表皮生長因子、雌二醇及其受體與肝癌分期的關系及意義

陳進國 孔先一 吳洪文

原發性肝癌(primary liver cancer, PLC)(以下簡稱肝癌)是常見的惡性腫瘤，嚴重危害人類的健康。肝癌的發生機制目前尚未完全闡明，研究發現，表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)及其受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)在肝癌有過表達現象，與肝癌的形成、發生、發展有密切關系[1]。近年雌二醇(estradiol,E2)及其受體(estrogen receptor, ER)與肝癌的關系受到關注。本研究對40例不同分期肝癌組織進行EGF、EGFR、E2和ER檢測，旨在進一步探討其與肝癌分期的關系和意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇我院2007年1月～2007年12月行肝癌切除術的40例男性患者為研究對象，乙肝血清標志物至少一項陽性，除外轉移性肝癌、術前化療或放療的患者。年齡17～66歲，平均年齡(50.2±9.0)歲。采用2001年中國抗癌協會肝癌專業委員會制定的原發性肝癌診斷及分期標準[2]，其中I期15例，II期17例，III期8例。

1.2 檢測試劑 兔抗人EGF抗體購自武漢博士德生物工程公司，即用型鼠抗人EGFR單克隆抗體、鼠兔通用型S-P試劑盒和聯苯二氨(DAB)顯色試劑均購自福州邁新生物技術開發有限公司。即用型兔抗人E2多克隆抗體及鼠抗人ER單克隆抗體均為美國SIGNET公司產品。

1.3 檢測方法 取檢測標本組織制作石蠟切片，用免疫組織化學鏈親和素-過氧化物酶(S-P)法檢測EGF、EGFR，用已知的陽性片作陽性對照，用PBS代替一抗染色做空白對照。用免疫組織化學鏈親和素-過氧化物酶(S-P)法檢測E2、ER，以乳腺癌陽性片作為陽性對照，用PBS代替一抗染色做空白對照。以細胞漿和細胞膜出現棕黃色顆粒作為陽性細胞，任意選擇5個高倍鏡視野(×400倍)，每個視野計數100個細胞，根據陽性細胞的百分比判斷：無陽性著色或陽性著色＜10%為陰性，陽性著色≥10%為陽性。

1.4 統計學處理 應用SPSS12.0軟件對結果進行統計處理。計數資料采用x2檢驗，取P＜0.05為顯著性差異。

2 結果

見表1。

從表1中可見，I期、II期、III期肝癌EGF和EGFR陽性率逐漸增高。I期陽性率明顯低于II期和III期(P＜0.05)；II期陽性率低于III期但無統計學差異(P 0.05)。從表2中可見，I期、II期、III期肝癌E2、ER陽性率隨肝癌進展逐漸降低；除I期E2陽性率顯著高于III期(Fisher精確概率P=0.017)外，其于各組無顯著性差異(P＞0.05)。

表1 EGF、EGFR表達與肝癌分期的關系

表2 E2、ER表達與肝癌分期的關系

3 討論

本研究發現，隨肝癌進展EGF和EGFR陽性率逐漸升高，Ⅱ期、Ⅲ期明顯高于Ⅰ期(P＜0.05)。EGF、EGFR與肝癌發展、轉移有密切關系。EGF是一種強有力的細胞分裂促進因子，存在于人體組織和細胞外液，具有廣泛的生理作用，與胚胎發生與生長、組織修復和再生以及腫瘤發生等均有密切關系。EGFR是原癌基因c-erbB-1(HER-1)的表達產物，是一種跨膜糖蛋白，定位于細胞膜上，由膜外區、跨膜區和胞內區三部分組成，其細胞內段有酪氨酸激酶活性。EGFR可以促進腫瘤細胞的增殖、血管生成、粘附、侵襲和轉移，抑制腫瘤細胞凋亡[3]。EGF通過與EGFR結合發揮生物學效應。EGF與EGFR結合后，可通過離子通道、信號傳導及基因表達等機制促進肝癌細胞DNA合成、促進肝癌發生與發展[1]。

許多因素與肝癌發展、轉移有關，EGF和EGFR促進腫瘤細胞生長、腫瘤血管及間質生成，促進肝癌發展、轉移及復發。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作為最關鍵的血管生成促進因子，在肝癌發展、轉移中發揮重要作用[4-5]。Huang等[6]發現EGF和低氧是刺激VEGF表達的基本因素，二者可以促進VEGF表達。血小板凝血酶敏感蛋白-1(thrombospondin,TSP-1)在腫瘤血管及間質的生成中發揮重要的作用，Okamoto等[7]在人肝癌細胞HuH-7中加入EGF可以顯著上調細胞中TSP-1的水平。Zhang等[8]在肝癌細胞株HepG2中加入外源性的EGF，發現肝癌細胞表達骨橋蛋白(osteopontin,OPN)明顯增加，OPN在腫瘤轉移中發揮重要作用，并且發現EGF可以通過EGF/PI3K旁路信號表達，引起OPN過表達，促進肝癌轉移。EGF可促進肝癌尿激酶型纖溶酶原激活物受體(urokinase type plasminogen activator receptor,uPAR)表達，在腫瘤的浸潤和轉移中發揮重要作用。Guerrero等[9]發現，EGFR在uPAR刺激后起轉導作用，介導高度惡性腫瘤細胞中尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,uPA)引起的增殖作用。EGF和EGFR對肝癌的作用機制復雜，有待進一步研究。

雌激素及其受體與肝癌關系密切，大量資料證實外源性的雌激素長期刺激可導致肝細胞腫瘤發病率的升高，HCC是一種雌激素依賴性腫瘤[10-11]。此前我們研究發現[12]肝硬化、肝癌有E2、ER表達增高，肝硬化期就已經存在E2、ER含量的增多，在肝硬化向HCC轉變的過程中，E2發揮重要的促進作用。

本研究發現，I、II、III期肝癌E2和ER陽性率隨肝癌進展逐漸降低；在研究中亦發現隨腫瘤直徑增大，E2和ER的陽性率呈下降趨勢。從不同肝癌分期的研究結果可以推測在肝癌的早期發生發展及轉移過程中，E2、ER發揮著重要作用，而在晚期肝癌中，E2、ER不再發揮重要作用。

從本研究可以得出以下結論：隨肝癌分期發展EGF、EGFR和E2、ER表達呈不同變化趨勢，在肝癌發生、發展和轉移的具有不同作用。

[1]王文奇,徐瀚峰.表皮生長因子及其受體與肝癌的關系[J].國外醫學腫瘤學分冊,2005,32(3):212-214.

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[12]吳洪文,白文坤,王文奇.原發性肝癌雌二醇及其受體的表達及意義[J].實用肝臟病雜志,2007,10(2):92-93.