復(fù)方維鋅口腔貼膜的制備及質(zhì)量控制

郭美華，馬妍妍，劉世萍（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，哈爾濱市 150001）

口腔扁平苔蘚是一種原因不明的慢性淺在性炎癥的角化性病變，尚無特效的根治方法，其病程慢性遷延，可以復(fù)發(fā)，且有癌變可能。對發(fā)生潰瘍或糜爛者，應(yīng)采用全身和局部藥物治療[1～3]。筆者根據(jù)口腔扁平苔蘚的病理特點(diǎn)將維生素E、硫酸鋅、維生素A、醋酸地塞米松、鹽酸土霉素和鹽酸丁卡因6種成分以適當(dāng)比例組方，以具有優(yōu)良的成膜性的聚乙烯醇為載體，制成膜劑，并探討了該制劑處方及制備工藝、質(zhì)量控制方法等，旨在尋求一種治療口腔扁平苔蘚方便有效的局部用藥制劑。

1 儀器與試藥

Waters 600高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)，包括2996 PDA檢測器、717自動進(jìn)樣器（美國Waters公司）；SB3200型超聲波儀（必能信超聲（上海）有限公司）；AE200型電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。維生素E標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100062-200608，純度：98.8%）；維生素E（巴斯夫（中國）維生素有限公司，批號：200805003，純度：99.3%）；維生素A（浙江醫(yī)藥股份有限公司新晶制藥廠，批號：090109，純度：99.5%）；硫酸鋅（湖南爾康制藥有限公司，批號：20080701，純度：100.1%）；醋酸地塞米松（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：071201，純度：98.4%）；鹽酸丁卡因（北京市燕京藥業(yè)有限公司，批號：070406，純度：100.0%）；鹽酸土霉素（山東金洋藥業(yè)有限公司，批號：20080701，純度：94.1%）；復(fù)方維鋅口腔貼膜（自制，批號：20090604、20090612、20090615，每片含維生素E 6 mg，硫酸鋅0.4 mg，維生素A 0.2 mg，醋酸地塞米松0.1 mg，鹽酸土霉素2 mg，鹽酸丁卡因0.25 mg，規(guī)格：每袋10片）；其它輔料均為藥用規(guī)格；甲醇與異丙醇均為色譜純，其余試劑為分析純、水為超純水。

2 處方與制備

2.1 處方

維生素E 6 g，硫酸鋅0.4 g，維生素A 0.2 g，醋酸地塞米松0.1 g，鹽酸土霉素2 g，鹽酸丁卡因0.25 g，甘油2 g，丙二醇2 g，吐溫-80 2 g，乙醇5 mL，聚乙烯醇20 g，純化水200 mL，制成1 000片膜片。

2.2 制備

取聚乙烯醇加水膨脹后，在水浴上加熱，溶解，放冷。加入甘油、丙二醇及研細(xì)的硫酸鋅、鹽酸丁卡因和鹽酸土霉素，再加入用少量乙醇溶解的維生素A、維生素E及醋酸地塞米松溶液，攪勻，倒在涂有少量液體石蠟的玻璃板上，制成膜片，自然干燥，脫膜，裁成3 cm×4 cm面積大小，經(jīng)紫外燈正反面各滅菌15 min，包裝，即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀

本品為淡黃色均勻的薄膜。

3.2 鑒別

3.2.1 維生素E。取本品40片，加無水乙醇10 mL，振搖使維生素E溶解，濾過，濾液加硝酸2 mL，搖勻，在75℃加熱約15 min，溶液顯橙紅色。

3.2.2 維生素A。取本品10片，加氯仿5 mL，振搖使溶解，取出數(shù)滴，再加氯仿2 mL與三氯化銻的氯仿溶液（1→4）0.5 mL，即顯藍(lán)色，逐漸變成紫紅色。

3.2.3 醋酸地塞米松。取本品50片，照氧瓶燃燒法[4]進(jìn)行有機(jī)破壞，用水15 mL與氫氧化鈉液（0.01 mol·L－1）5 mL為吸收液，待燃燒完畢后，充分振搖，取吸收液2 mL，加茜素氟藍(lán)試液0.5 mL，再加含有12%醋酸鈉與6%醋酸的溶液0.2 mL，用水稀釋至4 mL，加硝酸亞鈰試液0.5 mL即顯藍(lán)紫色。

3.2.4 本品顯鋅鹽、硫酸鹽及氯化物的鑒別反應(yīng)[4]。

3.3 檢查

參照《中國藥典》2005年版二部附錄ⅠM膜劑項(xiàng)下要求制定本品的檢查項(xiàng)目[4]。

3.3.1 重量差異。取供試品3批，每批20片，依法檢測[4]。結(jié)果，3批樣品重量差異在－8.2%～7.5%范圍內(nèi)，符合要求。

3.3.2 微生物限度。檢查結(jié)果符合要求。

3.4 含量測定

3.4.1 檢測波長的確定。取維生素E標(biāo)準(zhǔn)品溶液在190～450 nm的波長范圍內(nèi)掃描，記錄光譜。可知維生素E在204 nm及284 nm波長處均有吸收峰，考慮到前者為邊緣吸收，可能受溶劑等因素的影響，所以選擇284 nm作為檢測波長。

3.4.2 色譜條件。色譜柱：Sinochrom ODS-BP（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-異丙醇（88∶12）；檢測波長：284 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

3.4.3 試液的制備。（1）標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密稱取維生素E標(biāo)準(zhǔn)品50.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1 mL中含維生素E 0.5 mg）。（2）供試品溶液。取本品10片（約相當(dāng)于維生素E 60 mg），置于100 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30 min，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，即得。（3）陰性供試品溶液。按處方量稱取處方中除維生素E以外的其它藥用原料及輔料，按制備工藝制成不含維生素E的陰性供試品，按上述操作制備。

3.4.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。取上述3種溶液，按色譜條件進(jìn)樣，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.陰性供試品；B.維生素E標(biāo)準(zhǔn)品；C.供試品；1.維生素EFig 1 HPLC chromatogramsA.negative sample；B.vitamin E control；C.test sample；1.vitamin E

由圖1可知，基線平穩(wěn)，維生素E與雜質(zhì)峰分度良好，雜質(zhì)對其測定無干擾，且柱效高，峰形理想。

3.4.5 線性關(guān)系。取標(biāo)準(zhǔn)品溶液（0.5 mg·mL－1），經(jīng)針頭過濾器過濾后進(jìn)樣，在軟件內(nèi)設(shè)置使自動進(jìn)樣器將樣品按2、4、8、12、16、32 μL的體積依次進(jìn)樣，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合回歸方程：Y＝2.65×106X－3.98×105（r＝0.999 98），表明維生素E進(jìn)樣量線性范圍為1.0～16.0 μg。

3.4.6 回收率試驗(yàn)。取陰性供試品9份，分成3組，每組3份，每份10片，分別精密加入48、60、72 mg維生素E標(biāo)準(zhǔn)品，按上述供試品溶液的制備方法制備成加樣回收供試品溶液，進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為（99.28±1.15）%，詳見表1。

3.4.7 精密度試驗(yàn)。精密吸取上述同一份標(biāo)準(zhǔn)品溶液10 μL和同一份供試品溶液10 μL，分別在上述的色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算RSD分別為0.39%、0.52%。表明精密度良好。

3.4.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一份供試品溶液分別于0、1、2、4、6、8 h，分別進(jìn)樣10 μL，測定維生素E的峰面積。結(jié)果，RSD＝0.71%，表明穩(wěn)定性良好。

3.4.9 重復(fù)性試驗(yàn)。對同一批樣品分別取樣6份，按擬定的含量測定方法，制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液的峰面積，計(jì)算維生素E的含量。結(jié)果，平均含量為每片6.03 mg，RSD＝1.57%，表明重復(fù)性良好。

3.4.10 樣品含量測定。分別取3批樣品，制備成供試品溶液，進(jìn)樣分析，測定含量，結(jié)果見表2。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）

表2 樣品含量測定結(jié)果Tab 2 Content determination results of samples

3.4.11 含量限度的確定。根據(jù)處方量，考慮到投藥量及檢測的誤差，并參考《中國藥典》2005版二部中相同劑型的含量限度的制定，確定本品的含量限度為維生素E應(yīng)為標(biāo)示量的85%～115%。表2結(jié)果表明上述3批樣品含量均在合格范圍內(nèi)。

4 討論

處方中維生素E在體內(nèi)、外均有很強(qiáng)的抗氧化作用，可維持生物膜的正常脂結(jié)構(gòu)和生理功能，可用于延緩衰老、浸出性或炎癥性皮膚病、皮膚角化癥等；維生素A具有促進(jìn)生長，維持上皮組織如皮膚、結(jié)膜等正常功能的作用；硫酸鋅有收斂、防腐作用及促進(jìn)肉芽組織形成的作用，可加速創(chuàng)傷、潰瘍的愈合，對維生素A的代謝也起重要作用；丁卡因?qū)儆诰植柯樽硭帲蓽p輕局部疼痛；地塞米松具有較強(qiáng)的抗炎、抗過敏和免疫抑制作用，局部應(yīng)用副作用小；土霉素為廣譜抗生素具有抑菌作用。針對口腔扁平苔蘚的特點(diǎn)，將上述藥物科學(xué)組方后可用于該病的治療。

維生素E在本品中含量較高，容易測定，通過一系列預(yù)試驗(yàn)，筆者選擇維生素E作為本品的含量控制的指標(biāo)性成分。對于維生素E的含量測定，在試驗(yàn)過程中，筆者曾選用以甲醇-水（95∶5）、甲醇-氯仿（95∶5）、甲醇-乙腈（95∶5）為流動相，結(jié)果均因其色譜峰分離效果不好而未被采用。最終采用甲醇-異丙醇（88∶12）作為流動相，結(jié)果可使主峰的保留時(shí)間縮短。維生素E制劑含量測定除《中國藥典》規(guī)定采用氣相色譜法外，還有分光光度分析法[5，6]、HPLC 法[7～9]等方法的文獻(xiàn)報(bào)道。高效液相色譜法大多采用反相色譜柱進(jìn)行分析，多以水和甲醇作為流動相[7]，這易造成脂溶性大分子化合物在柱內(nèi)的沉淀，污染色譜柱，也可能使色譜峰形不理想。氣相色譜法所用的內(nèi)標(biāo)物正三十二烷[4]在市場上難購買，給日常分析造成困難，而且樣品前處理較煩瑣。而本文采用的HPLC法是以甲醇和異丙醇作為流動相，使脂溶性維生素E不殘留在柱內(nèi)，能減少維生素E的保留時(shí)間，并提高了柱的穩(wěn)定性，保持柱分離效能，延長其使用壽命。

對于成膜材料的選擇，相關(guān)文獻(xiàn)[10～12]已有報(bào)道，與文獻(xiàn)相比，本試驗(yàn)所選材料雖然成膜性較好，但在延緩藥物釋放、生物相容性等方面有待進(jìn)一步研究改進(jìn)。

綜上所述，復(fù)方維鋅口腔貼膜處方及制備工藝合理可行，質(zhì)量控制方法快速、簡便，準(zhǔn)確性好，靈敏度高。

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