補腦養(yǎng)心顆粒質量標準的改進

馮金輝

（湖南省長沙市第一醫(yī)院分院藥劑科，湖南 長沙 410011）

補腦養(yǎng)心顆粒是由五味子、生曬參、丹參片藥材制成的中藥復方制劑，適用于各種慢性疾病引起的頭昏眼花、心煩意亂、記憶力減退、納差腹脹、小便頻數(shù)、疲倦無力等。由于五味子與南五味子性狀相差較大，所含化學成分也有差異，同時在價格上相差數(shù)倍[1-2]，故常有廠家或個人將南五味子冒充五味子使用。而補腦養(yǎng)心顆粒的質量標準研究中僅對生曬參、五味子進行了定性鑒別。為準確地鑒別出五味子，筆者參照有關文獻[3-5]，采用高效液相色譜法測定了補腦養(yǎng)心顆粒中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的含量，并進行了方法學研究，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

LC10AVP高效液相色譜儀；JCX-100G型超聲波清洗機（濟寧超聲電子儀器廠）。補腦養(yǎng)心顆粒（本院藥劑科提供，批號分別為CY080628，CY080702，CY080705，CY080708，CY080711）；五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為 110857-200608，110764-200408，110765-200609）；水為超純水（北京普析通用儀器公司）；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Hypersil BDS C18柱（200 mm ×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇 -水（75 ∶25）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：251 nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。理論塔板數(shù)按五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰計算均應不低于2000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶劑制備

精密稱取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品適量，加甲醇制成每1 mL分別含52.5，15.7，39.5μg的混合溶液，即得混合對照品溶液。取裝量差異下的樣品，研細，取約3 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加入甲醇約40 mL，超聲處理30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取缺五味子藥材的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

線性關系考察：精密吸取質量濃度為52.5，15.7，39.5μg/mL的混合對照品溶液 2.5，5，7.5，10，15，20μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以進樣量為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的回歸方程分別為 Y=88683 X+9999.4（r=0.9993），Y=30886 X-1978.6（r=0.9994），Y=60652 X+9325.9（r=0.9990）。結果表明五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品進樣量分別在0.131～1.05 μg，0.039～0.314 μg，0.099～0.79 μg范圍內與峰面積具有良好的線性關系。

精密度試驗：精密吸取混合對照品溶液，連續(xù)重復進樣測定，結果五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積積分值的 RSD分別為 2.09% ，1.78%1.85%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一批（批號為CY080708）供試品溶液，分別于配制后 0，4，8，12，16，20 h 進樣測定，結果五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面積積分值的 RSD分別為2.42%，2.05%，1.94%（n=6），表明供試品溶液在20 h內基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗：分別精密稱取同一批（批號為CY080708）樣品共6份，每份約3 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定。結果五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的 RSD分別為2.45%，3.01%，2.86%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗：取已知五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量分別為0.038%，0.011%，0.026%的樣品（批號為CY080708）約1.5 g，共6份，精密稱定，精密加入三者質量濃度分別為52.5，15.7，39.5 μg/mL 的混合對照品溶液各 8，10，12 mL，同一量級平行操作2份，按供試品溶液制備方法制備溶液，并按上述色譜條件測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n=6）

2.3 樣品含量測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，照上述色譜條件測定，用外標法計算。結果批號為CY080628，CY080702，CY080705，CY080708，CY080711 的樣品中，每 2.5 g 分別含五味子醇甲 1.05，0.95，0.88，0.95，0.83 mg，含五味子甲素 0.32，0.30，0.35，0.28，0.28 mg，含五味子乙素 0.72，0.70，0.70，0.65，0.63 mg（n=2）。

3 討論

為簡化操作，供試品溶液的制備曾采用超聲處理和加熱回流的方法進行處理[6-9]。結果采用超聲處理方法制成的供試品溶液提取完全、雜質峰少，采用加熱回流方法則雜質干擾較多，故用超聲處理法。曾取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素混合對照品溶液，照分光光度法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄Ⅴ A]在200～400 nm波長范圍內進行掃描，結果五味子醇甲在213，251，280 nm波長處有吸收，五味子甲素在214，251，287 nm波長處有吸收，五味子乙素在218，252，285 nm波長處有吸收。3種成分均在251 nm波長處有最大吸收，故選擇251 nm作為測定波長。

曾對流動相中有機相進行了甲醇、乙腈的選擇，將有機相與水相按不同比例進行調整，經試驗，以甲醇-水（75∶25）為流動相時，樣品中的混合色譜峰達到了基線分離，峰形對稱性好。但3個成分中五味子乙素峰對稱度不好，經多次試驗也未能調整過來。在確定含量限度時，考慮到五味子的產地不同、采收季節(jié)不同等因素可能導致成分之間比例不同，不能因某個含量不合格就確定為產品不合格，經研究考慮，在3個成分峰共同存在的前提下，以五味子木脂素類（包含五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素）的含量限度作為本制劑的含量限度。

本法為補腦養(yǎng)心顆粒的質量控制提供了準確、簡便的方法，從而有效控制了偽品五味子在本制劑的應用，使患者的用藥安全得到了保障。

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