中藥陽起石溫腎作用實驗研究

楊明輝，王久源，張蜀武，楊蘇文，戴德銀，李澤興

（1.中國人民解放軍452醫院，四川 成都 610021； 2.成都中醫藥大學，四川 成都 610061）

陽起石是傳統溫腎壯陽藥，《神農本草經》記載：“主崩中漏下，破子臟中血，瘕結氣，寒熱腹痛，無子，陰痿不起，補不足。”[1]后世本草逐漸突出其溫腎壯陽功效。歷代醫家也多運用單味陽起石或配伍成復方治療腎陽虛型陽痿、早泄，并推崇為治療陽痿的要藥，“于陽之不能起者，克起”[2]。由于陽起石被大量采用，陽起石偽品在古代就已出現，使得人們對其藥用價值和安全性產生了懷疑。孫文倩的局部抽樣調查發現，67份陽起石商品藥材鑒定結果為17種礦物（巖石）[3]。為此，對于陽起石是否具有溫腎壯陽作用，應當加以研究，給予科學評價。

1 材料與方法

1.1 儀器、動物及試藥

CB 3201型數字、描記式小動物測定儀（中國川北電子工業公司）。昆明種小白鼠，雄性，體重（28±5）g，由四川抗生素工業研究所動物房提供。氫化可的松注射液（湖北鄖北制藥廠，批號為20050109）；陽起石購自成都市中藥材公司，經成都中醫藥大學藥學院中藥鑒定教研室、西南冶金地質勘探公司地質研究所共同鑒定為絹云母化透閃石巖，含鐵透閃石巖，為藥用正品陽起石；黃酒，豌豆淀粉，蒸餾水；男寶（天津力生制藥廠，批號為200506054）；0.9%氯化鈉注射液（生理鹽水）。補體致敏及未致敏酵母菌藥（1×108/mL），由成都中醫藥大學微生物教研室提供。

1.2 試驗藥液制備

陽起石末制備[4]：刷凈陽起石表面，砸碎，碎至約1 cm大小，單層，置陶瓷盤中，用箱式電阻爐在700℃恒溫加熱，待樣品變紅時再煅15～25 min，至紅透時取出，黃酒淬，反復煅、淬7次，陽起石與黃酒的比例為5∶1（均按質量計算，以下同），將煅淬后的陽起石陰干，研成細末，過100目篩，備用。

淀粉溶劑制備：將豌豆淀粉過100目篩，篩后將淀粉溶解于蒸餾水中（事先用燒杯盛好蒸餾水，淀粉均勻投放，自然溶解，淀粉與蒸餾水的比例為3∶100），將燒杯加熱，邊加熱邊用玻棒輕輕攪拌，以溶液沸騰為度，制成淀粉膠體助溶劑。

各藥物混懸液制備：取各種試驗藥物，均以淀粉膠體助溶劑為溶劑，配制各種質量濃度的藥物混懸液，即高（200 g/L）、低（100 g/L）質量濃度的陽起石混懸液及男寶（藥末過100目篩）混懸液（16 g/L）。

1.3 動物分組方法

讓小鼠在實驗環境下適應3 d，隨機分為6組，即正常對照組（A組）、模型組（B組）、淀粉溶劑試驗組（C組）、陽起石高質量濃度試驗組（D1組）、陽起石低質量濃度試驗組（D2組）、男寶試驗組（E組），每組各12只小鼠。

1.4 陽虛小鼠造模方法

[5]方法，按25 mg/kg劑量，用皮試針管、5號針頭行小鼠臀部肌肉注射氫化可的松注射液，每天1次，連續7 d。

1.5 給藥方法

A組每天臀部肌肉注射生理鹽水0.1 mL（與造模時所給氫化可的松容量相當），胃管喂飼生理鹽水0.5 mL；其余各組每天除臀部肌肉注射氫化可的松25 mg/kg外，B組胃管喂飼生理鹽水0.5 mL。各組各試驗組灌胃給予相應藥物，給藥容積為0.5 mL/d。各組給藥從肌肉注射氫化可的松（或生理鹽水）后第2天開始，共6 d。

1.6 觀察項目及方法

一般狀態：觀察被毛、姿態、攝食、活動、皮膚溫度變化、死亡情況。

體重變化：于試驗前1 d和末次給藥后12 h時分別稱量小鼠體重。

自主活動計數：于末次給藥后12 h時，用數字、描記式小動物測定儀測定各組小鼠活動情況。在暗環境下，先將小鼠放入籠內適應3 min，開動秒表，計數小鼠5 min內籠內活動次數。

紅細胞免疫指標測定：采用紅細胞C3b受體花環試驗（RBCC3bRR）和紅細胞免疫復合物花環試驗（RBC-ICR）測定[6]。取小鼠尾血1～2滴，加入2 mL生理鹽水中，洗滌離心3次，每次以1000 r/min離心5 min，配成1.25×107/mL的RBC懸液，備用。取兩支試管，每管加入待測RBC懸液0.075 mL，第1管再加補體致酸酵母菌液（1×108/mL）0.075 mL，均搖勻放入37℃水浴箱中水浴30 min，取出后加生理鹽水0.15 mL混勻，再加0.25%戊二醛0.05 mL，輕輕混勻，取1/3量水平涂片、干燥、瑞氏染色，高倍鏡下隨機計數200個RBC，以黏附2個以上酵母菌的RBC為花環陽性細胞，算出百分率。第1管為RBC-C3bRR，第2管為RBC-ICR。試驗由成都中醫藥大學微生物與寄生蟲實驗室協助完成。

低溫游泳時間測定：末次用藥后12 h時，將小鼠放入8℃水浴箱中（小鼠尾根部用保險絲纏繞，質量占小鼠體重的10%，水深13 cm），記錄小鼠從放入水中至鼠鼻孔不再露出水面的時間。

2 結果

一般狀態：A組小鼠形態正常，體重增加，活潑，無死亡，皮溫正常。B組小鼠用藥3 d后出現消瘦、豎毛、被毛失去光澤、拱背、蜷縮、尾發涼，繼之出現被毛枯槁、嗜睡、食欲不振，第5天個別小鼠開始出現身體發涼，數小時（幾小時至十幾小時）后死亡，第6天時死亡率為25.00%。D1組小鼠用藥第2天出現消瘦，皮毛基本光澤，活動較正常，無死亡。D2組小鼠用藥第2天出現消瘦、懶動、毛色欠光澤，第4天出現死亡，第6天時死亡率為25.00%。C組小鼠整個試驗過程中外觀稍差于D1組，比較活潑，死亡1只。E組小鼠外觀稍差于D2組，無死亡。

體重：結果見表1。可見，與用藥前比較，除A組小鼠體重增加外，其余各組小鼠用藥后體重均有不同程度下降，尤以D1組和D2組下降明顯。

活動頻數：結果見表1。可見，D1組、C組、E組陽虛小鼠活動情況明顯改善，尤以D1組突出。

紅細胞免疫指標：結果見表1。可見，就C3b受體花環率而言，與A組比較，B組明顯不足，而其他各組無明顯差異；與B組比較，D2組小鼠明顯較優，D1組、C組、E組也較高，但無統計學意義。就免疫復合物循環率而言，各組間無明顯差異。

低溫游泳時間：由表1可見，與A組比較，B組和D2組小鼠低溫游泳時間明顯縮短（P＜0.01），其他各組縮短較明顯（P＜0.05）；與B組比較，D1組、C組、E組小鼠低溫游泳時間明顯延長（P＜0.05）。

表1 中藥陽起石溫腎作用實驗研究結果（）

表1 中藥陽起石溫腎作用實驗研究結果（）

注：與 A 組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01；與 B組比較，□P＜0.05，■P＜0.01；與 C組比較，○P＜0.05，●P＜0.01。

組別低溫游泳時間（s）給藥 紅細胞免疫指標（%）活動頻數（次）動物死亡數（只） 體重增加（g）A 組（n=12）B 組（n=12）C 組（n=12）D1組（n=12）D2組（n=12）E 組（n=12）藥物生理鹽水氫化可的松淀粉溶劑陽起石陽起石男寶途徑胃管喂飼肌肉注射胃管喂飼胃管喂飼胃管喂飼胃管喂飼劑量等容量25 mg/kg等容量5 mg/kg 2.5 mg/kg 0.4 mg/kg 0310302.090±1.21-1.420±1.44▲-1.309±0.76▲-3.760±1.24▲□●-3.540±1.97▲●-2.27±1.11▲447.0±37274.0±23▲343.0±26■398.7±12□279.0±51▲●388.0±30□RBC-C3bRR 16.29±5.389.29±1.93△13.41±5.9815.29±7.5114.71±2.81■12.71±5.85 RBC-ICR 13.14±5.3114.43±2.2614.57±4.4715.71±6.2011.14±6.6311.43±3.4692.14±26.245.64±13.2▲57.84±19.4△□60.84±14.1△□48.64±12.1▲62.5±23.1△□

3 討論

利用腎上腺皮質激素造成“陽虛”動物模型在國內已有30多年的歷史。對每只小鼠以大劑量（0.5～1.0 mg/d）氫化可的松肌肉注射后，5 d左右出現形寒、萎靡、蜷縮、毛色不光潔現象；陽虛小鼠肝脾體積縮小，顏色較淡，特別是脾臟體積只有正常對照組小鼠的1/4～1/5，肝脾組織結構、組織化學均發生了改變[6]。臨床上陽虛患者表現為形寒肢冷、畏縮懶言、舌體胖淡、脈沉細，病理解剖檢查多顯示其有組織退化及垂體、腎上腺、睪丸、卵巢等各種內分泌腺質量下降[7]。陽虛動物模型也可見到細胞免疫功能降低。本試驗中，模型組與正常對照組的紅細胞免疫情況存在明顯差異，與臨床報道[8-9]相吻合。因此，腎上腺皮質激素造成的“陽虛”小鼠模型與人的“陽虛”表現極為相似，且用助陽藥特別是溫腎陽藥后可得到部分糾正，故尤其類似“腎陽虛”。本試驗中，應用氫化可的松25 mg/kg造成小鼠陽虛模型，模型組第3天即出現瘦削、蜷縮、皮膚松弛、毛色不潔等虛寒表現，死亡率達25.00%，活動頻數、體重、低溫游泳時間、紅細胞免疫指數明顯降低，說明造模成功。但由于經費原因，尚未作有關組織結構、組織化學指標的比較。

本試驗結果顯示，陽起石高質量濃度組對陽虛小鼠觀察指標改善情況優于陽起石低質量濃度組，初步說明陽起石具有溫補腎陽作用，但要劑量較大時才能起效；同時要注意，陽起石對體重有負面影響，原因有待進一步研究。

參考文獻：

[1][清]黃 奭，輯.神農本草經（卷中）[M].北京：中醫古籍出版社，1982：6-7.

[2][清]黃宮繡.本草求真[M].上海：上海科學技術出版社，1959：30.

[3]孫文倩.中藥陽起石的研究".商品藥材及其混淆品的鑒定[J].藥物分析雜志，1993，13（2）：101-106.

[4]鄺安堃.某些助陽藥對于大劑量皮質激素所致耗竭現象的影響[J].中華內科雜志，1963（11）：113.

[5]郭 峰.紅細胞免疫功能的初步研究[J].中華醫學雜志，1982，62（12）：715.

[6]朱忠勇.實用醫學檢驗學[M].北京：人民軍醫出版社，1992：922-928.

[7]張家慶.“陽虛”動物脫氧核糖核酸合成率和助陽藥作用的研究[J].中醫雜志，1982（3）：64-66.

[8]李文雄.腎虛與紅細胞免疫功能關系的實驗觀察[J].成都中醫學院學報，1989（4）：33.

[9]廖品東.老年人及腎虛患者紅細胞免疫粘附活性的晝夜節律變化[J].中西醫結合雜志，1990，10（4）：217.