豬鏈球菌河北分離株生物學特性的試驗

袁萬哲，陳立功，朱玉濤，張競乾，景 翠，岳春陽，魏苗苗，黃海瓊，呂 爽，孫繼國

(河北農業大學動物科技學院，河北保定071001)

豬鏈球菌病是由C、D、F群及L群等鏈球菌引起的豬的多種疾病的總稱。在臨床上可呈現不同的癥狀，如敗血癥、腦膜腦炎、心內膜炎、肺炎、化膿性淋巴結炎、關節炎等，還常常與其他疾病合并感染，發病率和死亡率較高。該病分布范圍極廣，世界各地均有發生。隨著規模化集約化程度的提高，豬鏈球菌病也屢有發生，給養豬生產造成了一定損失。本工作在流行病學調查的基礎上，對豬鏈球菌河北分離株的形態、生化特性、溶血特性、藥物敏感及其致病性等生物學特性進行試驗，報告如下。

1 材料與方法

1.1 病料 對河北省保定和承德等地區豬場疑似鏈球菌病的病死豬及時剖檢，無菌采取豬的肺臟、肝臟、脾臟、腎臟、淋巴結、腦組織和關節腔液。

1.2 試劑 微量生化發酵管，購自杭州天和微生物試劑有限公司；氟苯尼考等藥物原料由保定市冀農動物藥業公司提供；注射用硫酸鏈霉素和硫酸慶大霉素注射液為華北制藥股份有限公司生產；藥敏紙片參考文獻[3]自制。

1.3 實驗動物 體重20～25 g健康昆明系小鼠購自河北大學醫學部實驗動物中心。

1.4 直接涂片鏡檢 無菌采取病豬的肺臟、肝臟、脾臟、腎臟、淋巴結、腦組織和關節腔液涂片，經革蘭染色后直接鏡檢。

1.5 培養特性及形態觀察 將涂片鏡檢中發現有革蘭陽性成雙或短鏈狀球菌的病料劃線接種鮮血瓊脂平板，37℃培養24 h，挑取平板上單個可疑菌落涂片染色鏡檢，確定為鏈狀球菌后，置 4℃冰箱備用。

1.6 溶血試驗 以平板法測定6株鏈球菌的溶血特性。將鏈球菌接種于鮮血瓊脂平板，37℃培養24 h后觀察，根據菌落周圍出現溶血圈的情況進行判斷。

1.7 生化特性鑒定 上述純化的6株分離菌分別用疊氮鈉血平板，純培養24 h后，選用微量生化發酵管進行糖發酵及其他生化試驗。

1.8 動物致病性試驗 取6株豬鏈球菌純培養物，經平板計數后濃度調至 1×109CFU/mL，按0.2 mL、0.5 mL腹腔各接種3只小鼠，另設3只作空白對照。隔離飼養，觀察發病及死亡情況。對死亡的小鼠剖檢，觀察病理變化，采集臟器染色鏡檢，并于鮮血瓊脂平板上劃線分離培養。

1.9 藥物敏感性測定 按常規紙片法進行6株分離菌的藥物敏感性試驗。根據抑菌圈直徑大小判定分離株對藥物的敏感性。20 mm以上為極敏；15～20 mm為高敏；10～14 mm 為低敏；10 mm以下為耐藥。

2 結果

2.1 培養特性及形態觀察 病料直接涂片鏡檢觀察到的細菌以短鏈狀革蘭染色陽性球菌為主。經鮮血瓊脂平板培養，分離到6株革蘭染色陽性球菌。分離菌在高鹽培養基中培養48h不見生長，在鮮血瓊脂培養基上多數形成淡灰白色、半透明、圓形、濕潤、表面光滑、邊緣整齊的小菌落，菌落直徑約1～2 mm，且大多為α溶血或β溶血，其中CD1株呈β型溶血。鮮血瓊脂平板中以5～8個菌形成的鏈為主。

2.2 生化特性 6株菌均可發酵葡萄糖、菊糖、蕈糖、馬尿酸鈉，均不發酵山梨醇、棉籽糖、衛矛醇、淀粉、吲哚、枸櫞酸鈉。M.R.、V-P試驗均為陰性。大部分菌株發酵乳糖、麥芽糖、果糖，不發酵阿拉伯糖、甘露醇、水楊苷，不液化明膠。

2.3 動物致病性 攻毒組小鼠均100%發病，并于40 h內全部死亡，而對照鼠未見發病、死亡。死亡小鼠主要表現為血凝不良，腦膜充血，肺臟淤血、水腫，脾臟腫大。從死亡小鼠脾臟均可分離到與注射菌一致的鏈球菌。結果表明，6株細菌對小鼠均有一定的致病性。

2.4 藥物敏感性 6株鏈球菌分離物對25種抗菌藥物的敏感性不同，所用藥物的抑菌圈直徑在0～36 mm之間。其中以頭孢哌酮鈉(先鋒必)、先鋒霉素Ⅴ、阿莫西林、氨芐青霉素、氟嗪酸的抑菌效果較好，6株菌對這4種抗生素的高敏率分別是100%、100%、100%、83.3%、83.3%，而分離菌對其他抗生素則有不同程度的耐藥性，尤其是對四環素和桿菌肽的耐藥率為100%。所有菌株都耐10種以上藥物，表現出多重耐藥性(表1)。

表1 鏈球菌分離株的多重耐藥

3 結語

3.1 從河北保定、承德地區部分發病豬場病死豬體內分離到6株細菌，通過染色、生化試驗、致病性試驗等結果，鑒定其為豬鏈球菌。

3.2 6株豬鏈球菌分離物均對3種抗菌藥物(先鋒必、先鋒Ⅴ、阿莫西林)極其敏感。所有菌株都對10種以上藥物產生耐藥性，表現出多重耐藥性。

略)