頭孢氨芐膠囊的人體生物等效性研究

魏 來，鄭 永，趙春景

（重慶醫科大學附屬第二醫院藥劑科，重慶 400010）

頭孢氨芐為半合成的第1代頭孢菌素，抗菌作用較弱，與頭孢拉定相似，適用于治療敏感菌所致的急性扁桃體炎、咽峽炎、中耳炎、鼻竇炎、支氣管炎、肺炎等呼吸道感染，以及尿路感染、皮膚軟組織感染等，不宜用于重癥感染。其對革蘭陽性菌（包括對青霉素敏感或耐藥的金黃色葡萄球菌）的抗菌作用較第2代、第3代頭孢菌素強，且有口服吸收好、毒性小、抗菌譜廣等優點，是臨床抗感染治療的主要藥物之一。目前市售的劑型主要是片劑和膠囊劑，膠囊劑服用方便，生產工藝重現性好，質量容易控制。本試驗對西南藥業股份有限公司研制的頭孢氨芐膠囊（受試制劑）和石藥集團歐意藥業有限公司生產的頭孢氨芐膠囊（參比制劑）進行了生物等效性研究，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀、Waters 1525泵、Waters 2487紫外可變波長檢測器；Waters Breeze工作站；WHX微型渦旋混合器（上海躍進機械廠）；KL512J型氮吹儀（北京康林科技有限責任公司）。頭孢氨芐標準品（中國藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜純，天津市四友生物醫學技術有限公司，批號為20041006）；磷酸二氫鉀（分析純，重慶化學試劑廠，批號為20040205）；雙蒸水（經0.45μm濾膜過濾）；試驗制劑頭孢氨芐膠囊（西南藥業股份有限公司，規格為250 mg/粒，批號為20050102）；參比制劑頭孢氨芐膠囊（石藥集團歐意藥業有限公司，規格為250 mg/粒，批號為051001）。

1.2 試驗方法

選擇健康男性志愿者18名，平均年齡（22.1±3.0）歲，身高（168.9±4.7）cm，體重（59.2 ±5.4）kg；身體健康，無心、肝、腎、消化道、神經系統疾病及代謝異常等病史，健康體格檢查（心電圖、血壓、心率、肝功能、腎功能、脈搏、體溫、血常規、尿常規等）無異常。所有志愿者充分了解試驗內容后自愿受試，并簽署知情同意書。

1.3 給藥方法及血樣采集

采用自身交叉單劑量口服給藥。將18名受試者隨機分為兩組，每組9名，禁食12 h后，于次日晨空腹口服500 mg頭孢氨芐膠囊受試制劑或參比制劑，均用200 mL溫開水送服。給藥后2 h限制飲水，給藥后4 h統一進食低脂標準餐。于給藥前及給藥后15，30，45，60，90，120，150，180，210，240，300 min 時，抽取前臂靜脈血 3 mL，5000 r/min離心5 min后分離血漿，將血漿樣本于低溫（-20℃）保存，待測。間隔1周后交換口服另一種制劑，再按上述方法采集、分離、保存血漿樣本。

1.4 色譜條件

色譜柱為 Symmetry C18柱（150 mm ×4.6 mm，5.4 μm），固定進樣環20 μL；參考文獻[1-4]及預試驗選擇，流動相為甲醇-0.01 mol/L磷酸二氫鉀（120∶320），流速為 1.0 mL/min；紫外檢測波長為254 nm；柱溫為25℃。

1.5 樣品處理

精密取受試者血漿200 μL，加入10%三氯醋酸80 μL，渦旋振蕩 2 min，5000 r/min 離心 5 min，取上清液 20 μL 進樣。

1.6 統計學方法

采用3P97進算計軟件（中國數學藥理學會），根據血藥濃度-時間數據模擬確定模型，選擇最佳藥代動力學模型，計算各個體藥代動力學參數，峰濃度（Cmax）和達峰時間（Tmax）以實測值計算，藥-時曲線下面積（AUC）按梯形面積法計算（時間范圍為 0～300 min）。采用受試制劑和參比制劑的AUC0-300min計算相對生物利用度（F）。各項藥代動力學參數和相對生物利用度參數采用方差分析和雙單側檢驗，用（1-2α）置信區間分析，實測的 Tmax用非參數統計Wilcoxo法進行檢驗，判斷生物等效性。

圖1 高效液相色譜圖

2 結果

2.1 含量測定方法學考察結果

色譜行為：在擬訂的色譜條件下測得的色譜見圖1。可見，頭孢氨芐與血中內源性雜峰分離良好，峰形尖銳，雜質和代謝物不干擾藥物的測定。

標準曲線制備：在空白血漿中加入質量濃度為894.0 μg/mL的頭孢氨芐標準品溶液，使血藥濃度分別為44.70，22.35，11.18，5.59，2.79，1.40，0.70 μg/mL，按 1.5 項下方法處理并測定，以頭孢氨芐峰面積（A）對血藥濃度 C進行回歸分析，得標準曲線方程 C=-0.00276+0.0000939188 A，線性范圍為 44.700 ～0.699 μg/mL，r=0.9999（ n=7），最低檢測質量濃度為 0.117 μg/mL。

精密度試驗：在空白血漿中加入質量濃度為894.0 μg/mL的頭孢氨芐標準品溶液，配制高、中、低質量濃度的標準血樣，按1.5項下方法處理，于日內各測定5次并連續測定5 d。結果見表1。

回收率試驗：在空白血漿中加入質量濃度為894.0 μg/mL的頭孢氨芐標準品溶液，配制高、中、低質量濃度的標準血樣，按1.5項下方法處理并測定，由標準曲線計算出血樣中頭孢氨芐的質量濃度，計算方法回收率。結果見表1。

表1 精密度與回收率試驗結果（n=5）

2.2 藥-時數據及藥代動力學參數

試驗結果表明，口服頭孢氨芐膠囊后的藥-時數據符合一室藥代動力學模型，平均藥-時曲線見圖2，有關藥代動力學參數及生物利用度見表2。

圖2 平均藥-時曲線圖

表2 兩種頭孢氨芐膠囊在人體內的藥代動力學參數

2.3 相對生物利用度及生物等效性分評價

方差分析結果顯示，頭孢氨芐膠囊受試制劑與標準參比制劑的 AUC0-300無顯著性差異（P＞0.05）；單雙側 t檢驗，t1=6.932≥t1-a，t2=6.812≥t1-a，顯示兩者等效；90%置信區間為94.9% ～105.4%，顯示兩藥等效。方差分析結果顯示，兩藥 Cmax無顯著性差異（P ＞ 0.05）；單雙側 t檢驗，t1=7.604≥t1-a，t2=8.155≥ t1-a=1.746，顯示兩者等效；90%置信區間為96.0% ～111.5%，顯示兩藥等效。對實測的 Tmax用非參數統計Wilcoxo法進行檢驗，兩藥間無顯著性差異。

3 討論

采用高效液相色譜法測定人體血漿中的頭孢氨芐質量濃度，方法簡便可靠，能夠滿足頭孢氨芐膠囊人體藥代動力學及生物利用度研究的需要。本試驗獲得了頭孢氨芐膠囊受試制劑與參比制劑的主要藥代動力學參數，生物等效性評價顯示兩種制劑生物利用度相當，結果表明兩廠家生產的頭孢氨芐膠囊在體內的吸收、分布、消除過程一致，統計學分析證明兩種頭孢氨芐膠囊生物等效。

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