MMP-26蛋白在乳腺良、惡性病變組織中的表達及其與ER的關(guān)系

劉春忻

基質(zhì)金屬蛋白酶-26（MMP-26）是基質(zhì)金屬蛋白酶家族（MMPs）的新成員。目前的研究顯示，MMP-26主要在惡性上皮性腫瘤中表達，并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。但是MMP-26在各種腫瘤中的表達、腫瘤進展中的作用及其調(diào)控機制尚不清楚。本研究通過免疫組織化學(xué)方法檢測了MMP-26在正常乳腺組織、乳腺增生癥、原位癌和乳腺浸潤性導(dǎo)管癌（IDC）中的表達情況，分析了其在IDC中的表達與多種臨床病理指標之間的聯(lián)系，探討了MMP-26在乳腺癌浸潤和轉(zhuǎn)移中的作用。并且，通過對MMP-26與ER表達的相關(guān)性分析，對MMP-26在IDC中的調(diào)控機制進行了初步探討。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本

收集2006至2009年齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院病理科明確診斷的正常乳腺組織6例，乳腺增生癥8例，原位癌4例，IDC67例，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的34例。根據(jù)IDC的組織學(xué)分級標準將上述腫瘤標本分為三級，其中Ⅰ級8例，Ⅱ級48例，Ⅲ級11例。

1.1.2 試劑

兔抗人MMP-26多克隆抗體，由美國Burnham研究所惠贈；人ER單克隆抗體、SP免疫組織化學(xué)試劑盒和DAB發(fā)色劑均購于福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)

采用免疫組織化學(xué)SP法，實驗步驟按SP試劑盒說明書進行。以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 結(jié)果判定

MMP-26表達以細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，其強度大于背景非特異性染色者判定為陽性，ER表達以細胞核中出現(xiàn)棕黃色為陽性。隨機選取5個200倍視野，鏡下每視野選取100個細胞觀察，按陽性細胞數(shù)占總細胞的比例和染色深度進行評分并分級。

結(jié)果評分標準：參照Jennifer等的方法，采用染色深度和陽性細胞百分比雙重判定進行評分，并將二者評分乘積作為最終評分進行統(tǒng)計學(xué)分析。具體評分標準如下：染色深度判定，基本不著色為0分，著色弱為1分，中度著色為2分，著色強為3分；陽性細胞比例判定，著色細胞占總細胞數(shù)＜10%為0分，10%～30%為1分，31%～70%為2分，＞70%為3分。最后以陽性細胞的百分比得分和染色深度得分之積作為最終結(jié)果進行判定。≤3為弱陽性（+），4～6分為陽性（＋＋），＞6為強陽性（＋＋＋）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用χ2檢驗及直線相關(guān)性分析。實驗數(shù)據(jù)均采用INSTAT統(tǒng)計軟件分析處理。

2 結(jié) 果

2.1 MMP-26蛋白的表達（表1）

MMP-26陽性表達顆粒為棕黃色，分布于胞質(zhì)中（圖1）。6例正常乳腺組織中，有1例MMP-26為弱陽性表達，陽性率為16.7%。8例乳腺增生癥中，有1例弱陽性表達，陽性率為12.5%。4例原位癌全部為陽性表達，陽性率為100%。67例IDC中，有4l例MMP-26為陽性表達，陽性率為61.2%。統(tǒng)計結(jié)果顯示，乳腺增生癥與正常乳腺組織中MMP-26的表達差異無顯著性。原位癌、IDC與正常乳腺組織、乳腺增生癥中MMP-26的表達的差異有顯著性（P＜0.05）。原位癌和IDC之間的差異無顯著性（P＞0.05）。

2.2 MMP-26蛋白的表達與部分臨床特征之間的關(guān)系（表2）

對67例IDC中MMP-26的表達與患者年齡、腫瘤大小、病理學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進明，MMP-26表達與患者年齡、腫瘤大小及級無關(guān)（P＞0.05），而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性者，MMP-26的陽性率明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者（P＜0.05）。

2.3 MMP-26蛋白表達與ER表達的相關(guān)性分析

表1 MMP-26蛋白在IDC及正常乳腺組織中的表達

表2 MMP-26蛋白表達與部分臨床病理指標的關(guān)系

在本組67例IDC中，35例ER陽性（54.5%）。在ER陽性病例中，有21例MMP-26呈陽性，但其評分＞3的只有9例（圖2）。將各組評分輸入IN-STAT軟件，通過對MMP-26和ER表達評分的直線相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，MMP-26表達與ER表達之間呈明顯負相關(guān)關(guān)系（r=-0.4507，P＜0.01），χ2檢驗結(jié)果見表3。

表3 MMP-26蛋白表達與ER表達的相關(guān)性分析

3 討 論

MMP-26是MMPs家族中最小的成員，為人類基因組所特有；它的水解底物非常廣泛，包括細胞外基質(zhì)中的纖維蛋白、Ⅳ型膠原、玻基蛋白、明膠、 纖維蛋白原等[1,2]，也包括非細胞外基質(zhì)成分如胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1、α1-抗胰蛋白酶等；它能自身激活，并能有效激活MMP-9的酶原形式等。以上研究提示MMP-26在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮重要作用。MMP-26在乳腺良、惡性病變組織中的表達尚未見系統(tǒng)報道。

本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法，檢測乳腺良、惡性病變組織中MMP-26蛋白的表達，結(jié)果顯示MMP-26在6例正常乳腺組織及8例乳腺增生癥中，分別只有l(wèi)例為弱陽性表達，在4例原位癌中均見MMP-26的表達，在67例IDC中有41例MMP-26陽性表達，陽性率為61.2%，與正常乳腺組織和乳腺增生癥中的表達差異有顯著性（P＜0.05）。以上結(jié)果提示MMP-26可能在腫瘤局部惡性增殖和浸潤早期發(fā)揮作用。本結(jié)果中MMP-26蛋白在原位癌中表達量異常增高與Zhao等[3]的實驗結(jié)果相似，說明MMP-26可能在從原位癌到浸潤癌的轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮重要作用，其作用機制尚需進一步探討。

圖1 MMP-26蛋白在乳腺組織中的表達，SP法

圖2 MMP-26蛋白及ER在IDC組織中的表達，SP法

統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示，MMP-26蛋白的表達量與患者的年齡、腫瘤的大小和腫瘤的病理學(xué)分級無關(guān)，而與是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的病例，MMP-26的表達明顯強于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者（P＜0.05）。Yamamoto等[4]在食管鱗癌組織中；也得出相同結(jié)果。以上結(jié)果都說明MMP-26在TDC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮重要作用，其作用的機制一方面可能是通過MMP-26本身對細胞外基質(zhì)成分如纖維黏連蛋白、玻基蛋白、Ⅳ型膠原等的降解；另一方面，可能是通過激活MMP-9酶原形式，激發(fā)MMP-9對細胞外基質(zhì)的強大降解作用。

鑒于MMP-26在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中的重要作用，其調(diào)控機制也倍受關(guān)注，但到目前為止MMP-26在體內(nèi)的激活和表達調(diào)控機制尚不清楚。Ii等[5]研究證實，MMP-26的表達與雌激素依賴性腫瘤如乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等密切相關(guān)，并在MMP-26轉(zhuǎn)錄起始位點上游的啟動子區(qū)發(fā)現(xiàn)了雌激素作用元件（ERE）。推測雌激素和ER復(fù)合物可結(jié)合于MMP-26啟動子上游的ERE，調(diào)節(jié)MMP-26的表達。但MMP-26的表達與ER的關(guān)系還沒得到確切證實。本研究的結(jié)果顯示MMP-26的蛋白表達與ER呈明顯負相關(guān)關(guān)系，在MMP-26蛋白表達陽性病例中，ER的表達大多呈陰性，而在ER陽性的病例中MMP-26蛋白大多呈陰性或弱陽性（P＜0.01），提示雌激素和ER復(fù)合物可能下調(diào)MMP-26的表達，其調(diào)控機制尚有待進一步探討。

總之，本研究對MMP-26在乳腺良、惡性組織中的表達規(guī)律進行了探討，證實MMP-26在乳腺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，MMP-26在IDC中的表達可能直接或間接受雌激素及ER的調(diào)節(jié)，為進一步研究MMP-26在乳腺癌中的表達、調(diào)控機制提供了形態(tài)學(xué)依據(jù)，

MMP-26與ER之間的表達調(diào)控和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制尚需進一步研究證實。

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