多殺菌素低劑量處理西花薊馬對藥劑敏感性的影響

龔佑輝， 吳青君， 張友軍， 徐寶云

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所，北京 100081）

西花薊馬是一種世界性園藝害蟲，多殺菌素是為數(shù)不多的防治效果非常好的藥劑之一［1－3］。但已有研究報(bào)道西花薊馬對多殺菌素產(chǎn)生了抗藥性［4－6］。殺蟲劑用于田間后，隨著個(gè)體接觸藥量的差異以及時(shí)間的推移，對部分個(gè)體還存在著亞致死效應(yīng)，包括生物學(xué)的改變，生態(tài)學(xué)行為改變，生殖力的變化，生理生化改變，抗藥性的發(fā)展等［7］。而且有學(xué)者認(rèn)為害蟲再猖獗的產(chǎn)生在相當(dāng)程度上與低劑量農(nóng)藥刺激害蟲增殖有關(guān)［8－9］。目前，多殺菌素已廣泛應(yīng)用于我國鱗翅目害蟲和薊馬的防治中，在多殺菌素長期的低劑量選擇壓力下，西花薊馬是否對多殺菌素出現(xiàn)敏感性下降，以及是否會(huì)對其他殺蟲劑的敏感性產(chǎn)生影響均有待研究。

本研究通過用多殺菌素低劑量繼代處理西花薊馬，連續(xù)選育47代后測定了處理種群對其他5種不同類型殺蟲劑的敏感性差異，擬探討在連續(xù)低劑量選擇壓下西花薊馬對多殺菌素的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)，以及是否影響對其他殺蟲劑的敏感性，研究結(jié)果可為田間西花薊馬綜合防治和多殺菌素的合理使用提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 供試?yán)ハx及藥劑

西花薊馬敏感種群（SS）：2003年從中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所溫室內(nèi)的甜瓜（CucumismeloL.）上采集［10］，采用豆莢法在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)至今。飼養(yǎng)條件為：25℃±1℃，RH 65%，光周期L∥D＝16h∥8h。飼養(yǎng)期間未接觸任何殺蟲劑。多殺菌素低劑量選育西花薊馬種群（Sub）：用多殺菌素LC25濃度對敏感種群連續(xù)處理（每次處理的濃度為上一次生物測定的LC25值）。

藥劑：多殺菌素（spinosad）（2.5%懸浮劑，美國陶氏益農(nóng)公司）、阿維菌素原藥 （abamectin）（97%，河北威遠(yuǎn)化工有限公司）、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽原藥 （emamectin benzoate）（57.6%，北京華戎化工有限公司）、吡蟲啉原藥（imidacloprid）（95.3%，江蘇常隆化工有限公司）、高效氯氰菊酯原藥 （beta－cypermethrin）（95.4%，南京紅太陽股份有限公司）、吡丙醚原藥（pyriproxyfen）（96%，南運(yùn)施壯化工有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 生物測定方法

參照 Alfredo ＆ Anthony［11］的 TIBS法，做 適當(dāng)?shù)男薷慕⒘巳~管藥膜法。將每個(gè)濃度藥液分別注滿1.5mL離心管4只，每只為1重復(fù)，蓋緊蓋子之后平放4h。然后倒掉藥液，將離心管置于室溫下晾干，待用。用長約10cm左右的細(xì)針針尖經(jīng)酒精燈加熱，在晾干的離心管（1.5mL）管底燙直徑約2～3mm的孔。將無蟲新鮮的嫩甘藍(lán)葉洗干凈，晾干后用打孔器打成直徑為1.5cm的小圓片。分別在每個(gè)濃度藥液中浸10s。浸過的葉碟置實(shí)驗(yàn)臺(tái)上晾干，待用。在吸蟲之前，用小鑷子將葉碟夾入相應(yīng)藥液濃度的離心管中，每管1片，放置平整。真空泵的接口用紗布封好，套在以上處理好的離心管管口，打開真空泵，調(diào)節(jié)氣流大小，把離心管管底的燙孔對準(zhǔn)薊馬，使蟲順氣流吸入離心管。先對照后處理，每管吸2齡若蟲15～25頭，然后蓋好管蓋，用封口膜封好燙孔。25℃環(huán)境下放置2d或3d后調(diào)查結(jié)果。數(shù)據(jù)用POLO軟件處理，計(jì)算LC25、LC50值及其95%置信區(qū)間等。高效氯氰菊酯和吡丙醚原藥用丙酮溶解，其他藥劑原藥都先用少量丙酮溶解后再用含1‰曲拉通（Triton X－100）的蒸餾水稀釋。高效氯氰菊酯的試蟲用剛孵化3d后的成蟲，吡丙醚的試蟲用1齡若蟲，觀察時(shí)間為4d。其他藥劑都用2齡若蟲作為試蟲。

1.2.2 低劑量多殺菌素對西花薊馬的處理方法

自2007年1月開始從西花薊馬敏感種群中分出一部分西花薊馬單獨(dú)飼養(yǎng)，用多殺菌素生物測定獲得的LC25濃度浸泡新鮮干凈的豆莢2h，自然晾干后喂食西花薊馬成蟲，整個(gè)成蟲期均用藥劑處理后的豆莢飼喂，若蟲用未用藥處理的豆莢飼喂。每隔幾代進(jìn)行生物測定，每次處理的濃度為上一次LC25的計(jì)算值。到2009年5月為止，已用LC25劑量處理47代。

2 結(jié)果與分析

2.1 低劑量處理種群對多殺菌素的敏感性變化

2007年1月開始采用多殺菌素的LC25劑量對西花薊馬進(jìn)行處理，到2009年5月處理第47代。

從表1可以看出，室內(nèi)敏感種群在完全沒有殺蟲劑的環(huán)境中飼養(yǎng)，且沒有外來種群混雜下，隨著時(shí)間的推移，西花薊馬敏感種群對多殺菌素的敏感性不斷上升，LC50到達(dá)0.020 0mg／L時(shí)基本穩(wěn)定。而多殺菌素低劑量處理的種群在11代后對多殺菌素的敏感性下降1.5倍，處理36代后已下降5.19倍，處理47代后，Sub種群的LC50是敏感種群的6.72倍，達(dá)到了低水平抗性。

2.2 低劑量處理種群對其他殺蟲劑的敏感性變化

對西花薊馬用多殺菌素LC25劑量處理41代后，測定了其對其他5種殺蟲劑的敏感性。表2顯示，當(dāng)Sub種群對多殺菌素的敏感性下降為SS種群的5.19倍時(shí)，Sub種群對阿維菌素、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和吡蟲啉敏感性也下降，分別為敏感種群的2.68、2.92倍和1.89倍，且差異顯著。對高效氯氰菊酯和吡丙醚的敏感性無明顯種群差異。

表1 西花薊馬敏感種群和多殺菌素低劑量處理種群對多殺菌素敏感性變化

表2 不同殺蟲劑對西花薊馬敏感種群和多殺菌素低劑量處理種群毒力測定

3 結(jié)論與討論

對于那些繁殖速率快、發(fā)生世代多的害蟲如蚜蟲、螨類、小菜蛾、薊馬等，如果長期處于藥劑低劑量的選擇壓力下，對藥劑敏感性低的個(gè)體存活和繁殖機(jī)會(huì)較大，對整個(gè)種群來說有利于抗藥性能力的積累和發(fā)展。高宗仁等［12］用低劑量溴氰菊酯、氧樂果、殺蟲脒和三氯殺螨醇等4種藥劑對朱砂葉螨（Tetranychuscinnabarinus）連續(xù)選擇3代后發(fā)現(xiàn)，其對這4種藥劑的敏感度均有不同程度的下降。在室內(nèi)，Young等［13］采用LD50劑量的多殺菌素連續(xù)處理煙蚜6代后，抗性倍數(shù)僅為1.68倍，但是連續(xù)處理14代后，抗性倍數(shù)高達(dá)1 068倍。在本試驗(yàn)中，隨著低劑量多殺菌素處理代數(shù)的增加，處理種群對多殺菌素敏感性下降的趨勢在增大，并逐漸產(chǎn)生低水平抗性，說明在長期低劑量的選擇壓力下，西花薊馬對多殺菌素有產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)。

許多研究認(rèn)為，多殺菌素與其他藥劑之間無交互抗性。在本研究中對多殺菌素有低水平抗性的種群對阿維菌素和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽的敏感性下降了2倍多，說明用多殺菌素低劑量處理西花薊馬后，會(huì)影響其對其他藥劑的敏感性，有可能導(dǎo)致田間西花薊馬的再猖獗危害。交互抗性多存在于具有相同作用機(jī)制的殺蟲劑之間，不同類型殺蟲劑也會(huì)由于相同的解毒代謝機(jī)制產(chǎn)生交互抗性。有報(bào)道顯示，西花薊馬對一些傳統(tǒng)類殺蟲劑的抗性機(jī)制是多功能氧化酶介導(dǎo)的代謝抗性［14］。低水平抗性下，西花薊馬對多殺菌素的抗性可能主要由于解毒酶活性的升高而致。在本試驗(yàn)中，阿維菌素、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對多殺菌素低劑量處理種群的毒力降低，推測可能與西花薊馬對其具有相同的解毒機(jī)制有關(guān)。

吡丙醚是昆蟲生長調(diào)節(jié)劑，與多殺菌素的作用機(jī)制完全不同，雖然吡丙醚對西花薊馬的活性不高，但也可以考慮在抗性治理中作為輪換使用的藥劑。

［1］Elzen G W，Elzen P J，King E G.Laboratory toxicity of insecticide residues toOriusinsidiosus，Geocorispunctipes，HippodamiaconvergensandChrysoperlacarnea［J］.Southwestern Entomol，1998，23：335－34.

［2］Ludwing S，Oetting R.Effect of spinosad onOriusinsidiosus（Hemiptera：Anthocoridae）when used forFrankliniellaoccidentalis（Thysanoptera：Thripidae）control on greenhouse pot chrysanthemums［J］.Fla Entomol，2001，84：311－313.

［3］Eger J E，Stavisky J，F(xiàn)underburk J E.Comparative toxicity of spinosad toFrankliniellaspp.（Thysanoptera：Thripidae），with notes on a bioassay technique［J］.Fla Entomol，1998，81：547－551.

［4］Herron G A，James T M.Monitoring insecticide resistance in AustralianFrankliniellaoccidentalisPergande （Thysanoptera：Thripidae）detects fipronil and spinosad resistance［J］.Austral J Entomol，2005，44：299－303.

［5］Loughner R L，Warnock D F，Cloyd R A.Resistance of greenhouse，laboratory，and native populations of western flower thrips to spinosad［J］.Hortscience，2005，40：146－149.

［6］Bielza P，Quinto V，Contreras J，et al.Resistance to spinosad in the western flower thrips，F(xiàn)rankliniellaoccidentalis（Pergande），in greenhouses of south－eastern Spain［J］.Pest Manag Sci，2007，63：682－687.

［7］Desneux N，Decourtye A，Delpuech J M.The sublethal effects of pesticides on beneficial arthropods［J］.Annu Rev Entomol，2007，52：81－106.

［8］Morse J G，Zareh N.Pesticide－induced hormoligosis ofCitrus thrips（Thysanoptera：Thripidae）fecundity［J］.J Econ Entomol，1991，84：1169－1174.

［9］Nandihalli B S，Pati1BV，Hugar P.Influence of synthetic pyrethroid usage on aphid resurgence in cotton［J］.Karnataka J of Agric Sci，1992，5（3）：234－237.

［10］Zhang Z J，Wu Q J，Li X F，et al.Life history of western flower thrips，F(xiàn)rankliniellaoccidentalis（Thysan.，Thripae）on five different vegetable leaves［J］.J Appl Entomol，2007，131（5）：347－354.

［11］Alfredo R，Anthony MS.Development of a bioassay systeMfor monitoring susceptibility inThripstabaci［J］.Pest Manag Sci，2003，59：553－558.

［12］高宗仁，李巧絲，劉孝純.殺蟲劑對朱砂葉螨某些生物學(xué)特性的影響［J］.植物保護(hù)學(xué)報(bào)，1991，18（3）：283－287.

［13］Young H P，Bailey W D，Roe R M.Spinosad selection of a laboratory strain of the tobacco budworm，Heliothisvirescens（Lepidoptera：Noctuidae），and characterization of resistance［J］.Crop Protection，2003，22：265－273.

［14］Espinosa P J，Contreras J，Quinto V，et al.Metabolic mechanisms of insecticide resistance in the western flower thrips，F(xiàn)rankliniellaoccidentalis（Pergande）［J］.Pest Manag Sci，2005，61：1009－1015.