反相高效液相色譜法同時測定刺五加腦靈液中綠原酸和異秦皮啶含量

高云峰

(哈藥集團中藥二廠，黑龍江 哈爾濱 150078)

刺五加為五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms干燥根及根莖。刺五加腦靈液由刺五加浸膏和輔料制成，具有健脾補腎、寧心安神的功效[1]，主治心脾兩虛、脾腎不足所致心神不寧、失眠多夢、健忘、倦怠乏力、食欲不振，綠原酸和異嗪皮啶是其主要活性成分[2－3]。筆者根據文獻[4－5]建立了可同時測定刺五加腦靈液中綠原酸和異嗪皮啶含量的反相高效液相色譜(RP－HPLC)法，為有效控制產品質量提供了理論依據。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀(Waters公司)，包括 1525型泵，717plus型自動進樣器，2996型二極管陣列檢測器;DGW－99型臺式高速微型離心機(寧波新芝生物科技股份有限公司);PB220型精密pH計(上海雷磁儀器廠)。乙腈、甲醇、磷酸(色譜純)，水(二次重蒸水)，其他試劑及藥品(國產，分析純);綠原酸對照品(批號為110753－200413)、異嗪皮啶對照品(批號為110837－200304)均由中國藥品生物制品檢定所提供;刺五加腦靈液(哈藥集團中藥二廠)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.1%磷酸水溶液(17∶83，V/V);流速:1 mL/min;檢測波長:335 nm;柱溫:室溫;進樣量:10 μL。在此條件下，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

分別精密稱取綠原酸和異嗪皮啶對照品10 mg，用甲醇溶解并分別定容于10 mL量瓶中，搖勻，得質量濃度為1 mg/mL的綠原酸和異嗪皮啶對照品溶液。精密吸取刺五加腦靈液1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，用0.45 μm濾膜過濾，作為供試品溶液。取處方中不含刺五加的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察:將對照品溶液稀釋為不同質量濃度后進行檢測。以對照品溶液質量濃度對峰面積進行線性回歸，繪制標準曲線。回歸方程綠原酸為 Y=2 177 858.625 0 X+29 485.100 0(r=0.999 6)，異嗪皮啶為 Y=2 963 456.375 0 X －61 824.300 0(r=0.999 5)。結果表明，綠原酸和異嗪皮啶的質量濃度線性范圍均為0.01 ～ 1 mg/mL。

精密度試驗:取對照品溶液，重復測定6次。結果綠原酸和異嗪皮啶峰面積的 RSD分別為0.54%和0.49%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重現性試驗:取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測定。結果綠原酸和異嗪皮啶峰面積的 RSD分別為 0.81%和0.92%(n=6)，表明方法重現性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，室溫下放置，于 2，4，6，8，10，12 h時分別進樣記錄峰面積。結果綠原酸和異嗪皮啶的 RSD分別為1.26%和0.88%(n=6)，表明供試品溶液在室溫條件下12 h內穩定。

加樣回收試驗:取樣品6份，分別加入不同量的綠原酸和異嗪皮啶對照品溶液，依法測定峰面積，計算回收率。結果見表2。

表2 綠原酸和異嗪皮啶加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

按2.1項下色譜條件測定了6批樣品的綠原酸和異嗪皮啶含量。結果見表3，可見綠原酸和異嗪皮啶的平均含量分別為7.65 mg/mL 和 0.65 mg/mL。

3 討論

綠原酸和異嗪皮啶是刺五加的主要活性成分，本試驗采用RP－HPLC法同時測定刺五加腦靈液的綠原酸和異嗪皮啶含量。在200～400 nm波長范圍內對綠原酸和異嗪皮啶對照品的甲醇溶液進行紫外－可見掃描，綠原酸和異嗪皮啶分別在344 nm和327 nm波長處有最大吸收，因此選335 nm波長為測定波長。采用文中的流動相系統，綠原酸和異嗪皮啶與其他峰能夠達到基線分離，分離效果良好。

表3 刺五加腦靈液中的含量

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:1 441.

[2]肖培根.新編中藥志(第一卷)[M].北京:化學工業出版社，2002:568－569.

[3]Grazyna Z，Slawomi RK.Application of conventional UV，photodiode array(PDA)and fluorescence(FL)detection to analysis of phenolic acids in plant material and pharmaceutical preparations[J].J Pharm Biomedical Analy，2001(24):1 065 － 1 072.

[4]金佩芬.高效液相色譜法測定刺五加注射液中異秦皮啶含量[J].中國藥業，2009，18(3):9.

[5]劉艷新，麻風華，王 力.高效液相色譜法測定刺五加腦靈液中異秦皮啶含量[J].中國藥業，2005，4(10):42.