TPX2蛋白在乳腺癌組織中的表達及意義

張惠球 沈浩賢 劉奕生

廣東省廣州市廣州醫學院形態學實驗中心（510182）

TPX2蛋白是脊椎動物一個新的紡錘體成分家族，作為紡錘體成分的一種微管相關蛋白，彌散分布在S期和G2期細胞的核心，在細胞有絲分裂紡錘體形成過程中發揮重要作用。TPX2在多種惡性腫瘤中存在過表達，導致細胞中心體異常擴增、異倍體形成以及細胞惡性轉化。并與腫瘤的生物學行為有關。研究表明，TPX2表達受細胞周期的嚴格調控，阻斷其表達可抑制腫瘤細胞的生長，有望成為腫瘤治療的候選靶點，TPX2與乳腺癌臨床病理特征間的關系國內報道較少，本研究旨在檢測TPX2在乳腺癌中的表達情況，探討其與乳腺癌發生、發展之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

組織標本為廣州醫學院形態學實驗中心2006至2007年收集存檔蠟塊，共80例，均為女性；另選20 例正常乳腺組織作為對照組。

1.2 方法

采用免疫組織化學 SP法，抗體TPX2為基因公司產品，所用SP試劑盒，DAB顯色劑均為福州邁新生物公司產品。組織經10%甲醛溶液固定，常規石蠟包埋；4μm厚連續切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，檸檬酸鹽高溫、高壓修復抗原；實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，TPX2抗體稀釋液的濃度為1∶500，用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照；DAB 顯色，蘇木素復染，顯微鏡下觀察。

1.3 結果判斷

以癌細胞核呈現棕黃色顆粒為TPX2蛋白表達陽性。判斷標準為隨機計數10個高倍視野，觀察100個細胞中陽性細胞所占百分比，按陽性腫瘤細胞數占總細胞數的百分比分成兩組；染色細胞比例＜10%為陰性；≥10%為陽性。

1.4 結果統計

本研究兩樣本率的比較經統計學χ2檢驗處理，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 TPX2蛋白在正常乳腺導管上皮和浸潤性乳腺癌中的表達

TPX2蛋白陽性表達主要定位于腫瘤細胞的細胞核，少部分表達于細胞質。在80 例乳腺癌組織中，TPX2陽性表達62 例，陽性表達率為77.5%；在20例正常乳腺組織中全部陰性表達，陽性表達率為0.0%，TPX2蛋白在兩者之間的表達存在顯著差異（P＜0.01），說明TPX2蛋白的表達與乳腺癌的發生有聯系。本實驗在部分正常乳腺組織偶見少數基底上皮細胞和中等量的亞基底細胞顯示陽性反應，因表達的細胞數較少，達不到判定標準，故作為陰性結果處理。另本實驗因未對乳腺癌組織進行分類，故TPX2蛋白表達是否與乳腺癌組織類型以及乳腺癌患者的淋巴結轉移、預后等因素相關還有待進一步的實驗研究（表1）。

表1 TPX2在正常乳腺組織和乳腺癌組織中的表達

3 討 論

乳腺癌是常見的惡性腫瘤，在我國其發病率也呈上升趨勢，特別是經濟發達地區已成為威脅婦女生命和健康的大敵[1]。早期發現、早期診斷和早期治療是改善乳腺癌預后的重要因素。目前除雌、孕激素受體、表皮生長因子受體外，尚無對乳腺癌治療及預后有明確指導價值的分子標記。化療是目前腫瘤治療的主要手段，但其毒性的非特異性和耐藥性的存在依然是困擾臨床醫生的主要問題[2]。因此，尋找乳腺癌早期診斷和治療的新的標記分子具有非常重要的意義[3]。

TPX2是一種受細胞周期嚴格調控的核增殖相關蛋白，參與細胞有絲分裂的紡錘體微管功能[4]，圍繞TPX2與細胞周期、紡錘體微管及腫瘤增殖等方面的研究開展，這個新的增殖標志物可能成為腫瘤細胞增殖的確切的評估指標。隨著 TPX2單克隆抗體的成功制備，逐漸出現對腫瘤石蠟組織切片免疫組織化學方面的研究，其中包括在淋巴結陰性的乳腺癌、子宮內膜癌、神經母細胞瘤和黑色素細胞病等方面的研究，結果均提示病變組織中的TPX2表達水平對疾病生物學行為有預測價值，并可作為形態學改變和獨立的預后評價指標；而且，端粒酶活性與TPX2高表達的相關性提示了TPX2對于細胞永生化的貢獻。

目前國際上的相關研究多集中于對該蛋白基礎生理功能方面的探討，國內有關TPX2蛋白的研究多集中與呼吸系統腫瘤的研究，而有關TPX2蛋白與乳腺癌的關系的研究國內報道較少。本實驗采用免疫組織化學法檢測乳腺癌組織和正常乳腺組織中的TPX2表達情況，結果表明TPX2蛋白于乳腺癌的發生存在相關性。TPX2在人體組織，特別是腫瘤中的表達提示其可作為腫瘤形態學改變和獨立的預后評價指標，生化分析和體內、外實驗均表明TPX2過表達導致細胞中心體擴增，出現明顯DNA異倍體及多倍體的形成，提示過量的TPX2可能抑制正常核分裂的完成及干擾TPX2激活的生理途徑，并且TPX2異常表達可能在癌變和惡性腫瘤進展中發揮作用。有學者采用免疫組織化學技術對乳腺癌、子宮內膜癌、神經母細胞瘤和黑色素細胞瘤的石蠟包埋組織切片的研究結果提示，病變組織中的TPX2標記指數對疾病生物學行為有預測價值，并可作為形態學改變和預后評價指標[4]。

我們采用免疫組織化學的方法，對80例乳腺癌組織樣本進行TPX2蛋白檢測分析，結果顯示，TPX2蛋白表達水平在腫瘤組織中明顯高于正常組織（乳腺癌組織陽性表達率為77.5%；乳腺組織陽性表達率為0），提示TPX2的高表達與乳腺癌的發生密切相關。有報道指出，TPX2的表達與腫瘤的分期有關，而且隨著腫瘤分期越晚或組織病理學分級越差，TPX2的表達水平越高[4]。研究表明，TPX2與惡性腫瘤異倍體之間有明顯的相關性。因此，可以推斷TPX2的異常可能與惡性腫瘤的分級、臨床分期及預后有某種相關性[5]。本實驗因未對乳腺癌組織進行分類，故TPX2蛋白表達與乳腺癌組織類型以及乳腺癌患者的淋巴結轉移、預后等因素是否相關還有待進一步的實驗研究。

目前，TPX2蛋白已被認為是一種新的癌基因，并越來越引起關注。其研究仍有許多空白。進一步研究TPX2的表達和作用機制，不僅有助于腫瘤的早期診斷和預后判斷，而且有可能尋找到特異且實用的針對異常TPX2信號通路的治療方案，從而延緩多種腫瘤細胞的增生或轉移。相信隨著研究的深入，TPX2必將被徹底了解，為抗腫瘤治療提供新的思路[5]。

[1]陸巍,童漢興,周恒花,等.乳腺癌組織中期因子的表達及其臨床意義[J].中國臨床醫學,2008,15(3):433-434.

[2]林海,侯敢,黃迪南.以TRAIL為靶點的腫瘤治療研究進展[J].生命科學,2007,19(5):492-495.

[3]張麗軍,譚丁桃.乳腺癌蛋白質組研究進展[J].生命科學,2007,19(5):512-516.

[4]林冬梅,馬瑩,肖汀,等.TPX2在肺鱗狀細胞癌及其癌前病變中的表達和意義[J].中華病理學雜志,2006,35(9):540-544.

[5]張云香, 李湘洲.TPX2在細胞有絲分裂中的作用及與腫瘤發生的關系[J].腫瘤研究與臨床,2007,19(12):861-864.