華蟾素分散片的溶出度測定

2010-06-02 08:30:24吳宏富

中國藥業 2010年24期

李霞，劉放，吳宏富

(1.浙江省慶元縣中醫院，浙江慶元 323800; 2.浙江省醫學科學院藥物研究所，浙江杭州 310013)

華蟾素(cinobufocalin)系蟾蜍科動物中華大蟾蜍 Bufobufo gargarizans Cantar或黑眶蟾蜍 Bufo melanostictus Schneider等的全皮經科學方法提取加工制成的水溶性物質，是我國自行研制的二類新藥，其主要成分為吲哚生物堿、還原糖、氨基酸、蟾蜍毒素及蟾蜍色胺等。近年來已證實其具有清熱解毒、活血化瘀、抗腫瘤、抗病毒、強心、麻醉、止痛、促進骨髓增生、增強機體免疫功能等多種藥理作用，其制劑在臨床上廣泛用于原發性肝癌、中晚期肺癌、乙型病毒性肝炎、慢性喉炎、牛皮癬、頑固性逆呃等疾病的治療，效果顯著，現已成功開發出注射液、口服液及片劑，并被列為國家級中藥保護品種[1-2]。華蟾素片現行藥品標準質量控制方法為用紫外分光光度(UV)法測定5-羥色胺的含量，以含吲哚類總生物堿計不得少于0.50%(g/L)[3]。文獻報道華蟾素及其制劑的含量測定方法，目前主要有UV法[4-6]和高效液相色譜(HPLC)法[7-9]。筆者對自制的華蟾素分散片溶出度進行了研究，并采用UV法測定華蟾素分散片的溶出度，報道如下。

1 儀器與試藥

RCZ-8A型智能溶出儀(天津大學精密儀器廠);TU-1800型紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);Sartorus 2024MP型電子天平(德國);SB2200型出超聲波儀(上海超聲波儀器廠)。5-羥色胺鹽酸鹽對照品(供含量測定用，批號為111456-200401，中國藥品生物制品檢定所);華蟾素分散片(規格為 0.3 g，批號分別為 20081210，200851212，20081214，浙江省醫學科學院藥物研究所);對-二甲氨基苯甲醛(AR，上海三愛思試劑有限公司)，鹽酸(AR，浙江巨州化學試劑有限公司)，水為去離子水(自制)。

2 方法與結果

2.1 顯色劑配制

取對-二甲氨基苯甲醛15 g，置100 mL棕色量瓶中，加鹽酸溶液(2→3)溶解并稀釋至刻度，搖勻即得15%對-二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液(顯色劑)。

2.2 5－羥色胺紫外吸收光譜

取5-羥色胺對照品4 mg，精密稱定，共2份，分置2只100 mL棕色量瓶中，分別加水和0.1 mol/L鹽酸溶液，溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別以相應的試劑空白為參比，1 cm比色杯，在300～700 nm波長處進行全掃描，紫外吸收光譜圖見圖1。

圖1 5-羥色胺在不同溶劑中的紫外吸收光譜

2.3 溶出方法及條件選擇

溶出方法:由于本品規格較小(0.3 g/片)，主藥含量較低，故采用2005年版《中國藥典(二部)》附錄ⅩC溶出度試驗第三法(槳法)，溶出介質體積為100 mL。

溶出介質:取本品4片，分別以水和0.1 mol/L鹽酸溶液100 mL為溶劑，轉速為 50 r/min，依法操作，經 2，5，10，20，30，45 min 時取溶液10 mL，并立即補加10 mL溶劑于溶出杯中，溶出液用0.8 μm微孔濾膜濾過，取續濾液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加顯色劑至10 mL，搖勻，放置30 min，作為供試品溶液;另取5-羥色胺對照品4 mg(平行2份)，分置100 mL棕色量瓶中，分別用水和0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL，置10 mL棕色量瓶中，分別加水和0.1 mol/L鹽酸溶液至5 mL，加顯色劑至刻度，搖勻，放置30 min，作為對照品溶液。取上述兩種溶液，分別以水和0.1 mol/L鹽酸溶液為參比，1 cm比色杯，在555 nm波長處分別測定吸光度，計算出每片的溶出量，結果顯示華蟾素分散片在0.1 mol/L鹽酸溶液中的溶出度較水中大。45 min時在水中的溶出度為60.23%，在0.1 mol/L鹽酸溶液中的溶出度為81.54%。按藥典一般規定45 min時溶出度應大于70%[15]，故選擇0.1 mol/L鹽酸溶液為溶出介質。

轉速選擇:取本品4片，以0.1 mol/L鹽酸溶液100 mL為溶劑，轉速分別為50 r/min和100 r/min，依法操作。結果樣品溶出度隨轉速的增加而增加，轉速為50 r/min和100 r/min時45 min的溶出度分別為81.54%和86.92%，均大于80%，故按常規選擇轉速為100 r/min。

2.4 溶出度測定方法學考察

線性關系考察:取5-羥色胺對照品約4 mg，精密稱定，置100 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取 0.1，0.25，0.5，1.0，2.0，2.5，3.0 mL，分別置 7 只 10 mL 棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液至5 mL，加顯色劑至刻度，在555 nm波長處分別測定吸光度，以吸光度(X)對質量濃度(Y)進行線性回歸，回歸方程為 Y=0.045 9 X-0.001 5，r=0.999 7(n=7)。結果表明，5-羥色胺質量濃度在0.409～12.276 μg/mL范圍內與吸光度線性關系良好。

回收率試驗:分別稱取5-羥色胺對照品約0.50，1.30，1.84 mg(約相當于溶出量的30%，60%，100%)和處方量的混合輔料適量(每個質量濃度平行操作3份)，精密稱定，分置9只100 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液80 mL，超聲處理15 min，放冷，加0.1 mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，濾過，取續濾液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液至5 mL，加顯色劑至刻度，放置30 min，作為供試品溶液;另取5-羥色胺對照品4 mg，置100 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL，置10 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液至5 mL，加顯色劑至10 mL，搖勻，放置30 min，作為對照品溶液。取上述兩種溶液，在555 nm波長處分別測定吸光度，并計算回收率。結果見表1。

表1 回收率試驗結果(n=9)

穩定性試驗:取本品(批號為20081210)4片，以0.1 mol/L鹽酸100 mL為溶劑，轉速為100 r/min，依法操作，經30 min時取溶液10 mL，濾過，取續濾液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加顯色劑至刻度，搖勻，放置 10，20，30，40，50，60 min 時，分別測定吸光度。結果不同放置時間的溶出液吸光度依次為0.175，0.184，0.194，0.194，0.190，0.185，表明溶出液加顯色劑后，放置30～40 min內穩定。

2.5 均一性試驗

取本品(批號為20081210)4片，以0.1 mol/L鹽酸溶液100 mL為溶劑，轉速為 100 r/min，依法操作，經 2，5，10，20，30，45 min 時取溶液10 mL，并立即補加10 mL溶劑于溶出杯中，溶出液用0.8 μm微孔濾膜濾過，取續濾液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加顯色劑至刻度，搖勻，放置30 min，作為供試品溶液;按2.4項下回收率試驗操作，依法測定。結果見表2和圖2。