反相高效液相色譜法測(cè)定注射用頭孢美唑鈉的含量

邊 原，何 林，夏祺悅

（四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院藥劑科，四川 成都 610072）

頭孢美唑鈉（cefmetazole sodium）近年來廣泛應(yīng)用于臨床，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌和陰性菌均具有良好的抗菌效能，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）、脆弱擬桿菌及厭氧菌[1]，對(duì)各種"-內(nèi)酰胺酶也有很強(qiáng)的耐受性和穩(wěn)定性，體內(nèi)分布好，不良反應(yīng)少[2]。但頭孢美唑鈉的穩(wěn)定性低，故筆者對(duì)其粉針劑用生理鹽水配制為注射液后在常用試驗(yàn)條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，以便為開展臨床動(dòng)物試驗(yàn)提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

2690型高效液相色譜儀，包括中央控制器、高壓泵、全自動(dòng)進(jìn)樣器、996二極管陣列檢測(cè)器、Millennium Chromatography Manager色譜數(shù)據(jù)工作站（美國(guó)Waters公司）；BP 211D型十萬(wàn)分之一電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）。頭孢美唑?qū)φ掌罚绹?guó)Rockville公司，批號(hào)為1097782）；注射用頭孢美唑鈉（遼寧海思科制藥有限公司，批號(hào)為081001）；甲醇為色譜純，磷酸二氫銨、氫氧化四丁基銨、四氫呋喃為分析純，試驗(yàn)用水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（150 mm ×4.6 mm，5μm）；保護(hù)柱：Dikma Easy Guard C18柱（8 mm ×4 mm，5μm）；流動(dòng)相：以 10%磷酸調(diào)pH至4.5±0.1的磷酸二氫銨溶液（5.75 g磷酸二氫銨溶解在700 mL水中）-甲醇-四氫呋喃-10%四丁基氫氧化銨（700∶280∶25 ∶12.8）；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃ ；檢測(cè)波長(zhǎng)：272 nm；靈敏度：0.03921 AUFS。

2.2 溶液制備

取頭孢美唑?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加蒸餾水溶解并制成每1 mL中含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取注射用頭孢美唑鈉適量，精密稱定，加生理鹽水溶解并制成每1 mL中含0.2 mg的溶液，作為供試品溶液；分別取頭孢美唑?qū)φ掌啡芤?.05，0.5，1，2，3，4，5 mL，置10 mL量瓶中，以流動(dòng)相稀釋至刻度，即得質(zhì)量濃度分別為 1，10，20，40，60，80，100μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在上述色譜條件下，取對(duì)照品溶液和供試品溶液20μL分別進(jìn)樣。結(jié)果出峰時(shí)間均為5.17 min，色譜峰很好，拖尾因子為1.01，且無內(nèi)源性雜質(zhì)峰干擾。高效液相色譜圖見圖1。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取2.2項(xiàng)下各標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液20μL進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積積分值（Y）對(duì)質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程（權(quán)重 W=1/C2）Y=2.65×104X-2.74×103，r=0.9999（ n=7）。結(jié) 果 表明頭孢美唑質(zhì)量濃度在1～100μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)：配置質(zhì)量濃度分別為10，40，80μg/mL的對(duì)照品溶液，分別于同日內(nèi)連續(xù)測(cè)定5次和連續(xù)測(cè)定 5 d，計(jì)算日內(nèi)、日間精密度和準(zhǔn)確度。結(jié)果見表1。

加樣回收試驗(yàn)：取頭孢美唑?qū)φ掌愤m量，精密稱定，加生理鹽水溶解并制成0.2 g/L的溶液，再分別配制成質(zhì)量濃度為10，40，80μg/mL的對(duì)照品溶液，各取20μL進(jìn)樣，計(jì)算方法回收率，結(jié)果見表2。

圖1 高效液相色譜圖

表1 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（）

表1 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（）

加入量（μg/mL）104080日內(nèi)精密度（n=5） 日間精密度（n=5）測(cè)得量（μg/mL）9.90±0.08239.07±0.22779.56±0.135 RSD（%）0.830.590.17測(cè)得量（μg/mL）10.20±0.0339.90±0.2580.05±0.32 RSD（%）0.290.640.40

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

2.4 樣品含量測(cè)定

取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按照外標(biāo)法以峰面積進(jìn)行計(jì)算。對(duì)3批樣品分別同法測(cè)定5次，結(jié)果3批樣品中頭孢美唑的含量分別為標(biāo)示量的 92.92%，93.90%，94.29%，平均 93.70%，RSD為 0.75%（n=5），符合《中國(guó)藥典》所規(guī)定不低于86%的要求。

2.5 穩(wěn)定性考察

取2.2項(xiàng)下新配制的對(duì)照品溶液，稀釋成質(zhì)量濃度分別為10，40，80μg/mL的溶液，依法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果于4℃放置5 d后3種溶液的質(zhì)量濃度分別為（10.17 ±0.05）μg/mL，（39.90 ±0.10）μg/mL，（79.05±0.89）μg/mL，RSD 分別為 0.05%，0.26%，1.12%，表明5 d內(nèi)頭孢美唑鈉對(duì)照品溶液穩(wěn)定性良好。

精密稱取注射用頭孢美唑鈉適量，用生理鹽水配制成臨床動(dòng)物試驗(yàn)所需3種質(zhì)量濃度（33.5，67.0，134.0 g/L）的供試品溶液，分別于室溫（20℃）和低溫（4℃）下避光保存，臨測(cè)前用流動(dòng)相稀釋成質(zhì)量濃度分別為16.75，33.50，67.00μg/mL的供試品溶液，使其測(cè)量值在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。結(jié)果表明供試品溶液在兩種存放條件下放置0～8 h穩(wěn)定性良好，在室溫避光放置3 d內(nèi)、4℃下避光放置5 d后穩(wěn)定性較好（表3、表4）。

表3 室溫與低溫放置0～8 h時(shí)穩(wěn)定性考察結(jié)果（，n=3）

條件 理論值（μg/mL）室溫（20℃）0 h 3 h 5 h 8 h低溫（4℃）16.7533.5067.0016.7533.5067.00測(cè)得值（μg/mL）13.46±0.0627.07±0.1060.16±0.2613.86±0.0626.23±0.1158.98±0.07 RSD（%）0.450.360.430.440.190.13測(cè)得值（μg/mL）13.41±0.0427.29±0.3160.21±1.0213.80±0.0126.27±0.0259.07±0.03 RSD（%）0.291.131.690.080.060.05測(cè)得值（μg/mL）13.42±0.1027.00±0.2559.52±0.1313.79±0.0526.33±0.1558.99±0.06 RSD（%）0.720.930.210.330.570.10測(cè)得值（μg/mL）13.39±0.0527.23±0.7959.67±0.9613.67±0.0726.07±0.1658.45±0.08 RSD（%）0.372.911.610.510.620.14

表4 室溫與低溫放置1～5 d時(shí)穩(wěn)定性考察結(jié)果（，n=3）

表4 室溫與低溫放置1～5 d時(shí)穩(wěn)定性考察結(jié)果（，n=3）

條件 0～8 h平均質(zhì)量濃度RSD（%）1 d 3 d 5 d（μg/mL） 測(cè)得值（μg/mL）RSD（%） 含量（%） 測(cè)得值（μg/mL）RSD（%） 含量（%） 測(cè)得值（μg/mL）RSD（%） 含量（%）室溫13.42±0.030.2212.88±0.030.2295.9812.10±0.040.3190.1613.14±0.100.8982.92（20℃）27.15±0.140.5025.74±0.070.2894.8123.88±0.010.0487.9422.18±0.261.1681.7059.90±0.360.6056.81±0.030.0594.8652.82±0.090.1788.2049.49±0.611.2382.63低溫13.78±0.080.5813.62±0.030.2398.8413.34±0.040.3196.7813.12±0.010.0995.21（4℃）26.23±0.110.4225.84±0.020.0698.5925.28±0.010.0296.4524.96±0.050.2295.2358.87±0.280.4857.60±0.150.2797.8456.48±0.140.2595.9455.62±0.070.1294.48

3 討論

從表3和表4可知，注射用頭孢美唑鈉在室溫條件下降解的速率較低溫條件下大大增加，且有隨時(shí)間延長(zhǎng)而加快的趨勢(shì)，這可能與降解過程中供試品溶液的內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變有關(guān)（pH改變以及降解產(chǎn)物的影響）。劉偉祥等[3]研究了頭孢美唑與維生素C配伍的穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)頭孢美唑與維生素C在0.9%氯化鈉注射液中配伍后0～6 h內(nèi)，其外觀、pH無明顯變化，含量變化不大。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，采用反相高效液相色譜法具有可行性，且為臨床試驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)確給藥及藥代動(dòng)力學(xué)研究提供了理論依據(jù)。

[1]黃兆好，謝翠刁.先鋒美他醇的藥理與臨床應(yīng)用[J].廣東藥學(xué)，2000，10（2）：39.

[2]張春然，唐克慧.頭孢美唑鈉的質(zhì)量與穩(wěn)定性研究[J].國(guó)外醫(yī)藥·抗生素分冊(cè)，2005，26（1）：5-8.

[3]劉偉祥，曾 穎，羅宇芬.雙波長(zhǎng)紫外分光光度法考察頭孢美唑與維生素C配伍的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，1998，18（7）：316.