此外,PCR產(chǎn)物與探針雜交后,通過芯片掃描可分析熒光強度的方法能夠快速并且自動化地將供者和受者的血液進(jìn)行“完全”定型,以增加輸血的配合率,并將同種免疫反應(yīng)的危險性降到最低。

臨床上所發(fā)生的輸血反應(yīng)并不全都是有血型抗原的同種免疫造成的。有時,同樣的血輸給不同的人,會產(chǎn)生不同的結(jié)果。有研究發(fā)現(xiàn)惡性實體瘤、異基因干細(xì)胞移植、有糖尿病病史的患者產(chǎn)生同種免疫的風(fēng)險性較高。機體處于炎癥狀態(tài)時,免疫反應(yīng)可能增強等都有可能增加輸血反應(yīng)的發(fā)生。

綜上所述,在各種血型鑒定與配血試驗中,免疫血液學(xué)研究方法只有標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟,并沒有通用的、唯一的方法。各種血型抗原與抗體都有其自身的特性,我們需研究和選用更為合適的方法對樣本的血型進(jìn)行測定,已達(dá)到更為快速、準(zhǔn)確的血型定型。以便于提供安全、及時、有效臨床用血,解除患者的疾患。

[1]朱自嚴(yán),等.提高輸血療效必須首先完善輸血前血液的相容性試驗.中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志,2009,2:134-136.