舒肝益脾顆粒中五味子醇甲的含量測定

李春生

舒肝益脾顆粒系山茵陳、五味子、茯苓、山楂、黃芪等 6味中藥組成的復方中藥制劑具有清熱化濕,舒肝利膽的功效,原標準中沒有制定含量測定的方法,為了更有效的控制該制劑的質量,筆者采用高效液相色譜法(HPLC法)測定,效果滿意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilentll00series高效液相色譜儀。

1.2 試藥 五味子醇甲對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110857-200203),甲醇為優級純,其余試劑均為分析純;水為二次重蒸餾水;舒肝益脾顆粒,五味子藥材均為本院制劑室提供。

2 試驗方法

2.1 色譜條件 色譜柱 DiamonsiCl8(4.6 mm～250 mm,5μm);流動相為甲醇-水(64:36);流速為 1.0ml/min;柱溫30℃,檢測波長為 250 nm。理論板數按五味子醇甲峰計算為5732。在此條件下所得色譜圖見圖 1,結果表明,五味子醇甲色譜峰與陰性樣品溶液色譜峰沒有重疊,分離良好。

圖1

圖 1 高效液相色譜圖

2.2 溶液的制備 ①對照品溶液:精密稱取五味子醇甲對照品適量,加甲醇制成每 lml含 20ug的溶液,即得;② 供試品溶液:取本品細粉 5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇 100ml,密塞,稱定重量,超聲處理 30 min,放冷,再稱重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取濾液 50m l,蒸干,殘渣加水 20ml使溶解,置分液漏斗中,加正己烷提取 5次(20、20、20、10、10min),合并正已烷提取液,低溫蒸干 ,殘渣加甲醇定容于 5ml量瓶中,搖勻,即得;③陰性對照品溶液:以缺五味子藥材的空白樣品,按同樣條件提取制備陰性對照品溶液。

2.3 線性關系 分別精密吸取五味子醇甲對照品溶液(0.03864ms/m l)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 μl,按上述色譜條件測定峰面積積分值,以五味子醇甲的進樣量(μg)為橫坐標,以峰面積積分值為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程為Y=2049.03X-3.703R=0.9999(n=5),結果表明,五味醇甲進樣量在 0.04-0.35μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 精密吸取 0.01932mg/ml的對照品溶液,連續進樣 5次,每次 10μl,測定五味子醇甲峰面積值為392.1697,RSD=0.38%。

2.5 重現性試驗 取同一批樣品(批號:5)依本法獨立測定5次,結果:五味子醇甲含量平均值為 31.5μg/g,RSD=0.94%。

2.6 穩定性試驗 取同-供試品溶液,分別于:0,4,8,18,24 h重復測定,RSD為 1.89%,結果供試品溶液中五味子醇甲的含量在 24 h內基本穩定。

2.7 回收率試驗 精密取同法測定的已知含量的舒肝益脾顆粒(批號 1,含量 32μg)適量,加入五味子醇甲對照品溶液(0.0966mg/m1)0.75ml,依法測定,計算回收率。見表 1。平均回收率為 99.08%,RSD=0.50%(n=5),表明本法回收率高。

表1 加樣回收率情況

表2 舒肝益脾顆粒 5批樣品含量測定情況

2.8 樣品的含量測定 依法測定本院提供樣品 5批,結果見表 2五批樣品的平均含量 32.22μg/g,考慮到生產及工藝中的損失,暫定本品每 1 g含五味子的五味子醇甲(C24H32O7)不得少于 25μg。

3 討論

3.1 在實驗過程中,曾經用過不同的色譜柱,①Diamonsi C18(250mm×4.6mm)(迪馬公司);②Shim-packODS(150mm×6.0mm)(日本島津);③ZORBASExtend-C18(250 mm×4.6 mm)(美國安捷倫)。經比較后,①的效果最好。

3.2 用流動相為甲醇-水(64:36);流速為 1.0ml/min;柱溫30℃,檢測波長為 250nm。分離效果最好且沒有干擾峰。

3.3 本方法簡便、準確、精密度高、重現性好,能夠有效的控制舒肝益脾顆粒的質量。

[1］藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).化學工業出版社,2000:48-49.

[2］王寶琴.中成藥質量標準與標準物質研究.中國醫藥科學技術出版社,2004:28-31.