土牛膝提取物對正常及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖的影響

馬文杰 魏得良 黃志芳 黃志紅 胡吉林 劉大鵬

土牛膝，別名倒扣草，《中國藥典匯編》對土牛膝有如下記載：藥性：苦、涼。歸肺、脾、肝、膀胱經。藥效：敗毒抗癌、逐淤除痹，消炎利尿。現代醫學研究證明，土牛膝具有改善機體微循環，調整新陳代謝，改善免疫功能等作用，具有明顯的抗炎抗菌作用、鎮痛作用、抗衰老作用等[1-3]。近年來有研究表明牛膝含有的成分齊墩果酸、牛膝多糖具有治療糖尿病的功效[4-6]，但土牛膝提取物在治療糖尿病方面的研究尚無報道。本研究以本地野生土牛膝為原料，經過提取、分離、過濾、干燥得到土牛膝提取物齊墩果酸、牛膝多糖，觀察土牛膝提取物對正常小鼠以及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖的影響，如果能確定土牛膝提取物齊墩果酸、牛膝多糖也具有降糖作用，將對糖尿病的治療具有重要意義。

1 材料

1.1 土牛膝提取物齊墩果酸、牛膝多糖 取干燥土牛膝(湖南郴州郊外野生)150g，制成細塊狀藥材，用冷水浸泡20min后取出，置煎鍋中，加6倍量的水，大火加熱水煮，經濃縮、過濾、干燥，得齊墩果酸精品[7]。另取一份同樣藥材，用75%乙醇回流提取，經過抽濾、洗滌、低溫干燥得到牛膝多糖精品[8]。臨用前用生理鹽水配成所需濃度。

1.2 動物 昆明種小鼠，體重20～25g，雄性，湘南學院醫學動物實驗中心提供。

1.3 試劑和儀器 四氧嘧啶(Alloxan)北京恒業中遠化工有限公司；生理鹽水(自制)；肝素鈉，天津藥業焦作有限公司；降糖靈25mg/片，山東仁和堂藥業有限公司，批號：080612；鄰甲苯胺，海寧市通元化工廠；吐溫-80，樂山科立鑫化工有限責任公司；其余試劑均為市售分析純。電子天平,上海精密儀器儀表有限公司；離心機，江蘇牡丹離心機制造有限公司；722型分光光度計，上海天翔光學儀器有限公司；小鼠用灌胃針頭。

表1 齊墩果酸(OA)對高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

表1 齊墩果酸(OA)對高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

注：a.與模型小鼠對照組比較，P＜0.001。

組別 給藥前平均血糖濃度 給藥后平均血糖濃度空白對照組 5.36±0.40 5.55±0.38模型對照組 18.7±30.57 19.00±0.60 OA低劑量組 18.62±0.67 14.41±0.57a OA中劑量組 19.11±0.52 13.66±0.40a OA高劑量組 19.05±0.68 12.28±0.50a陽性對照組 18.33±0.36 14.34±0.42

2 方法與結果

2.1 有效劑量的換算 參考徐叔云教授主編的《藥理實驗方法學》[9]，通過人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值來進行換算，通過計算，每只小鼠的保守有效劑量是1.82g·kg-1。

2.2 土牛膝提取物齊墩果酸、牛膝多糖劑量組配制 精確稱取齊墩果酸(OA)，加入2%的土溫-80助溶；另精確稱取牛膝多糖(ABPS)，用生理鹽水稀釋至100ml，配制成高、中、低劑量組；待用。

2.3 實驗性糖尿病模型的制作 將四氧嘧啶用生理鹽水配成濃度為0.7%的溶液。取昆明種小鼠，試驗前禁食12h,腹腔注射四氧嘧啶0.12g·kg-1,第2天同樣在禁食12h后腹腔注射四氧嘧啶0.1g·kg-1，72h后從小鼠眼眶或尾靜脈取血，用鄰甲苯胺法測血糖，選給藥后血糖值＞13.8mmol·L-1者作為糖尿病小鼠。

2.4 齊墩果酸(OA)對小鼠血糖的影響 將糖尿病模型鼠隨機分為5組，每組10只，分別為模型對照組(生理鹽水)，土牛膝提取物齊墩果酸3個劑量組(4、8、12g·kg-1)，陽性對照組(降糖靈10g·kg-1)；另設空白對照組(OA12g·kg-1)，均按20ml·kg-1·d-1體積灌胃給藥，連續給藥14d。在末次給藥前12h禁食，給藥1h后眼眶或尾靜脈取血，用鄰甲苯胺法測定血糖值，所得數據進行組間t檢驗。由表1可見，齊墩果酸灌胃的正常和生理鹽水的小鼠,血糖無明顯影響，與糖尿病模型對照組比較，高、中、低劑量組能顯著降低四氧嘧啶模型小鼠的血糖(P＜0.001)，與對照組(降糖靈)有相似的降糖效果。

2.5 牛膝多糖(ABPS)對小鼠血糖的影響 將糖尿病模型鼠隨機分為5組，每組10只，分別為模型對照組(生理鹽水)，土牛膝提取物牛膝多糖3個劑量組(2、4、8g·kg-1)，陽性對照組(降糖靈0.1g·kg-1)；另設空白對照組(ABPS12g·kg-1)，同上方法給藥，測定血糖值，所得數據進行組間t檢驗。由表2可見，灌胃的正常和生理鹽水的小鼠，血糖無明顯影響，與糖尿病模型對照組比較，高、中、低劑量組能顯著降低四氧嘧啶模型小鼠的血糖(P＜0.001)，與對照組(降糖靈)具相似降糖效果。

表2 牛膝多糖(ABPS)對高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

表2 牛膝多糖(ABPS)對高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

注：a.與模型小鼠對照組比較，P＜0.001。

組別 給藥前平均血糖濃度 給藥后平均血糖濃度空白對照組 5.40±0.34 5.54±0.37模型對照組 18.83±0.74 19.01±0.74 ABPS低劑量組 18.90±0.76 16.73±0.6a ABPS中劑量組 18.72±0.75 15.15±0.65a ABPS高劑量組 19.03±0.70 14.28±0.85a陽性對照組 18.33±0.36 14.34±0.42

3 討論

實驗結果表明土牛膝提取物齊墩果酸、牛膝多糖能夠降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖水平，對糖尿病小鼠有較好的治療作用，降血糖作用和劑量相關。另外，對正常動物血糖影響較小，有利于今后開發成為低毒的降糖中藥制劑。但其降糖機理還有待于進一步的深入研究。

[1]史玉芬,鄭延彬.牛膝抗炎、抗菌作用的研究[J].中藥通報,1988,13(7):44-47.

[2]陸兔林,毛春芹,張麗.牛膝不同炮制品鎮痛抗炎作用研究[J].中藥材,1997,20(10):507-509.

[3]馬愛蓮,郭煥.懷牛膝抗衰老作用研究[J].中藥材,1998,21(7):360-362.

[4]唐黎明,呂志鈞,張小萍,等.牛膝多糖藥效學研究[J].中成藥,1996,18(5):31-33.

[5]郝志奇,王瑛.齊墩果酸對小鼠的降血糖作用[J].中國藥科大學學報,1991,22(4):210.

[6]李海泉.牛膝多糖降糖作用實驗研究[J].安徽醫藥,2004,8(5):326-327.

[7]歐艷,徐耀華.牛膝中齊墩果酸的提取工藝[J],2003,14(3):65-69.

[8]陳曉明，徐愿堅，田庚元,等.牛膝多糖的理化性質研究及結構確證[J].藥學學報,2005,40(l):32-35.

[9]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].北京:人民衛生出版社,2002:202-204.