中藥復方對氣分證家兔體溫及血清抗氧化指標的影響

王自力,趙詩潔,陳忠瓊,涂建國,吳利娟,魏學良,李樹明,田茂春

(西南大學動物科技學院,重慶 北碚 400715)

“衛氣營血辨證”由清代溫病醫家葉天士創立,認為氣分證是溫熱病的防治關鍵。白虎湯是防治氣分證的經典方之一,具有祛除邪氣,恢復正氣功效。通過制作家兔氣分證模型,利用白虎湯構建中藥復方進行防治,觀測家兔體溫、臨床癥狀和血清抗氧化指標的變化,為研制防治動物氣分證的中獸藥提供理論和試驗依據。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 健康新西蘭家兔21只,體重1.1～1.8 kg,雌雄不拘,購自重慶市金秋兔業有限公司。隨機分為對照組、模型組、中藥組,每組 7只。

1.2 藥品及儀器

1.2.1 中藥復方注射劑制作 生石膏50 g、知母24 g、大黃 20 g、金銀花 20 g 、生甘草 5 g,購自重慶市北碚區全興大藥房。按文獻[1]制作中藥注射劑,即經浸泡、水煎、醇提后,再經 126℃、0.14 MPa高壓滅菌30 min后4℃保存備用。

1.2.2 試劑及藥品 大腸桿菌內毒素(L-2880),購自Sigma公司;超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(批號20090323)、丙二醛(MDA)測試盒(批號20090323)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)(批號20081127)測試盒,均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2.3 儀器設備 離心機(TGL-16G型、上海安亭科學儀器廠)、可見紫外分光光度計(22pco4160型、上海棱光技術有限公司)、酸度計(PHS-3C型、成都世紀方舟科技有限公司)。

1.3 處理方法 家兔正常飼養3 d后,測量肛溫3次,取平均值為基礎體溫。用無菌生理鹽水將內毒素配制成濃度為15μg/mL溶液,-20℃保存備用。注射前37℃水浴20 min后,按0.5mL/kg體重經耳緣靜脈注射。對照組注入0.5/kg體重無菌生理鹽水作為對照。攻毒前2 h和攻毒后,中藥組家兔按照1.5mL/kg體重經腹腔注射中藥注射液,對照組和模型組分別給予相同劑量無菌生理鹽水。

1.4 測定指標 于注射內毒素后0.5、1、1.5、2 h和2.5 h時測量肛溫,2.5 h后心臟采血,3000 r/min離心10 min分離血清,-20℃保存備測;血清SOD、MDA、GSH-Px含量測定參照說明書。

1.5 數據統計方法 采用SPSS11.5軟件進行單因素方差分析。

2 結果

2.1 氣分證家兔癥狀變化 對照組:體溫正常,精神狀態良好,呼吸和心跳均保持正常,被毛順滑,結膜無充血,剖檢觀察心、肝、脾、肺、腎、腸道組織等臟器均正常,未見充血和出血斑點,皮下、腰大肌未見出血。

模型組:注射內毒素0.5 h后體溫開始上升,出現被毛雜亂,倦怠蜷縮,至2 h左右,結膜充血;呼吸急促,心率加快,飲水增加;口色鮮紅;耳廓血管充血擴張,2.5 h后剖檢觀察見心、肝、脾、肺、腎等臟器充血,但未見出血斑點,皮下、腰大肌未見明顯出血。

中藥組:注射內毒素0.5 h后體溫升高,注射中藥注射劑后蜷縮聳毛;呼吸心率加快;體溫升高;飲水增多,結膜充血等癥狀減輕,至2.5 h時恢復到正常水平。剖檢觀察心、肝、脾、肺、腎等臟器無充血或有少數充血,均未見出血斑點,皮下、腰大肌無出血。

2.2 氣分證家兔體溫的變化 見表1。

表1 家兔體溫變化 (n=7) (℃)

由表1可知,各組基礎體溫無差異。0.5 h和1 h時,中藥組和模型組家兔體溫均顯著或極顯著高于對照組(P＜0.05或P＜0.01),且兩組間無顯著差異;1.5 h時,模型組和中藥組體溫開始下降,且與對照組無顯著差異(P＞0.05);2 h時,中藥組家兔體溫極顯著低于對照組(P＜0.01),且與模型組無差異;2.5 h時,模型組家兔體溫顯著高于對照組(P＜0.05),且中藥組家兔體溫均極顯著高于對照組和模型組(P＜0.01)。

2.3 血清抗氧化指標含量的變化 見表2。

表2 家兔血清抗氧化指標含量變化(n=7)

由表2可知,中藥組家兔血清SOD水平顯著高于對照組(P＜0.05),且極顯著高于模型組(P＜0.01);模型組家兔血清MDA水平顯著高于對照組(P＜0.05),而中藥組極顯著低于模型組(P＜0.01)且與對照組無顯著差異;中藥組家兔血清GSH-Px水平顯著低于對照組(P＜0.05),但模型組與對照組、中藥組均無統計學差異。

3 分析與討論

3.1 中藥復方對氣分證家兔臨床癥狀及體溫的影響 溫病氣分階段的特點是邪氣雖盛而正氣亦強,正邪交爭激烈。模型組家兔臨床癥狀、剖檢結果和體溫變化表明,家兔處于氣分證而未進入營血分證,說明家兔氣分證模型制作成功。研究表明,內毒素可破壞血小板和紅細胞,損傷毛細血管壁,導致失水液酸堿平衡紊亂,引起內臟器官不同程度損傷[2],常用于動物氣分證模型的制作[3]。

按照“到氣清氣”[4]的治療原則,采用辛苦寒涼類中藥清解氣分證。中藥組上述癥狀較模型組輕,說明在攻毒前注射中藥復方對病邪具有一定抵抗作用,且體內正邪斗爭激烈使家兔一度產生體溫升高、呼吸加快等癥狀;而經攻毒后注射中藥復方,臨床癥狀及體溫等均恢復正常,說明中藥復方具有解氣分熱之功效。研究表明,中藥復方中的大黃可降低能量代謝減少產熱使體溫下降[5];石膏可抑制體溫調節中樞的亢進而解熱,并抑制發汗中樞[6],解熱而不發汗,故無傷津之弊。

3.2 中藥復方對氣分證家兔血清SOD、MDA和GSH-Px水平的影響 氣分證是正盛邪實,正邪相爭激烈,陽熱亢盛的里熱證。中獸醫學中“正氣”既包括機體抗御致病因子(如內毒素等)的能力與物質(如SOD、GSH-Px、免疫學物質等)[7];且機體自由基的產生和清除保持動態平衡,若此平衡被破壞后可引起細胞損傷和疾病發生等連鎖反應。

3.2.1 對血清SOD水平的影響 SOD是機體中的一種重金屬酶,能清除超氧陰離子自由基,發揮抗炎功效,對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關重要作用。本研究表明,氣分證家兔血清SOD含量保持在正常水平,說明模型組家兔機體內氧自由基的產生和清除處于平衡狀態,符合氣分證時機體內邪氣盛,而正氣亦強的特點,進一步說明家兔氣分證模型的建立是成功的。中藥組家兔治療后血清SOD水平大幅上升,說明中藥復方具有增強機體清除氧自由基能力,即增強機體正氣和祛除邪氣能力。現有研究表明:中藥復方中大黃(主要為蒽醌類衍生物大黃素)具有良好的抗炎、清除氧自由基的抗氧化作用[8]。知母中的知母多糖對紅細胞膜自氧化和H2O2所致的紅細胞氧化溶血具有顯著抑制作用而發揮抗氧化作用[9]。

3.2.2 對血清MDA水平的影響 MDA是脂質過氧化中產生的脂質過氧化產物,可引起黏膜損傷和激活補體系統,使巨噬細胞釋放大量炎癥介質產生一系列連鎖損傷反應[10]。本研究表明,模型組家兔血清中MDA水平出現顯著升高,而中藥組MDA含量則保持正常水平,相關研究[11]也證實了本研究結果;研究表明氣分證家兔體內存在氧自由基代謝紊亂,而經中藥復方可維持機體氧自由基的產生和清除能力保持平衡。中藥復方中的金銀花具有抑菌抗病毒、解熱抗炎、抗氧化、免疫調節等作用,可明顯減輕肝臟病理損傷[12]。

3.2.3 對血清GSH-Px水平的影響 GSH-Px具有清除體內過氧化氫和許多有害的過氧化產物,阻斷脂質過氧化連鎖反應,具有保護細胞結構和功能完整的功效。本研究表明,模型組家兔血清GSHPx水平略低于對照組但無顯著差異,說明氣分證階段家兔機體清除體內過氧化氫和有害過氧化物能力仍保持正常,體現氣分證動物體內正氣尚強的特點;而中藥組GSH-Px的活性未出現增強作用,提示中藥復方可能通過其他途徑,如通過增強SOD等抗氧化酶,降低 MDA水平來發揮祛除邪氣功效,與SOD協同輔助作用等因素[13]有關。

綜上所述,中藥復方對氣分證家兔具有增強機體正氣作用,如促使臨床癥狀恢復正常,提高SOD水平、降低MDA水平達到增強機體抗氧化能力,其作用機制需進一步研究,以闡釋氣分證實質及中藥調控機制。

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