三棱提取物對 H22荷瘤小鼠的抑瘤作用

李學臣,張 濤,魏曉東

(佳木斯大學基礎醫學院生物化學教研室,黑龍江 佳木斯 154007)

三棱是抗癌特效藥莪棱蛇草系列中主要成分之一[1],三棱具有抑制腫瘤的功能[2],在抗癌中藥的配方中起著非常重要的作用。藥理學的作用主要表現為增強機體免疫力,改善血液循環,抑制癌細胞,使其不易在血液中停留、聚集,改善癥狀,緩解病情。但三棱對 H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及抑制機制未見報道,我們用三棱的水提物作用于 H22荷瘤小鼠;通過疫器官重量法檢測胸腺指數 /脾臟指數;免疫組織化學方法測定血漿中細胞因子 IL-2和 TN F-α的水平,研究三棱對 H22的荷瘤小鼠免疫調節作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健 康 6～ 8周齡 昆明 系小鼠 40只 ,體重 18～ 22g,雌雄各半。佳木斯大學動物實驗中心提供。

1.2 瘤細胞株

H22腹水瘤模型鼠購自中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所。

1.3 藥物及主要試劑

中藥三棱購于佳木斯大學醫學院藥店,經鑒定為三棱的干燥根莖;5-Fu購于佳木斯大學醫學院藥店,由上海旭東海普藥業有限公司生產;腫瘤壞死因子和白細胞介素-2放免藥盒購于北京福瑞生物工程公司。

1.4 三棱水提物的制備

三棱粉碎后加適量水,浸泡3h,煮沸提取 60min,收集藥液,藥渣再用水煮30min,合并2次藥液,經旋轉蒸發儀50℃減壓回收得三棱水提物,真空干燥箱55℃干燥,得三棱水粗提物固體干粉。臨用前蒸餾水稀釋為含生藥濃度：小劑量組3.9g/mL,大劑量組 7.8g/mL;5-Fu 2.5mg/mL。

1.5 H22荷瘤小鼠模型的建立

無菌操作腹腔穿刺抽取 H22腹水瘤模型鼠腹水,加入適量生理鹽水 ,配成細胞懸液,細胞計數及測定細胞活力,活細胞率達95%。調整細胞密度為2×107/mL備用。用 75%乙醇對小鼠右腋下進行消毒,每只小鼠右腋下皮下注入0.2mL(含癌細胞4×106個)H22腹水瘤細胞懸液成荷瘤小鼠模型。

1.6 分組和給藥

將 40只小鼠稱重、編號隨機分為 A、B、C、D 4組,每組各10只。A組為正常對照組;B組為5-Fu對照組;C、D組為荷瘤三棱水提高劑量組和低劑量組;于24h內開始給藥,隔日稱量體重,按體重給藥,計量為：A組：生理鹽水0.2mL/10g/d一次灌胃;B組 5-Fu0.2mL/10g/d一次腹腔注射組;C、D組分別給三棱水提液 0.2mL/20g/d和0.1mL/20g/d一次灌胃,連續10d,停藥后第2天小鼠摘眼球取血后,斷髓處死,剝離瘤體,取出胸腺、脾臟稱重。

1.7 統計學分析

2 結果

2.1 三棱水提物對 H22的實體瘤小鼠的抑瘤作用

見表 1。由表1可見 ,各給藥組腫瘤重量明顯降低,與對照組比較均有差異 (P＜0.05),結果表明三棱水提物有抑制腫瘤生長作用,且抑瘤率有隨藥物劑量增高而升高的趨勢。

2.2 三棱水提物對 H22荷瘤小鼠胸腺(脾)重量指數的影響

見表 1。由表1可見 ,各給藥組脾腺指數和胸腺重量指數明顯降低。

2.3 三棱水提物對 H22荷瘤小鼠血清 IL-2和 TN F-α含量的影響

見表 1。結果血清 IL-2和 TN F-α水平隨用三棱劑量的增高而升高,各給藥組與對照組比較均有差異(P＜0.05),表明三棱水提物可以提高 H22荷瘤小鼠血清IL-2和 TN F-α水平。

表1 三棱水提物對 H22荷瘤小鼠的抑瘤率、胸腺(脾)重量指數和血清 IL-2和 TNF-α含量的影響(±s,n=10)

表1 三棱水提物對 H22荷瘤小鼠的抑瘤率、胸腺(脾)重量指數和血清 IL-2和 TNF-α含量的影響(±s,n=10)

與對照組比較* P＜0.05,**P＜0.05。

組別 瘤重(g)抑瘤率(%)胸腺指數 (mg/10g)脾腺指數 (mg/10g)IL-2(ng/mL)TN F-α(ng/mL)對照組 2.36±0.42 - 21.96±2.77 96.33±12.56 5.89±1.16 1.26±0.24小劑量組 1.49±0.25* 36.83* 19.37±1.96* 67.83±10.91* 7.66±1.50* 1.61±0.32*大劑量組 1.43±0.19** 39.27** 12.51±1.23** 51.39±9.07** 9.54±1.83** 2.17±0.41**5-Fu組 1.31±0.14** 43.21** 6.20±0.85** 40.20±6.49** 10.74±1.79** 2.51±0.37**

3 討論

中藥三棱的化學成分復雜,藥理作用和臨床應用廣泛。目前對三棱抗腫瘤作用的報道均局限于人肝癌細胞的體外研究方面,在體內的抗肝癌作用及機制未見報道,本文通過免疫機制研究三棱水提物對 H22肝癌荷瘤小鼠模型癌細胞的抑制作用。證明三棱的水提物能夠提高血清中 TNF-a、IL-2水平 ,增強荷瘤鼠的免疫能力,從而發揮抗腫瘤作用,抑制腫瘤生長,抑瘤率隨藥物濃度的提高而提高。鑒于中藥三棱能夠明顯提高 H22荷瘤小鼠的免疫能力抑制腫瘤增長,且毒性低,副作用小,因此三棱可作為抗肝癌的備選藥。今后我們還將從誘導細胞凋亡、抗氧化作用等方面對三棱的抗腫瘤作用進一步研究,為今后三棱的研究和開發提供理論依據。

[1]王吉吉,張瑾峰,付桂芳.莪術、三棱對人肺癌細胞凋亡的影響 [J].首都醫科大學學報,2001,22(4)：304-305

[2]李士怡,周一荻.莪術三棱白花蛇舌草對腫瘤細胞抑制作用的研究 [J].實用中醫內科雜志,2006,20(3)：246-247