不同溫度和濃度下核型多角體病毒對甜菜夜蛾的致病力

徐彩霞，韓日疇

（廣東省昆蟲研究所，廣州，510260）

甜菜夜蛾是一種抗藥性發(fā)展快的害蟲，已對多類化學農藥產生高度抗性，因此生物防治方法的研究不斷普遍和深入。甜菜夜蛾生物防治方法的研究主要集中在病原微生物上。Chambers對Bacillus thuringiensis中的一種新型殺蟲晶體蛋白的基因進行了相關研究[3]。Moulton又報道了一種從Bt分離出來的結晶蛋白的殺蟲機理[2]。核型多角體病毒是調節(jié)甜菜夜蛾自然種群的重要因子。自1949年Steinhaus首先在美國加利福尼亞州分離到一株甜菜夜蛾核型多角體病毒（SeNPV）以來[5]，國內外開展了很多分離鑒定[6]、毒力測定[7，8]、致病機理[9]、病毒制劑及田間應用等方面的研究[10]。SeNPV在大田的使用效果受到濃度、溫度等多種因素的影響[11]，防治效果不盡相同。本文研究了不同溫度和濃度下SeNPV對甜菜夜蛾致病力的影響，以期為田間應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試病毒

甜菜夜蛾核型多角體病毒來自實驗室保存。在室內用甜菜夜蛾幼蟲增殖一次后，將病死蟲尸勻漿，雙層紗布過濾，差速離心3次后，取少量病毒懸浮液，在顯微鏡下用血球計數板計數，計算病毒含量后于4℃冰箱中保存。

1.2 供試昆蟲

甜菜夜蛾3齡幼蟲，采自田間，經多代人工飼料室內飼養(yǎng)后供試驗。

1.3 試驗方法

①不同濃度SeNPV對甜菜夜蛾致病力的影響用PBS緩沖液將SeNPV懸浮液配成1×107PIBs/mL、1×106PIBs/mL、1×105PIBs/mL、1×104PIBs/mL、1×103PIBs/mL 共5種濃度。番薯葉（約3 cm2）洗凈后，在每片葉上滴入5 μL不同濃度的病毒溶液，自然晾干后置于滅過菌的培養(yǎng)皿（直徑9 cm）中，加入1頭3齡幼蟲，24 h后葉片被全部吃完，然后用無毒的番薯葉飼喂，以10頭幼蟲為1個重復，每處理重復3次。以飼喂無毒的番薯葉為對照。所有培養(yǎng)皿統一放置在空調養(yǎng)蟲室的養(yǎng)蟲籠內，溫度（25±1）℃，相對濕度（65±5）%。 每 24 h 觀察記錄幼蟲的病死數和病死情況，并更換新鮮的番薯葉供幼蟲食用，共觀察10 d（或至幼蟲全部死亡）。

②不同溫度下SeNPV對甜菜夜蛾的致病力 用PBS緩沖液將SeNPV病毒配制成濃度為1×106PIBs/mL的懸浮液。潔凈的番薯葉剪成面積約3 cm2，在每片葉上滴入5 μL病毒懸浮液，自然晾干后放于滅過菌的培養(yǎng)皿（9 cm）內，加入1頭3齡幼蟲，24 h后葉片被全部吃完，然后用無毒的番薯葉飼喂，以10頭幼蟲為1個重復，每處理重復3次。以飼喂無毒的番薯葉為對照。培養(yǎng)皿放置在人工氣候箱內，溫度設置為15，20，25，30，35±1℃，相對濕度（65±5）%。 溫度為（15±1）℃時，幼蟲取食量較小，因而試驗用較小面積（約2 cm2）的番薯葉。每24 h觀察記錄幼蟲的發(fā)病和病死情況，并更換新鮮的番薯葉供幼蟲食用，共觀察10 d（或至幼蟲全部死亡）。

表1 不同濃度SeNPV對甜菜夜蛾3齡幼蟲的毒力回歸方程和LT50

表2 不同溫度下SeNPV對甜菜夜蛾3齡幼蟲的毒力回歸方程和LT50

1.4 數據分析

按照以下公式計算不同病毒濃度和溫度下幼蟲的累計死亡率。

累計死亡率 （%）＝（在一定時間內總死亡數/初始蟲數）×100%；累計校正死亡率 （%）＝（處理累計死亡率－對照累計死亡率）/（1－對照累計死亡率）×100%。

以時間的對數值為X，死亡率概率值為Y，計算不同濃度和溫度下的毒力回歸方程和致死中時間（LT50）。用單因素方差分析比較不同濃度或溫度下不同時間幼蟲死亡率的差異 （SPSS 13.0，Turkey's test），分析不同環(huán)境因子對甜菜夜蛾核多角體病毒致病力的影響。

2 結果與分析

2.1 不同濃度下核型多角體病毒對甜菜夜蛾致病力的影響

圖1顯示了不同濃度下，SeNPV病毒對甜菜夜蛾幼蟲的累計死亡率。由圖1可以看出，隨著處理時間的延長，幼蟲死亡率增加，感染10 d后，濃度為1×107PIBs/mL、1×106PIBs/mL、1×105PIBs/mL、1×104PIBs/mL、1×103PIBs/mL時，累計死亡率分別為83.3%，83.3%，86.7%，90.3%，96.0%，差異不顯著（F＝0.917，df＝4，10，p＝0.491）。

根據圖1的結果計算不同濃度下SeNPV對甜菜夜蛾3齡幼蟲的毒力回歸方程和LT50見表1。由表1可知，感染時間受病毒濃度的影響不大，病毒濃度為 1×106PIBs/mL 時，LT50最小，為 3.60 d，相差僅1.15 d。

2.2 不同溫度下核型多角體病毒對甜菜夜蛾的致病力的影響

圖2顯示了不同溫度下甜菜夜蛾3齡幼蟲感染病毒不同時間后的累計死亡率。溫度顯著影響甜菜夜蛾病毒的感染力。感染10 d后，溫度為15，20，25，30，35℃時， 甜菜夜蛾幼蟲的累計死亡率分別為 53.3%，66.7%，91.4%，96.7%，96.7%，差異顯著（F＝9.075，df＝4，10，p＝0.002）。

溫度顯著影響SeNPV對甜菜夜蛾的致病力，溫度為 15，20，25，30，35℃時， 病毒對 3 齡幼蟲的LT50分別為 13.7 d，8.8 d，5.4 d，4.8 d，5.0 d。 隨著溫度的升高，LT50逐漸減小。溫度為15℃時LT50最小，溫度為30℃時，LT50最大，約是前者的3倍。溫度為35℃時，LT50較溫度30℃時略微增大，說明溫度過高可能對病毒致病能力存在一定的抑制作用。

3 結論與討論

圖1 不同濃度下甜菜夜蛾3齡幼蟲感染SeNPV的累計死亡率

圖2 不同溫度下甜菜夜蛾3齡幼蟲感染SeNPV的累計死亡率

①病毒濃度對SeNPV致病力的影響不明顯，病毒濃度為 1×107PIBs/mL、1×106PIBs/mL、1×105PIBs/mL、1×104PIBs/mL、1×103PIBs/mL 時，感染 10 d 后的累計死亡率均達到80%以上，結果差異不顯著，這與前人的研究結果不一致。前人指出，在一定范圍內，不同濃度SeNPV感染甜菜夜蛾2齡幼蟲后，幼蟲死亡率隨著濃度的增大而升高[12]，這可能是因為本試驗所用的幼蟲為生物公司人工飼養(yǎng)的昆蟲，對病毒更為敏感。

②環(huán)境溫度顯著影響SeNPV對甜菜夜蛾3齡幼蟲的致病力，隨著溫度的升高，病毒對目標昆蟲的毒力明顯增強。溫度低于25℃時，病毒對幼蟲的致病力明顯減弱，30℃是幼蟲感染病毒的最適溫度，溫度升高至35℃時，病毒毒力反而略微降低。蔣杰賢等報道29℃是病毒的最適侵染溫度，本文的研究結果與其一致[13]。溫度為20℃時的校正死亡率為72.22%，本文結果與其相當；溫度為35℃時死亡率僅為53.13%[13]，本文結果與其出入較大，這可能與蟲源、病毒株及試驗方法有關。

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