自擬中藥方對乳房炎病原菌的藥敏試驗及臨床療效觀察

王桂英,牛鐘相

(1.聊城大學農學院,山東 聊城 252059;2.山東農業大學動物科技學院,山東 泰安 271018)

隨著奶牛養殖業的不斷發展,奶牛乳房炎的發生有增加趨勢,對奶牛業的健康、可持續發展形成了巨大威脅。而傳統的防治乳房炎多采用抗生素和化學藥物,由于長期大量應用該類藥物,導致耐藥性菌株的不斷發生和奶中藥殘的增加,因而,盡快研制替代抗生素和化學藥物的新型制劑勢在必行。

中藥屬于天然物質,它可以調節機體的特異性和非特異性免疫,具有解熱、鎮痛、抗炎等作用[1]。在治療乳房炎方面具有獨特的功效。本試驗選用自擬的中藥方劑對引起臨床型乳房炎的4種主要病原菌進行了藥敏試驗,并根據藥敏試驗的結果進行了臨床療效觀察。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 聊城市郊區3個奶牛場患臨床性乳房炎的奶牛,其中北楊集牛場11頭,道口鋪牛場的9頭,徐營牛場的10頭。

1.2 試驗菌種 從3個牛場臨床型乳房炎的奶樣中,分離鑒定的葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌、酵母菌4種主要病原菌。

1.3 復方中藥 蒲公英、野菊花、金銀花、連翹、漏蘆、白芷、木通、天花粉(孕畜禁用,可用牛蒡子代替)、皂角刺、瓜蔞、浙貝母、小薊、白茅根。按一定的比例組成自擬的復方,中藥均購自聊城市利民藥業有限公司。

1.4 培養基 營養瓊脂、血清瓊脂、沙保勞氏、血清肉湯培養基,其中營養瓊脂,營養肉湯及沙保勞氏培養基均購自杭州天和微生物試劑有限公司,批號為200702210。

1.5 藥敏試驗中藥液的制備 取上述中草藥復方120 g,加1000mL蒸餾水浸泡2 h,然后煎煮,武火煎煮沸騰后再用文火煎30 min,8層紗布過濾,再加熱水600mL煎煮30 min,過濾,合并兩次濾液待溶液冷卻后3000 r/min離心20 min,取上清液文火加熱濃縮成1 g/mL藥液,然后裝入250mL生理鹽水瓶中,121℃30 min高壓蒸汽滅菌,把滅菌好的中藥原液分別稀釋0、2、4、8倍,分裝在滅菌好的生理鹽水瓶中,4℃冰箱冷藏保存備用。

1.6 藥敏紙片的制備 用打孔器將濾紙制成直徑為6 mm的紙片,每50片放入青霉素小瓶中,瓶口用牛皮紙包扎。121℃高壓蒸汽滅菌30 min,干燥后用微量移液器向裝有紙片的小瓶中分別加入已滅菌好的各個濃度的中藥藥液0.50mL,待濾紙片均勻吸凈藥液后,放入4℃冰箱冷藏3 h取出備用。

1.7 菌液的制備 將分離鑒定的葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌、酵母菌分別接種2mL營養肉湯培養基(鏈球菌需接種在血清肉湯內),37℃增菌培養24 h,取出后的菌液用生理鹽水稀釋1000倍,稀釋后的菌液應在15 min內接種。

1.8 藥敏試驗 采用紙片擴散法,貼好紙片的平皿,置37℃溫箱培養16～24 h觀察結果。對于抑菌圈不明顯的和抑菌圈過大的平板要做補充試驗。每個牛場相同的菌種取兩株,分別對不同濃度中藥液作敏感試驗,取平均值作為試驗結果。抑菌效果判定標準按《中藥藥理學》標準:≥20 mm為極敏;15～19 mm為高敏;10～14 mm為中敏;10 mm以下為低敏[2]。

1.9 治療試驗中藥液的制備 取復方中藥共350 g,加 2500mL的水浸泡30 min,然后煎煮,武火煎煮沸騰后再用文火煎30 min,過濾得到第一次中藥液。再將剩余的藥渣加熱水1000mL煎煮30 min,過濾,合并兩次濾液待藥液冷卻后給牛灌服。

1.10 治療方法和劑量 每頭牛每天灌服復方中藥制劑1付,連用6 d后判斷其療效。

1.11 臨床型乳房炎療效的判定的標準 治愈:乳房紅腫熱痛硬癥狀消失,乳汁肉眼觀察正常,產奶量基本恢復。好轉:乳房紅腫熱痛硬癥狀減輕,乳汁中有少量絮狀物,但乳汁的色澤無異常,產奶量回升。無效:判斷標準中的各臨床癥狀未減輕或加劇。有效率為治愈率和好轉率之和。

2 結果與分析

2.1 藥敏試驗結果 不同濃度的中藥液對4種病原菌的抑菌效果見表1。

表1 復方中藥對分離病原菌藥敏試驗結果

由表1可見,中藥原液:對酵母菌的抑菌效果最好,表現為極敏;對鏈球菌和葡萄球菌抑菌效果表現為高敏或中敏;對大腸桿菌的抑菌效果最差。2倍稀釋液:對酵母菌抑菌效果表現為高敏;對鏈球菌和葡萄球菌抑菌效果則表現為中敏或低敏;對大腸桿菌沒有抑菌作用。4倍稀釋液:只對酵母菌有抑制作用。3個牛場的分離菌對不同濃度的中藥液的敏感性及耐藥性沒有差異。

2.2 臨床療效觀察結果 見表2。

表2 奶牛乳房炎臨床治療試驗結果

由于藥敏試驗只反映中藥制劑在體外對病原菌的敏感性及耐藥性,試驗結果并不能完全代表體內抗菌作用效果,因此有必要對該中藥復方的臨床療效進行試驗。試驗結果見表2,由表2可以看出自擬的中藥復方對3個奶牛場的臨床型乳房炎均有很好的治療效果。

3 討論

3.1 自擬中藥方的體外抑菌效果 中藥的原液和2倍稀釋液對鏈球菌、葡萄球菌抑菌效果較好,而4倍和8倍稀釋液的抑菌效果較差或者起不到抑菌作用。這一點與袁晨報道一致[3]。但中藥的原液對大腸桿菌的抑菌效果及2倍稀釋液對葡萄球菌的抑菌效果并不理想,與安回鳳等報道的基本一致[4]。本試驗中藥組方對酵母菌體外的抑菌效果很好,其原液和2倍稀釋液的抑菌效果達到了高敏。并且用此中藥方劑在臨床上治療有真菌混合感染的臨床型乳房炎取得了很好的效果。因此用該中藥復方來治療真菌性乳房炎在獸醫臨床上值得借鑒。

其次本試驗所測的中藥復方的提取液對鏈球菌、葡萄球菌、大腸桿菌的最低抑菌濃度比李少基報道的要高[5]。這可能與菌種的來源、種類及中藥的產地有關,同時藥物本身的特性及試驗方法對結果也有一定的影響。所以臨床上還需要對此復方作進一步的改進。

3.2 自擬中藥復方的解析 本試驗根據乳房炎的發病機理和中藥藥性,選取具有清熱解毒、抗菌消炎、活血化瘀、消腫散結、提高機體免疫力的9種中藥 :蒲公英、野菊花 、金銀花 、連翹 、漏蘆、白芷、木通、天花粉(孕畜禁用,可用牛蒡子代替)、皂角刺組成臨床上治療奶牛乳房炎的基礎方劑,患牛沒有臨床癥狀只是乳汁的顏色及質地有異常的可用基礎方劑,患牛有臨床癥狀的可在此方劑的基礎上辨證加減,如果乳房腫硬有結塊在此方劑的基礎上加瓜蔞、浙貝母,如果乳房出血在此方劑的基礎上加小薊、白茅根。臨床治療劑所用劑量是做藥敏試驗劑量的3倍,一般服用3劑后,癥狀基本減輕,服用6劑后,全身癥狀消失,乳房復原,產奶正常。對于有真菌混合感染的病例,治療效果也很好。試驗結果表明,自擬中藥方劑在體外有直接的抑菌作用,在體內也與臨床療效相吻合。

[1]齊琳,李慶章,林葉,等.中草藥防治奶牛(山羊)乳房炎的作用機理及應用前景[J].畜牧獸醫科技信息,2008,16(2):10-12.

[2]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].北京:人民衛生出版社,1985.

[3]袁晨,張仲文,王典仁.連翹等8種中藥對奶牛乳房炎致病菌的藥敏試驗結果[J].當代畜牧,2005,10(5):15-17.

[4]安回鳳,張清香,孫景,等.不同方法制備的中草藥原液體外抑菌的效果試驗[J].上海畜牧獸醫通訊,2006,12(3):43-44.

[5]李少基,陳武,陳足金.12種中草藥的體外抑菌試驗[J].中獸醫醫藥雜志,2004,23(1):44-45.