前列地爾凍干乳的溶血性和急性毒性評價

洪 軍 劉國輝 張光玉

前列地爾，又名前列腺素E1，是天然前列腺素（Prostaglandinum，PG）類物質中的一種。前列腺素存在于大多數哺乳動物組織內，其基本結構為含有一個環戊烷及兩個脂肪側鏈的二十碳脂肪酸。根據環戊烷上雙鍵位置和取代基的不同可以分為幾種類型，其中主要有E、F、A、B等四類。每一類有不同的亞型，具有廣泛的生物學效應[1]。

內源性前列腺素E1在體內分布廣，其含量甚微，一般細胞均能合成，在局部發揮生物學作用后迅速失活，具有抑制血小板聚集、血栓素A2生成、動脈粥樣硬化、脂質斑塊形成及免疫復合物的作用；能擴張外周血管和冠狀血管，降低外周阻力和血壓，有保護缺血性心肌、縮小心肌梗死面積等作用，還有排鈉、利尿的作用及對肝、腎、肺、胃病變均有治療、保護作用，臨床上在心血管疾病、呼吸系統疾病、腦血管疾病、糖尿病并發癥、肺動脈高壓、腎病、男性不育疾病、肝腎綜合征（HRS）等許多方面均有應用，尤其對老年心血管患者的治療有獨特療效。

前列地爾目前已上市的劑型有注射用前列地爾粉針劑、前列地爾注射液、前列地爾尿道栓和前列腺素E1乳膏，但它們都存在各種缺陷，導致不良反應的發生[2]。為此研究人員開發了一系列新劑型，在研的品種主要有注射用前列地爾脂質體、前列地爾凍干粉（新輔料和環糊精包合物）、前列地爾凍干乳、注射用前列地爾膠束、鼻粉劑與口腔制劑（舌下片，口腔貼片或口腔含片）等劑型。其中注射用前列地爾脂質體、前列地爾凍干乳、注射用前列地爾膠束等注射劑正處在新藥審評階段。

本課題的目的就是通過家兔的溶血性試驗、局部刺激性試驗、豚鼠的過敏性試驗及急性毒性試驗對前列地爾凍干乳做出安全性評價，為前列地爾凍干乳進入臨床提供保證。

1 前列地爾凍干乳的溶血性試驗研究

1.1 儀器、實驗材料與實驗動物

1.1.1 儀器

高速離心機，上海安亭科學儀器廠；數顯式電熱恒溫水浴鍋，上海躍進醫療器械廠；兔臺，自制；離心管（20mL）、玻璃棒，若干支。

1.1.2 實驗材料及制品

前列地爾凍干脂肪乳，自制，10μg/支，臨用前2mL注射用水溶解；前列地爾脂肪乳劑，自制5μg/mL；0.9%氯化鈉注射液，哈爾濱制藥六廠生產。

1.1.3 實驗動物

新西蘭大耳白，體重2.8～3.2kg，雌、雄各半。

1.2 試驗方法與試驗結果

1.2.1 試驗方法[3，4]

將家兔背位固定于兔臺，分離頸總動脈插管取血約20mL于離心管中，用玻璃棒輕輕攪去纖維蛋白，加生理鹽水搖勻，離心（1500rpm×15min）后傾去上清液，如此反復3～4次，直至上清液不顯紅色且透明為止，用0.9%氯化鈉注射液配成2%紅細胞混懸液供試驗用。取前列地爾凍干乳一支，加2mL注射用水溶解，搖勻。取10mL試管7只，編號并按表1所示，加入各種試液，其中第6管為生理鹽水空白對照、第7管為陽性對照（蒸餾水）。各管輕輕搖勻，置37℃水浴中，分別觀察并記錄0.5、1、2、3、4h的結果，觀察有無溶血和紅細胞凝集現象，并于室溫下放置24h，繼續觀察有無溶血及紅細胞凝集發生。按表2標準判斷。

表1 體外溶血試驗

1.2.2 試驗結果

前列地爾凍干乳在37℃水浴中觀察0.5～4h內未出現溶血或部分溶血現象，表現為溶液中紅細胞全部下沉，上層液乳白色與前列地爾注射液相同，搖勻后紅細胞上浮分散；生理鹽水組（第6管）在0.5～4h內也未出現溶血或部分溶血現象，蒸餾水組（第7管）在各時間點呈明顯粉紅色，全溶血。未見紅細胞凝集。室溫觀察24h亦無溶血和紅細胞凝集現象。以上試驗重復3次，結果詳見表3。

表2 溶血結果判斷

表3 前列地爾體外溶血試驗結果

1.3 討論

注射制劑進入血液后，可能引起人紅細胞溶血，因此必須檢查制劑的溶血性是否符合要求。天然磷脂是脂肪乳的主要成分，為復雜的混合物，主要包括磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸、二油酰磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、二磷脂酰甘油及少量的鞘氨醇、神經酰胺、腦苷、神經節苷酯、碳水化合物及微量未探明物質等。其氧化產物中有一種為溶血卵磷脂，會引起紅細胞的破裂而導致動物死亡。本實驗中所用的注射用前列地爾凍干乳經常規體外試管溶血檢驗方法試驗不會產生溶血反應，表明注射用前列地爾凍干乳溶血性符合靜脈注射制劑的要求。

2 前列地爾凍干乳的急性毒性試驗研究

2.1 實驗材料與實驗動物

2.1.1 實驗材料及制品

前列地爾凍干脂肪乳，自制，10μg/支；前列地爾脂肪乳劑，自制，5μg/mL；0.5%葡萄糖注射液，哈爾濱制藥六廠生產。

2.1.2 實驗動物

ICR小鼠，體重19～22g。以上動物均購自吉林大學基礎醫學院實驗動物部。

2.2 試驗方法與試驗結果

2.2.1 試驗方法[3，4]

取40只小鼠，雌雄各半，隨機分為兩組：注射用水組和凍干乳劑組。將前列地爾凍干乳用適量注射用水溶解，每只小鼠靜脈注射給藥0.5mL，觀察2周。

2.2.2 試驗結果

給藥后立即觀察動物表現，均有體位固定，但不穩，自發活動少，安靜，呼吸短暫緩慢，5～10min后恢復正常，飲食、飲水、排便均正常，口、眼、鼻無異常分泌物，動物狀態良好體重增長正常。連續觀察14d，動物無異常反應。

2.3 討論

由于前列地爾脂肪乳靜脈給予小鼠至可能承受的最大容量50mL/kg未見動物死亡，也未見嚴重的急性毒性，按此劑量給予小鼠前列地爾凍干乳所做的急性毒性試驗結果表明，前列地爾凍干乳未見嚴重的急性毒性。

3 結 論

通過對前列地爾凍干乳劑進行的家兔溶血性試驗未見有異常反應出現，說明在所采用的試驗條件下注射用前列地爾凍干乳靜注不會引起溶血反應；同時急性毒性試驗表明本品具備足夠的安全性。以上安全性考察試驗說明本工藝處方所得前列地爾凍干乳生物相容性較好，供靜脈注射給藥安全。

[1] 胡志,高麗,孫秀峰,等.前列地爾臨床應用的綜合評價[J] .中國處方藥,2005,4(37):73-77.

[2] 彭婕.34例前列地爾所致不良反應分析[J] .中國新藥雜志,2006,15(1):65-67.

[3] 國家食品藥品監督管理局藥品審評中心.化學藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則[S] .2005年版.

[4] 徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M] .北京:人民衛生出版社,2002:910.