山西省黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性檢測

趙曉軍 張 鑫 周建波

（山西省農業科學院植物保護研究所，山西太原 030031）

灰霉病是保護地黃瓜的主要病害之一，給黃瓜生產造成了很大損失。黃瓜灰霉病主要為害黃瓜的幼瓜和葉片，病菌從雌花的花瓣侵入，花瓣腐壞，瓜蒂頂端開始發病，瓜蒂感病向內擴展，致使感病果實呈灰白色，軟腐，長出大量灰綠色霉菌層（孫茜一，2006）。目前控制該病害的主要手段仍為化學防治，二甲酰亞胺類殺菌劑腐霉利是國外20世紀70年代開發的對灰葡萄孢有高度活性的一類殺菌劑。20世紀80年代引入我國后，作為對灰葡萄孢的高效殺菌劑，二甲酰亞胺類殺菌劑取代了苯并咪唑類殺菌劑而得到廣泛應用，曾有過較好的防效，但在我國很多地區已有灰霉菌對其產生抗藥性的報道（劉波和葉鐘音，1992；黃金寶和李明遠，1994；李林和徐作埏，1997；劉德榮和謝丙炎，2001）。

山西省保護地蔬菜種植歷史長，面積廣，近年來呈逐年增長趨勢。黃瓜作為保護地蔬菜種植的重要品種，種植面積也快速增加，然而黃瓜灰霉病的普遍發生卻嚴重影響了黃瓜的產量。腐霉利作為當地的常用藥劑，用藥歷史較長，田間防治效果明顯下降，究其原因可能是灰霉病菌對此類藥劑產生了抗藥性，早在2003年韓巨才等（2003）對山西省蔬菜類灰霉病菌進行了腐霉利的抗藥性監測，本試驗檢測了近年來山西省黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平，以期為黃瓜生產提供指導。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

96 %腐霉利原藥，由浙江禾益農化有限公司提供。

1.2 供試菌株的采集、分離和鑒定

從山西省保護地黃瓜主要種植區采集黃瓜灰霉病病果和病葉，以大棚或溫室為單位采集病樣，一個大棚或溫室采集一個典型病果或病葉，菌樣以“采樣地點（縣或村）的大寫拼音（聲母）+序號”命名。

將病樣帶回實驗室，在無菌操作條件下純化保存菌種，以進行病原菌抗藥性室內生物測定。

參照魏景超（1979）的方法鏡檢灰霉病菌株。灰霉病菌屬半知菌亞門葡萄孢屬真菌，其分生孢子梗直或屈曲，褐色，光滑，分枝，分枝末端常明顯膨大，形成無色或淡色的瓶狀產孢細胞。產孢細胞多芽生，分生孢子圓形至橢圓形，單細胞，無色或灰色，大小（5.50～16.00）mm×（5.00～9.25）mm，聚集成灰色孢子堆（魏景超，1979；呂佩柯 等，1992）。

1.3 供試藥劑的配制

腐霉利原藥以丙酮為溶劑配成濃度為1 000 μg·mL-1的母液，后用無菌水分別稀釋為500、100、10、1、0.5、0.1 μg·mL-1的系列濃度溶液。

1.4 含藥PDA培養基的制作

馬鈴薯去皮切成小塊稱取定量，加水煮沸30 min后用雙層紗布過濾去渣，取上清液定容。再加入葡萄糖，煮沸直至完全融化后加入瓊脂粉，攪拌待完全融化后分裝到三角瓶中。分裝時，三角瓶中培養基與藥液體積比為9∶1，對照以蒸餾水代替藥液，封口濕熱滅菌后即可使用。

1.5 抗藥性室內生物測定方法

首先將冷凝的含藥培養基溶化，然后冷卻至 50～60 ℃后在無菌條件下將含藥培養基倒入直徑9 cm的培養皿中鋪平，每皿約10 ML，每處理設3次重復。

測定灰霉病菌的抗性水平采用 FAO推薦的菌落生長速率法（周明國 等，1987），用直徑5 mm的打孔器沿灰霉菌菌落生長邊緣切取菌塊，分別放入系列濃度含藥培養基平板中心。23～25 ℃條件下培養3 d后用十字交叉法測量菌落直徑，計算各菌株對腐霉利的EC50值，分析其抗性水平。

1.6 抗性頻率、抗性水平和抗性類型

根據抗性水平將不同的黃瓜灰霉病菌株分為5個類型:敏感型（S），抗性水平＜1倍；低抗型（LR），1倍≤抗性水平＜10倍；中抗型（MR），10倍≤抗性水平＜100倍；高抗型（HR），100倍≤抗性水平＜1 000倍；特高抗型（SR），抗性水平≥1 000倍。

2 結果與分析

2.1 菌株采集分離

分別于山西省8個地區的黃瓜主要種植區進行采樣，并分離得到177株黃瓜灰霉病菌株。其中太原市15株，晉中市25株，長治市24株，臨汾市19株，運城市34株，晉城市26株，朔州市23株，大同市11株。

2.2 黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平

根據周明國和葉鐘音（1991）的研究結果，將黃瓜灰霉病菌對腐霉利的敏感基線定為1 μg·mL-1。如表1、2所示，在檢測的177株菌株中有敏感菌株34株，低抗菌株76株，中抗菌株64株，高抗菌株3株，無特高抗菌株。所測灰霉病菌株對腐霉利的抗性水平最高 256.6倍，最低0.003倍，平均抗性水平13.9倍，其中太原市20.1倍、晉中市21.1倍、長治市26.5倍、臨汾市 12.3倍、運城市 13.6倍、晉城市7.0倍、朔州市3.5倍、大同市3.5倍。

表1 黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平

續表

2.3 黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性頻率

本試驗所檢測的177株黃瓜灰霉病菌株中有34株敏感菌株，143株抗性菌株，對腐霉利的總體抗性頻率為 81.36 %。各地區黃瓜灰霉病菌株對腐霉利的抗性頻率分別為:太原市53.33 %、晉中市84.00 %、長治市100.00 %、臨汾市78.95 %、運城市85.29 %、晉城市84.62 %、朔州市69.57 %、大同市81.82 %（圖1）。

表2 山西省各地區黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平

圖1 山西省各地區黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性頻率

3 結論與討論

由本試驗結果可知:從抗性頻率來看，山西省保護地黃瓜主要種植區的灰霉病菌對腐霉利普遍產生抗藥性，各調查地區黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性頻率均在50 %以上，其中長治市最高，運城市次之，之后依次為晉城市、晉中市、大同市、臨汾市、朔州市、太原市；從抗性水平來看，山西省保護地黃瓜主要種植區的灰霉病菌對腐霉利的總體抗性水平較低，各調查地區黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平有所差異，其中長治市最高、晉中市次之，之后太原市、運城市、臨汾市、晉城市，大同市及朔州市抗性水平依次降低。

山西省保護地黃瓜主要種植區的灰霉病菌對腐霉利普遍產生了抗藥性，但抗性水平較低，分析原因:山西省保護地黃瓜種植歷史較長，種植戶普遍使用主要成分為乙霉威和腐霉利的藥劑防治黃瓜灰霉病，且出現了用藥過量和過頻的現象，導致了保護地黃瓜灰霉病菌普遍對腐霉利產生抗藥性；山西省北部地區相對南部地區抗性水平較低，分析原因:北部地區氣溫偏低，往年僅在夏季大田種植蔬菜，蔬菜生長季間隔期長，灰霉病發生較少。近幾年，隨著保護地蔬菜種植面積不斷擴大，為灰霉病菌的發生和流行提供了有利條件，蔬菜灰霉病發生日趨嚴重，農藥使用頻率也不斷提高，經調查發現，北部地區的蔬菜種植戶過頻地使用腐霉利進行煙熏或噴霧，從而導致灰霉病菌對其普遍產生了抗藥性，但相對南部和中部地區發病較輕，用藥相對較少，用藥歷史較短，所以灰霉病菌的抗性水平相對較低。中部地區如太原市從抗性水平上看和南部地區差不多，因為有一個樣本抗性水平極高，造成平均數上揚，但抗性頻率較南部地區低，總體上相對于南部地區較低。所以山西省保護地黃瓜主要種植區的灰霉病菌對腐霉利抗藥性呈由南到北逐漸降低的趨勢。

盡管山西省保護地黃瓜主要種植區的灰霉病菌對腐霉利的總體抗性水平較低，但已普遍產生了抗藥性，因此黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗藥性已成為山西省保護地黃瓜生產上的一個重要問題，開展保護地黃瓜灰霉病菌對二甲酰亞胺類殺菌劑的抗藥性治理勢在必行。病原菌抗藥性治理一般采用的治理策略有:① 加強田間抗藥性監測；② 科學使用農藥，減少甚至停用已產生抗藥性的同類型藥劑，尋求新的替代類型，以及合理進行殺菌劑的輪換和混配；③ 開展綜合防治。該項工作是一項長期而艱巨的任務，主要表現在周期長、見效慢、需地區間統籌規劃，值得進一步深入探討。

韓巨才，閆秀琴，閻秀琴，張永杰．2003．灰霉病原菌對速克靈的抗性監測．山西農業大學學報:自然科學版，23（4）:299-303.

黃金寶，李明遠．1994．不同地區灰霉病菌對速克靈的抗性及對策．中國植病學會華北分會論文集:54.

李林，徐作埏．1997．山東省灰霉菌對速克靈、多菌靈田間抗性檢測研究初報．山東農業科學，（3）:32-35.

劉波，葉鐘音．1992．速克靈抗性灰霉病菌菌株性質的研究．植物保護學報，19（4）:29-30.

劉德榮，謝丙炎．2001．應用特異等位PCR快速鑒定灰霉病菌抗苯來特與乙霉威菌株．菌物系統，20（2）:238-243.

呂佩柯，李明遠，吳鋸文，易齊，張寶棣，姜克英，文奇，李明周，王潤初．1992．中國蔬菜病蟲原色圖譜．北京:中國農業出版社:6-13.

孫茜一．2006．黃瓜疑難雜癥圖片對照診斷與處方．北京:中國農業出版社:14-15.

魏景超．1979．真菌鑒定手冊．上海:上海科學技術出版社:259-516.

周明國，葉鐘音，劉經芬．1987．南京市郊灰霉菌對苯并咪唑類殺菌劑田間抗性的檢測．南京農業大學學報，（2）:53-57.

周明國，葉鐘音．1991．交鏈孢霉對速克靈的抗藥性研究．植物保護，17（2）:6-7.