自制青霉素皮試液的有效期測試

張美霞，厲琳琳

(恩澤醫(yī)療中心＜集團＞臺州市中心醫(yī)院，浙江 臺州 317000)

青霉素臨床應用廣泛，但其過敏反應極為常見，主要表現(xiàn)為皮疹、血清病型反應、循環(huán)衰竭、喉頭水腫和肺水腫、剝脫性皮炎、過敏性休克等，因此必須做青霉素皮內敏感試驗(即青霉素皮試)。青霉素分子由游離羧基、酰胺側鏈、氫化噻唑環(huán)和內酰胺環(huán)合并的雜環(huán)構成，最不穩(wěn)定的部分是β－內酰胺環(huán)，在偏堿或偏酸條件下易發(fā)生水解和分子重排。2005年版《中國藥典(二部)》規(guī)定青霉素皮試液的測定方法為高效液相色譜法[1]，但該法操作煩瑣、耗時長、工作量大、測定條件要求較高，不適于醫(yī)院快速分析，且可能由于流動相的問題而導致結果不理想[2]。為此，筆者采用紫外分光光度法測定青霉素皮試液的含量，并探討了自制皮試液的有效期，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

UV－8500型紫外可見分光光度計(無錫科達儀器廠);電子分析天平(浙江省科學器材進出口有限責任公司);SZ－93型自動雙重純水整流器(上海亞榮生化儀器廠);DGG－9123A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海森信實驗儀器有限公司);SH－T0093型砂芯過濾裝置。80萬注射用青霉素(中諾藥業(yè)有限公司，批號為08019101);0.9%氯化鈉注射液(安徽雙鶴藥業(yè)有限責任公司，500 mL/瓶，批號為0902013C)。

2 方法與結果

2.1 含量測定

標準曲線制備:精密稱取注射用青霉素0.1662 g，加0.9%氯化鈉注射液溶解，定容至100 mL，定量稀釋成2770 U/mL的溶液。分別量取 3，5，8，15，18，20 mL，置 100 mL 量瓶中，加 0.9% 氯化鈉注射液至刻度，搖勻。以0.9%氯化鈉注射液為空白對照，在215 nm波長處測定吸光度 A值，以濃度對吸光度進行線性回歸，得回歸方程 A=0.0016 C+0.0249，r=0.999878。結果表明，青霉素濃度在83.10～554 U/mL范圍內與吸光度線性關系良好。

精密度試驗:照標準曲線制備項下方法制備溶液，依法測定。結果吸光度的 RSD=0.097%(n=6)，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，于 0，30，60，90，120，150 min時依法測定，結果吸光度的 RSD=0.1344%(n=6)，表明供試品溶液在2.5 h內穩(wěn)定。

回收率試驗:精密稱取青霉素0.0797 g，加0.9%氯化鈉注射液溶解，定容至100 mL，定量稀釋成13.28萬U/mL的溶液，分別量取 5.0，2.5，2.5，5.0，5.0 mL，置 100 mL 量瓶中，分別加入青霉素 0.0199，0.0242，0.0240，0.0136，0.0162 g，并用 0.9% 氯化鈉注射液溶解、定容。以0.9%氯化鈉注射液為空白，在215 nm波長處分別測定吸光度 A值。代入標準曲線方程計算濃度，換算得質量，將其與加入的制劑質量之比計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=5)

2.2 穩(wěn)定性考察

含量及紫外吸收光譜:照標準曲線制備項下方法制成供試品溶液，取濃度為 221.6，415.5，498.6 U/mL 的溶液，以紫外分光光度法于9 d內每隔24 h測定1次，且每測完1次后均放置在低溫4℃下保存，記錄每天3個濃度溶液的 A值，根據(jù)線性回歸方程求出實際濃度。實際濃度與理論濃度的比值大小可顯示出青霉素皮試液的變化。由表2可見，青霉素皮試液在低溫4℃下可保存7 d，與2005年版《中國藥典(二部)》規(guī)定一致。超過7 d，青霉素皮試液的含量會發(fā)生明顯變化，在保存過程中可分解成青霉酸、青霉烯酸、青霉胺、青霉噻唑酸及青霉酮酸等5種物質。

外觀與pH:青霉素皮試液在保存過程中外觀沒有變化，pH隨保存時間的延長而下降。制備皮試液時pH為6.20，室溫保存1周后下降至4.70，冷藏保存2周后下降至6.10，4周后下降至5.62。

3 討論

低溫僅能延緩青霉素的分解，存放時間越長，溫度越高，其分解越快，青霉烯酸的含量也越高，皮試陽性反應的可能性就越大。

張莉等[3]認為，溶劑pH是影響青霉素穩(wěn)定性的最重要因素，溶劑pH為5.7～7.78時青霉素最穩(wěn)定，注射用水、生理鹽水可作為溶劑來配制皮試液。但筆者在臨床應用中發(fā)現(xiàn)，注射用水作溶劑時皮試陽性率高于生理鹽水。生理鹽水為等滲溶液，pH呈中性，當將其皮試液注入皮內時，由于局部組織的滲透壓相等，pH適中，局部組織細胞內環(huán)境保持相對穩(wěn)定，故很少出現(xiàn)假陽性。而注射用水為低滲溶液，呈弱酸性，當將其皮試液注入皮內時，由于局部組織間的滲透壓降低，注射用水與青霉素兩者的酸性一同刺激毛細血管，使之擴張，導致皮膚出血、局部組織出現(xiàn)紅暈，局部毛細血管的通透性增加而使液體滲出，從而使皮丘變硬、過大，故較易出現(xiàn)假陽性。除此之外，青霉素皮試液溶于葡萄糖溶液時會有一定程度的分解，故一般也不用葡萄糖溶液溶解;青霉素皮試液在堿性溶液中分解快，因此嚴禁堿性藥液(如碳酸氫鈉、氨茶堿等)與其配伍。

表2 供試品溶液9 d內吸光度及含量測定結果

在回收率及含量測定過程中，可能出現(xiàn)比色皿的對調，或者每次操作時量取的量存在著一定的誤差，導致本試驗結果可能存在微小誤差。另外，在配制溶液期間，青霉素皮試液會在常溫中放置一段時間，也可能導致試驗結果出現(xiàn)誤差。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業(yè)出版社，2005:355.

[2]范義風，季衛(wèi)榮.高效液相色譜法測定青霉素皮試液含量[J].醫(yī)藥導報，2004，23(12):952 －953.

[3]張 莉，李 泱.青霉素靜脈滴注合理配制的試驗與研究[J].中華護理雜志，1994，29(5):270 －273.