多項式線性評價方案在分析測量范圍驗證中的應用

肖 勤，陽 蘋，張莉萍，畢小云，鄧小玲，陳維蓓

(重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科 400016)

分析測量范圍(analytical measurement range，AMR)是檢驗方法的重要分析性能，在ISO 15189(醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則)及美國臨床病理家協(xié)會(CAP)的認可中均明確提出須驗證定量檢測系統(tǒng)的AMR;因大多數(shù)檢驗方法習慣以單一標準來校準結果，原則上應在標準曲線呈通過原點的直線才可作這樣的處理;呈不通過原點的直線關系時，至少應使用兩點定標;呈拋物曲線狀時，應使用多點定標，在繪制的標準曲線上查閱結果[1]，所以實驗室應定期評估或驗證可報告范圍，為了評價反應響應是否有線性表現(xiàn)，有多種建議和意見[2-5]，本室利用廠家提供的線性驗證材料，采用多項式線性評價方案[6]進行AM R驗證，現(xiàn)將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器 儀器:羅氏公司Hitachi Modular DDP生化分析儀;試劑:羅氏公司原裝試劑;校準品:c.f.a.s(Calibrat or for Aut omated Systems)。

1.2 樣本 羅氏公司提供的PreciLinTM-S Solutions(Lot:58958967，Exp:2010-6)，包括3組系列濃度樣品，第 1組包含6個水平的總蛋白、清蛋白、膽固醇分析物，第2組包含6個水平的三酰甘油、鐵、鎂的分析物，第3組包含6個水平尿酸的分析物;各水平之間的分析物含量呈已知的相互關系，分析物含量涵蓋整個分析測量范圍。

1.3 檢測方法 用c.f.a.s校正分析檢測系統(tǒng)，各分析項目室內(nèi)質(zhì)量控制為在控，分別測定PreciLinTM-S Solutions樣本中各項目3次。其中 TP、ALB、UA、TG和 TC等5個項目可分別在2個D模塊測定，結果以 D1、D2區(qū)別，Mg在 P模塊測定。

1.4 結果計算 計算3次測定結果的平均值，并根據(jù)驗證物質(zhì)說明書中提供的各項目理論值的計算方式計算各標本中待測物的理論值。

1.5 線性評價數(shù)據(jù)擬合 利用SPSS11.5軟件將線性分析中測定結果分別擬合為1次(b0+b1x)、2次(b0+b1x+b2x2)和3次(b0+b1x+b2x2+b3x3)多項式，判斷各級多項式的系數(shù)是否有統(tǒng)計學意義，從而得到最適多項式。

1.6 結果判斷 如數(shù)據(jù)組的最佳擬合多項式為1次多項式，該數(shù)據(jù)組為純統(tǒng)計線性(線性1)。當數(shù)據(jù)組最佳擬合多項式是2次或3次多項式，將最佳擬合的多次方多項式與1次多項式(a+bx)進行比較，計算其偏離直線平均差異(average deviati on fr om linearity，ADL)并與百分區(qū)界(percent bound，Pct Bnd)比較，一般將Pct Bnd定義為5%。如ADL小于所要求的臨界判斷值，則多次方多項式定義為臨床可接受的線性(線性2)，否則為非線性。

2 結 果

2.1 第1次測定結果如表1所示，TC、TG、UA、和Mg為線性1，而TP和ALB呈非線性。

表1 各評價項目數(shù)據(jù)擬合結果

表2 采取糾正措施后的TP、ALB數(shù)據(jù)擬合結果

圖1 糾正前ALB

圖2 糾正后ALB

圖3 糾正前TP

2.2 不滿意項目對儀器進行保養(yǎng)及進行更換試劑，重新校準后再次測定驗證標本，評價結果為這兩個項目均為線性1，結果見表2;采取糾正措施前后兩次的線性分析結果見圖1～4。

圖4 糾正后TP

3 討 論

定量檢測項目AM R的驗證是驗證廠家說明書上所標明的線性范圍，在實際工作中對于檢測結果非常重要。為了評價反應響應結果是否具線性表現(xiàn)，有多種意見和建議，CAP和我國衛(wèi)生部臨床檢驗中心都相繼開展了評價線性與校準驗證的活動，均采用多項式線性評價方案，將統(tǒng)計中的非線性數(shù)據(jù)與臨床可接受的相關性有機地結合起來，大大提高了臨床實驗室對檢測項目線性評價的有效性，是目前較全面實用的線性評價方案[7-10]。

本實驗室也參加了衛(wèi)生部臨床檢驗中心的該項室間質(zhì)評活動，但該項質(zhì)評活動每年僅有1次，不能滿足實驗室對于校準及校準驗證的要求，所以本實驗室探索使用羅氏的線性驗證材料進行評價，每個項目組由6個已知分析物含量間關系的標本組成，每份標本重復測定3次，利用分析物之間的相互關系計算理論值，用S PSS11.5軟件進行數(shù)據(jù)擬合，可以得到數(shù)據(jù)擬合的3級多項式、擬合圖形和方差分析結果，判斷各級多項式的系數(shù)是否有統(tǒng)計學意義，從而得到各檢驗項目的最適多項式。采用該方法進行線性評價可及時分析測定結果，對于性能不可接受的項目能及時采取糾正措施，如本室第1次 TP和ALB評價結果為非線性，從圖1和圖3可以看出實測結果與理論值間呈拋物線關系，即使棄去高濃度或低濃度后重新評價仍為非線性，提示應分析性能不佳的原因，因該線性驗證材料為液體即開即用型，不可能發(fā)生準備或保存不當?shù)那闆r，可基本排除分析前因素的影響;經(jīng)再次核對檢測結果后未發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)記錄錯誤，數(shù)據(jù)處理符合要求，也可排除分析后因素;將重點放在查找分析中原因，發(fā)現(xiàn)機上試劑已接近廠家提供的試劑開瓶后穩(wěn)定期，遂更換試劑，重新校準后測定驗證材料，得到了滿意的結果，提示需特別重視試劑開瓶后的穩(wěn)定性。

本次驗證結果表明被評價項目在評價的濃度范圍內(nèi)是呈線性的，可用單點定標做校準，但在6個月后以及有下列情況發(fā)生時應進行一次校驗，如儀器或檢測系統(tǒng)進行過一次大的預防性維護或者更換了重要部件;質(zhì)控反映出異常趨勢或偏移，或者超出了實驗室規(guī)定的接受限，采取一般性糾正措施后，不能識別和糾正問題時。最后特別強調(diào)所有進行過的校準和在進行校準驗證工作時必須記錄并寫成文件。

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