玉竹提取物A對小鼠脾淋巴細胞轉化和IL-2產生的影響

關玲敏 潘興瑜*

玉竹（polygonatum odoratum var plurif l orum ohwi）為百合科黃精屬植物藥，具有扶正固本、滋補強壯、養陰潤燥和生津止渴的功效，中醫認為有延年益壽和抗衰老作用，并常用于治療糖尿病和結核等疾病。現代藥理研究其主要成分有多糖、生物堿和菸酸等成分，證明有強心、擴張血管、降血壓、降血脂和降血糖等作用[1]。有關玉竹對免疫功能的作用各家報道不一，有人認為玉竹具有增強免疫作用[1]。也有資料表明玉竹具有類似腎上腺皮質激素樣作用[2]。本文對東北遼西山區所產玉竹的根莖進行提取，以玉竹提取物A為研究對象，探討其對免疫功能的影響和作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

BALB/C小鼠，6～8W，由本校動物室提供；Con-A（Sigma，美國）；MTT（Fluka，瑞士）；玉竹提取物A（干品，由本室研究人員采集和提取）；RPMI1640（Gibco，美國）。

1.2 小鼠脾淋巴細胞轉化實驗

細胞密度為1×106/mL，加Con-A6μg/mL刺激和不加Con-A刺激兩種形式。5%CO2條件下培養72h，于前4h加MTT，采用本室改進的MTT比色法[6]測定OD值。IP=（1-實驗組OD值/對照組OD值）×100%。

1.3 小鼠脾淋巴細胞IL-2的產生

按文獻[4,5]的方法，細胞密度為4×106/mL，采用5μg/mL的Con-A做為誘導劑，實驗組添加不同劑量的玉竹提取物A，培養48h后收獲上清凍存待測。

1.4 小鼠脾淋巴細胞去除Con-A和玉竹提取物的IL-2產生

按文獻[6]的方法，Con-A濃度為7μg/mL，細胞密度為1×107/mL，實驗組添加不同劑量的玉竹提取物A，培養6h后洗二次，去除Con-A和玉竹提取物A，重懸細胞密度為4×106/mL，繼續培養42h后收獲上清凍存待測。

1.5 小鼠IL-2的測定

小鼠IL-2靶細胞按文獻[7]的方法誘導；小鼠IL-2的活性測定采用文獻[3]的方法測定。IP=（1-實驗組OD/對照組OD）×100%。

1.6 統計方法

采用t檢驗。

2 結 果

玉竹提取物A對Con-A誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化具有較強的抑制作用，其中以1μg/mL的劑量抑制作用相對為強，見表1；對小鼠脾淋巴細胞自然轉化也有一定的抑制作用，但是抑制作用是有限的，低劑量沒有作用，見表2；玉竹提取物A對小鼠脾淋巴細胞經Con-A誘導的IL-2產生也有顯著的抑制作用，6h后去除Con-A和玉竹提取物A，其抑制作用不能解除，二者最有效的抑制劑量均在10μg/mL，見表3和4。

3 討 論

玉竹提取物A對小鼠體外免疫功能具有顯著的抑制作用，用Con-A最小劑量誘導小鼠脾淋巴細胞轉化實驗的結果表明0.1μg/mL的玉竹提取物A便可產生較強的抑制作用，對非Con-A誘導的小鼠脾淋巴細胞自然轉化也有一定的抑制作用，但抑制作用較弱，低劑量并無此作用，二者均呈量效關系。以上結果提示玉竹提取物A對免疫功能的抑制作用是有限度的，只抑制增值的淋巴細胞，對靜止的淋巴細胞未發現有任何明顯的抑制作用，有實驗結果表明，玉竹提取物A沒有直接的細胞毒作用，也沒有反映出對細胞的毒副作用，這區別于現在臨床所應用的免疫抑制劑，是以損傷免疫系統而實現免疫抑制作用的。玉竹提取物A對小鼠脾淋巴細胞經Con-A誘導的產生也有顯著的抑制作用，即使作用6h以后去除Con-A和玉竹提取物A，這種抑制作用仍不能解除，二者最低最有效的劑量都在10μg/mL。該結果提示玉竹提取物A對免疫功能抑制的機制之一就是抑制小鼠脾淋巴細胞IL-2的產生，且作用于早期階段，但不能解釋0.1μg/mL的玉竹提取物A對小鼠脾淋巴細胞轉化所產生的較強的抑制作用，因為低劑量玉竹提取物A對小鼠脾淋巴細胞IL-2產生幾乎沒有影響，提示尚有另外的抑制環節。其明確的抑制作用尚在探討之中。

表1 玉竹提取物A對小鼠脾淋巴細胞轉化的影響

表2 玉竹提取物A對小鼠脾淋巴細胞自然轉化的影響

表3 玉竹提取物A對小鼠脾淋巴細胞IL-2產生的影響

表4 去除Con-A和玉竹提取物A對小鼠脾淋巴細胞IL-2產生的影響

有關玉竹對免疫功能的影響有彼此相反的報道，為了驗證有些地區玉竹對免疫功能的影響，我們所用的玉竹根莖系我室研究人員親自上山采集，排除了易混雜在玉竹根莖內的七筒黃精，多花黃精和小黃精。通過上述實驗結果證明遼寧產生玉竹對小鼠免疫功能具有較強的抑制作用，其研究結果可信。

玉竹對糖尿病和結核治療有效的機制可能是抑制CD4淋巴細胞對胰腺β細胞的破壞作用和結核菌感染所帶來的免疫損傷。本文對遼寧所產生玉竹對免疫功能的作用和機制已有了初步的揭示，對開發中藥免疫抑制劑將具有意義。

[1]林厚文,韓公羽,謬時萱.中藥玉竹有效成分研究[J].藥理學報,1997,29(3):215～222.

[2]廣西醫學院微生物學教研室主編.英漢免學辭典[M].南寧:廣西人民出版社,2005:382.

[3]潘興瑜,付京晶.MTT比色法改進研究[J].中國免疫學雜志,1999,15(10):42.

[4]吳易元.人類T細胞生長因子的產生和測定[J].中華微生物學和免疫學雜志,2008,4(2):69.

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[6]Gearing A,Johstone A.Thorpe Rproduction and assay of the interleukins[J].J Immunol Methods,2005,83:8.

[7]丁桂鳳,席宏麗.用活化的小鼠脾細胞測定IL-2[J].上海免疫學雜志,1998,8(1):64.