蒼術和艾葉用于馬鈴薯組培室熏蒸的研究

鄒曾碩，劉國鳳，唐 偉，段宏偉

(四川省涼山州馬鈴薯良種繁育推廣中心，四川 西昌 615013)

馬鈴薯脫毒試管苗在生產上的應用，解決了馬鈴薯病毒病危害造成減產的主要問題[1]。但是微生物（真細菌）污染一直是困擾馬鈴薯脫毒試管苗生產的大問題，個別月份（夏秋季節）污染率甚至高達40%。污染直接影響到生產效率、生產成本，甚至打亂生產計劃。污染與培養環境的潔凈度直接相關，而培養室空氣流通少、濕度大，易導致各種菌類滋生，空間潔凈度差。傳統的滅菌方法是使用紫外燈照射、甲醛熏蒸、過氧乙酸等，這些方法都有一定的消毒滅菌效果，但均有一定缺陷。紫外線對組培材料和人體有害；甲醛消毒效果較好，但殘存時間長，對組培材料和人體也有害，甲醛原漿毒物質能與蛋白質結合，吸入高濃度甲醛后，人體會出現呼吸道的嚴重刺激和水腫、眼刺痛、頭痛。皮膚直接接觸甲醛,可引起皮炎、色斑、壞死，經常接觸少量甲醛，能引起慢性中毒，出現黏膜充血、皮膚刺激癥、過敏性皮炎等，甲醛還是基因毒性物質，可導致基因突變，實驗室證實可致癌；過氧乙酸降塵除菌，容易引起培養室濕度升高且刺激味強[2-6]。

采用新型中藥材滅菌劑蒼術和艾葉，通過與甲醛熏蒸效果作比較，克服組培生產傳統消毒方法的缺點，以期能實現馬鈴薯試管苗工廠化大規模生產的安全、高效、無毒害副作用、降低污染率、降低生產成本、提高生產效率和經濟效益的目的，并探求蒼術、艾葉熏蒸在馬鈴薯脫毒試管苗組培生產上是否適用。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試材為中藥鋪采購的蒼術成品塊莖和干燥艾葉，甲醛，高錳酸鉀，馬鈴薯脫毒試管苗繼代培養基。

1.2 試驗設計

2009年于涼山州馬鈴薯良種繁育推廣中心組培室完成該試驗。試驗設置9處采樣點，分別為靠近組培室邊緣的8個點（平均分布）和中央的1個點，熏蒸選取組培室平均分布的3個點。蒼術、艾葉和甲醛熏蒸分別選取兩間組培室同時進行。

1.3 試驗方法

1.3.1 熏蒸滅菌

（1）蒼術、艾葉熏蒸選取一間組培室（體積56 m3），用量為2.0 g·m-3。艾葉經干燥后直接點燃，蒼術先用95%酒精浸泡24 h，熏蒸時以酒精為助燃劑點燃。在培養室按3～5個點均勻分布，點燃后密閉培養室熏蒸1 h。

表1 蒼術在組培室的熏蒸效果Table1 Fumigation effects of atractylodes in potato tissue culture laboratory

（2）甲醛熏蒸選取大小一致的組培室，用量為甲醛2 mL·m-3加高錳酸鉀1 g·m-3，將甲醛溶液倒入盛裝高錳酸鉀的容器后立即撤離，并關閉門窗。

1.3.2 菌落檢測與統計

采用自然沉降法測定菌落數量：打開培養皿蓋暴露10 min，分別在熏蒸前和熏蒸后3～4 d各采樣1次，在室溫下培養2 d，然后按霉菌、細菌進行菌落數分類統計。

采樣方法：分別在組培室的四周（距墻50 cm左右）及中間1～2個點進行采樣。

1.3.3 統計方法

根據奧氏公式計算培養室空氣含菌數(cfu·m-3)，再計算出消毒滅菌率，分析其滅菌效果。

空氣菌落總數（cfu·m-3）=50000 N/A×T

公式中A為培養皿面積(cm2)，T為培養皿暴露時間（min），N 為培養皿平均菌落數（cfu·皿-1）。

2 結果與分析

2.1 蒼術的熏蒸效果

從表1統計可以看出，蒼術熏蒸后馬鈴薯組培室空氣細菌含量與熏蒸前差異達到顯著水平（P＜0.05），從蒼術對真細菌的滅菌率差異來看，對細菌的滅菌率明顯高于對真菌的滅菌率。

2.2 艾葉的熏蒸效果

從表2統計分析可以看出，艾葉熏蒸后馬鈴薯組培室空氣真菌含量與熏蒸前差異達到顯著水平（P＜0.05），從艾葉對真細菌的滅菌率差異來看，對真菌的滅菌率明顯高于對細菌的滅菌率。

2.3 甲醛的熏蒸效果

從表3統計分析可以看出，甲醛對真細菌滅菌效果基本一致，且熏蒸前后組培室空氣含菌量差異顯著（P＜0.05），這證實了甲醛在空氣消毒上的實際效果。

表1～3顯示，組培室的各個空間位置的含菌量各不相同，處于靠墻的角落含菌量最高，其他邊緣次之，中央的含菌量最低。且蒼術、艾葉在熏蒸后有濃郁的中藥氣味，而且殘留時間較長，可對環境進行穩定控制，雖有中藥氣味，但不會對人體造成傷害，較其它熏蒸藥劑（甲醛）安全可靠。通過對熏蒸后組培室馬鈴薯試管苗的生長狀況進行觀察，此中藥材熏蒸對試管苗生長無影響，不會對其造成不良反應。

表2 艾葉在組培室的熏蒸效果Table2 Fumigation effects of argy wormwood leaf in potato tissue culture laboratory

表3 甲醛在組培室的熏蒸效果Table3 Fumigation effects of formaldehyde in potato tissue culture laboratory

3 討論

試驗結果表明，蒼術、艾葉適用于馬鈴薯組培室的消毒滅菌，而且中藥氣味殘留時間較長，可對環境進行持續穩定的控制，雖有中藥氣味，但屬安全無毒氣體，不會對人體造成傷害，較甲醛安全可靠。甲醛已經被世界衛生組織確定為一類致癌物，并且認為甲醛與白血病發生之間存在著因果關系，熏蒸后具有強烈的刺激味道，殘留時間長，影響了生產進度。植物組培室滅菌不僅要考慮對人體的安全影響，同時也要考慮是否對植物試管苗的生長發育造成不良影響，只有對人體和試管苗均無損害的熏蒸制劑才可用。通過對熏蒸后組培室馬鈴薯試管苗的生長狀況進行持續觀察，此中藥材熏蒸對試管苗生長無影響，不會對其造成不良反應。

蒼術、艾葉分別對真菌和細菌有特效，蒼術對細菌的滅菌效果優于真菌，而艾葉對真菌的滅菌效果優于細菌，所以在使用過程中可以針對污染情況的不同采取不同熏蒸方式，既避免材料的浪費又達到滅菌效果，這將對馬鈴薯試管苗組培室真、細菌污染做出針對性滅菌提供依據。從蒼術、艾葉與甲醛的熏蒸效果比較，此新型中草藥熏蒸制劑適用于馬鈴薯組培室的消毒滅菌，克服了傳統消毒方法缺點，安全、高效、無毒害副作用、降低污染率，在馬鈴薯脫毒試管苗工廠化大規模生產中，降低生產成本、提高生產效率和經濟效益。

在真細菌數量記錄中發現組培室的細菌含量比真菌含量要低，這與前人研究結果有所不同[7]，原因是在平時生產過程中我們著重于防治細菌污染，所以組培室的細菌含量相對較低。

[1]蘇云芳.馬鈴薯組培苗工廠化生產中降低污染率的有關措施[J].云南農業,2004(7)： 29.

[2]隋慧雪,史玉蘭,黃凱.4種空氣消毒方法效果觀察[J].河南預防醫學雜志,2008,19(4)： 254-259.

[3]黃美華,呂衛群,胡桂根,等.艾葉與蒼術熏蒸空氣消毒效果觀察[J].護理學雜志,2008,23（10）： 54-55.

[4]王錦軍,黃兆文,李瑤瑤.艾葉化學成分的研究[J].藥學服務與研究,2008,8(6)： 465-466.

[5]周景明,李平,孟維珊.福爾馬林熏蒸消毒十注意[J].中國動物保健,2009(7)： 62-63.

[6]崔曉彪,邵方曉,龐樹和,等.中藥空氣消毒劑研究綜述[J].中國保健營養:臨床醫學學刊,2009,18(4)：104-105.

[7]鄒瑜,林貴美,韋華芳,等.艾葉、蒼術在香蕉組培苗工廠化生產車間的空氣消毒應用研究[J].廣西農業科學,2008,39(6：)767-770.