HPLC法測定不同種天南星中葫蘆巴堿的含量

劉衡 姚春芬 陳英 肖懷

天南星科(Araceae)中多種植物的干燥塊莖常用于中藥，性苦、辛、溫、具有燥濕化痰、祛風定驚、消腫散瘀之功效［1］，臨床上用于痰多咳嗽、惡心嘔吐等的治療。天南星中主要含生物堿類物質，目前國內外學者已從中分離到多種生物堿［2］，包括葫蘆巴堿，秋水仙堿等。近代藥理研究表明葫蘆巴堿對正常動物和化學誘導糖尿病動物具有降血糖活性［3］。作者采用高效液相色譜法對分布于云南的三種民間作為藥用及中藥配伍的天南星植物，山珠半夏、一把傘南星、虎掌南星中的葫蘆巴堿含量進行了測定，并比較了不同地域間的差異。

1 材料與儀器

1.1 儀器 Agilent-1100型高效液相色譜儀;島津TU-1901型分光光度計;SY3200-T超聲波提取器等。

1.2 試劑及樣品 葫蘆巴堿對照品購于中國藥品生物制品檢定所(110883-200502);乙腈(色譜純);甲醇(AR);娃哈哈純凈水;不同種天南星塊莖5份，經大理學院藥學院生藥教研室馬曉匡教授和周濃老師鑒定為一把傘天南星(Arisaema.erunescens(Wall.)Schott)、山珠半夏(Arisaema.yunnanense Buchet)、虎掌南星(Pinellia.pedatisecta Schott)，樣品儲存于藥學院植物標本室。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液制備 精密稱取于80℃干燥至恒重的葫蘆巴堿對照品9.4 mg，用甲醇定容于50 ml量瓶中，備用。

2.2 樣品溶液制備 樣品粉碎，過篩后干燥至恒重，密封儲存。精密稱取樣品約2.0 g，置具塞錐形瓶中，加甲醇25 ml，密塞浸泡10 h后，超聲提取3次，每次30 min，過濾，合并濾液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，定容至10 ml，0.45 m濾膜過濾，取續濾液備用。

2.3 色譜條件 色譜柱:Luna 5 NH2100A(250 mm×4.6 mm)，流動相:乙腈 －水(72:28)，流速:0.8 ml/min，柱溫:30℃，進樣量:20 μl，檢測波長:265 nm。

2.4 線性范圍考察 分別精密吸取“2.1”的對照品溶液2.00ml稀釋至10ml量瓶中定容，濃度為3.76 g/ml。連續進樣6 次，進樣量分別為 2.0，4.0，8.0，10.0，16.0，20.0，依上述色譜條件測定，葫蘆巴堿的保留時間為7.2 min。以色譜峰面積Y，對照品濃度X(g)繪制標準曲線，得回歸方程為:Y=1544.5X+0.0789，r=0.9992(n=6)。結果表明葫蘆巴堿在0.00752～0.0752 g范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 取同一樣品液，按“2.3”項操作，重復進樣6次，記錄峰面積，RSD為0.56%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗 取同一樣品液，按“2.3”項操作，分別在0，0.5，1，2，4，6，8，12 h，測定峰面積，RSD=1.40%，表明樣品在12 h內基本穩定。

2.7 重現性試驗 精密稱取同一樣品6份，每份約2.0 g，按“2.2”和“2.3”項測定含量，平均含量為17.39 g/g，RSD=1.20%(n=6)，重現性良好。

2.8 加樣回收試驗 精密稱取已知含量(17.39 g/g)的同一樣品約1.0 g共6份，分別加入2.82 g/ml(取濃度為0.188 mg/ml儲備液1.5 ml，定容于100 ml量瓶)的對照品溶液3.0，5.0，11.0 ml，按“2.2”和“2.3”項測定含量，根據計算量，測定量及加入量計算得平均回收率為101.0%，RSD=2.03%。

2.9 樣品的測定 每個樣品平行稱取3份，按“2.2”項和“2.3”項測定，每份樣品平行進樣3次，取平均值，以外標法計算葫蘆巴堿的含量，結果見表2。

表1

3 結果與討論

3.1 波長選擇 配制一定濃度的葫蘆巴堿對照品溶液，用TU－1901型分光光度計掃描，測得最大吸收波長為203 nm和265 nm，選擇265 nm為檢測波長。

3.2 色譜柱及色譜條件選擇 采用C18柱，反復摸索了不同比例的甲醇-水-三乙胺［4］，不同比例的0.05%十二烷基磺酸鈉-甲醇-冰醋酸［5］等流動相，及不同柱溫條件，都不能獲得較好的分離效果。后改用氨基柱［6，7］，分別考察了不同比例的乙腈-水等梯度及乙腈-水梯度洗脫，發現梯度洗脫中隨著梯度變化，基線波動很大，而等梯度的乙腈-水(72:28)作為流動相時樣品有較好的峰形和分離度(見圖1)。

3.3 結果比較 測定結果提示5份樣品均含葫蘆巴堿，但不同種植物間有明顯差異。不同產地的同種植物含量也不相同。

［1］韋英杰，楊中林.天南星研究進展.時珍國醫國藥，2001，12(3):264-267

［2］于強，于洋.天南星化學成分和藥理作用研究概況.中醫藥信息，2007，24(5):26-28

［3］史江華，李多偉，逄敏杰，等.葫蘆巴研究新進展.西北藥學雜志，2007，22(3):153-155.

［4］王艷華，張連成.HPLC法測定天南星中葫蘆巴堿的含量.黑龍江醫藥，2004，17(5):329-330.

［5］中國藥典2005年版.一部.2005:167.

［6］趙懷清，曲燕，王學婭，等.高效液相色譜法測定葫蘆巴中葫蘆巴堿的含量.中國中藥雜志，2002，27(3):194-196.

［7］宋粉云，張德志，鐘運香，等.HPLC法測定紫茉莉根中葫蘆巴堿的含量.中國新藥與臨床藥理，200516(3):189-191.