我院兒科下呼吸道感染分離的金黃色葡萄球菌耐藥性分析

李 明，吳潤轉(zhuǎn)

（廣東省東莞市太平人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東東莞 523907）

金黃色葡萄球菌（SAU）是一種極其常見的病原菌，很容易引起小兒呼吸道感染。近年來隨著金黃色葡萄球菌引起的感染逐步上升，特別是在社區(qū)及醫(yī)院感染，成為了目前臨床上的一個(gè)亟待解決的問題。我們知道SAU分布非常廣泛，感染方式多樣，其耐藥性非常之高，是臨床抗感染治療的一個(gè)重點(diǎn)攻克對象，特別是其耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA），多重耐藥性非常嚴(yán)重，引發(fā)死亡率較高。為了了解SAU的耐藥狀況，從而最大限度地降低其耐藥性發(fā)生，對我院2008年1月～2009年12月兒科呼吸道感染患兒標(biāo)本3 152例中分離得到的金黃色葡萄球菌的耐藥性進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 菌株

本文菌株來自我院2008年1月～2009年12月從兒科下呼吸道感染患兒標(biāo)本3 152例中分離到的71株SAU，其中MRSA 4株，MSSA 67株。金黃色葡萄球菌ATCC 25923用作紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)的質(zhì)控菌株（購于杭州天和有限公司）。

1.2 藥敏紙片

青霉素、苯唑西林、氨芐西林/舒巴坦、慶大霉素、妥布霉素、紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、莫西沙星、復(fù)方新諾明、萬古霉素、利奈唑胺，奎奴普汀/達(dá)福普汀、β-內(nèi)酰胺酶紙片均來源英國OXOID公司。

1.3 儀器與試劑

VITEK-32鑒定儀、比濁儀、GPI鑒定卡均來自法國生物梅里埃公司。血平板培養(yǎng)基購自廣州迪景公司。

1.4 方法

菌株的分離與培養(yǎng)鑒定，將所取標(biāo)本仔細(xì)劃線接種于血平板上，在35℃下培養(yǎng)，時(shí)間約為24 h。嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》3版進(jìn)行[1]。對可疑菌落進(jìn)行分純，再通過革蘭染色、觸酶試驗(yàn)、血漿凝固酶試驗(yàn)等外部試驗(yàn)，對純化后的菌落采用GPI鑒定卡在VITEK-32鑒定儀上進(jìn)行菌株鑒定，操作步驟要嚴(yán)格遵循儀器操作說明。

1.5 藥敏試驗(yàn)方法

采用紙片擴(kuò)散法即K-B法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，操作過程中用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行平行的測驗(yàn)，按照CLSI 2008 M100-S18[2]相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)判斷。將純化后的待檢驗(yàn)菌用0.85%鹽水調(diào)至0.5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝?，均勻地涂布于M-H藥敏平板上，在35℃下進(jìn)行培養(yǎng)16～18 h，對頭孢西丁耐藥菌株判斷為MRSA。

表1 MRSA與MSSA對常見抗菌藥物耐藥率比較分析（%）

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

MRSA同MSSA在耐藥性上的比較分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在71株金黃色葡萄球菌中檢出MRSA 4株，MSSA 67株。MRSA與MSSA在對青霉素、苯唑西林、氨芐西林/舒巴坦、慶大霉素、妥布霉素、紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、莫西沙星、復(fù)方新諾明總體上的耐藥性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 1。

克林霉素對治療耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染有非常好的療效，但臨床上出現(xiàn)了體外克林霉素敏感而導(dǎo)致治療失敗的病例發(fā)生，通過試驗(yàn)證實(shí)克林霉素具有誘導(dǎo)耐藥性。在藥敏試驗(yàn)中，取紅霉素參照，質(zhì)控菌株為ATCC BAA-976和ATCC BAA-977。同樣采用紙片擴(kuò)散法。此外再進(jìn)行D試驗(yàn)，按CLSI 2008 M100-S18相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)判斷。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對于紅霉素耐藥而克林霉素敏感的葡萄球菌，克林霉素誘導(dǎo)耐藥性發(fā)生率為11.3%（8/71）。

3 討論

金黃色葡萄球菌可以引起化膿性感染，局部和全身感染，是一種常見的頑固病原菌，因其高耐藥性而引起醫(yī)學(xué)研究方面的重視。要早發(fā)現(xiàn)早治療，通過藥敏結(jié)果監(jiān)控，力爭優(yōu)化選擇抗菌藥物提高治療效果[3]。

由研究結(jié)果知，標(biāo)本主要來自于兒科呼吸道感染患兒，共分離得到金黃葡萄球菌71株，其中MRSA 4株，MSSA 67株。未發(fā)現(xiàn)對萬古霉素、利奈唑胺、奎奴普汀/達(dá)福普汀耐藥的菌株。本地區(qū)兒童下呼吸道感染分離的金黃色葡萄球菌以MSSA為主，對大部分抗菌藥物保持較好的敏感性，MRSA分離率雖低，但MRSA較MSSA的耐藥性高，而且多重耐藥嚴(yán)重，但萬古霉素例外，所以對耐萬古霉素金黃色葡萄球菌(VISA及VRSA)的連續(xù)監(jiān)測、了解葡萄球菌屬的耐藥機(jī)制具有重要的臨床意義，以最大限度降低其耐藥性發(fā)生[4]。

本研究同時(shí)對克林霉素的誘導(dǎo)耐藥性進(jìn)行了簡述，克林霉素的誘導(dǎo)耐藥性多發(fā)生在MSSA中，因此在MSSA的藥敏試驗(yàn)中，對紅霉素耐藥，而克林霉素中介或敏感的菌株，必須通過D試驗(yàn)，從而排除克林霉素誘導(dǎo)型耐藥引起的臨床治療失敗[5]。而在MRSA中，由于不能完全排除克林霉素誘導(dǎo)耐藥的存在，對紅霉素耐藥而克林霉素中介或敏感菌株，可以根據(jù)臨床需要，做克林霉素D試驗(yàn)。

總之，針對MRSA的檢測必須高度重視，這對控制MRSA的傳播，提高臨床上抗菌藥物的運(yùn)用都有著非常重要的意義。了解臨床分離的金黃色葡萄球菌對常用抗生素的耐藥趨勢，以指導(dǎo)臨床合理使用抗生素[6-7]。

[1]葉應(yīng)嫵,王毓三.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].2版.南京:東南大學(xué)出版社,1997:897-902.

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[4]紀(jì)文軍,陳亞生,楊慧.獲得性感染金黃色葡萄球菌耐藥的現(xiàn)狀及治療對策[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2009,16(7):61-62.

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