高效液相色譜法測定鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液的含量及有關物質

夏賽忠

（浙江省嵊泗縣人民醫院，浙江 舟山 202450）

鹽酸川芎嗪化學名為2，3，5，6-四甲基吡嗪鹽酸鹽，具有抗血小板聚集作用，且對已聚集的血小板有解聚作用，還可擴張小動脈、改善微循環和增加腦血流量，從而產生抗血栓和溶血栓的作用，臨床主要用于治療閉塞性血管疾病、腦血栓形成、冠心病、心絞痛等[1-2]。本試驗建立了鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液的含量測定及有關物質檢查的高效液相色譜（HPLC）法，報道如下。

1 儀器與試藥

LC-2010C型高效液相色譜儀（日本島津），N2000色譜工作站；日本A&D電子分析天平（0.1 mg）。鹽酸川芎嗪對照品（成都曼思特生物科技有限公司，純度為99.0%）；鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液（四川三精升和制藥有限公司，批號為050201，050511，051025，規格為100 mL：鹽酸川芎嗪40 mg與氯化鈉0.9 g）；水為重蒸餾水，乙腈為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Hypersil C18柱（250 mm ×4.6 mm，10 μm）；流動相：乙腈 -水（40 ∶60）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：295 nm；柱溫：30 ℃。理論塔板數按鹽酸川芎嗪峰計算應不低于4 000。

2.2 含量測定

2.2.1 測定法

精密量取鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液5 mL（相當于鹽酸川芎嗪2 mg），加流動相制成每1 mL中含鹽酸川芎嗪20 μg的溶液，作為供試品溶液。另取鹽酸川芎嗪對照品適量，加流動相制成每1 mL中含20 μg的溶液，作為對照品溶液。取供試品和對照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算鹽酸川芎嗪的含量。

2.2.2 方法學考察

專屬性考察：取供試品溶液、對照品溶液及空白流動相適量，依法進樣，色譜圖見圖1。可見，流動相在鹽酸川芎嗪峰處無干擾，鹽酸川芎嗪峰與相鄰雜質峰的分離度大于1.5。

圖1 鹽酸川芎嗪高效液相色譜圖

線性關系考察：取鹽酸川芎嗪對照品適量，精密稱定，用流動相制成質量濃度分別為 2.5，5.0，10.0，20.0，40.0 μg/mL 的溶液，各精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積 Y對鹽酸川芎嗪質量濃度 X進行線性回歸，得回歸方程 Y=72 580 X-717.9，r=0.999 9（n=5）。結果表明，鹽酸川芎嗪質量濃度在2.5～40.0 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取鹽酸川芎嗪對照品適量，精密稱定，用流動相制成含鹽酸川芎嗪15.0，20.0，25.0 μg/mL的溶液，各精密吸取20 μL重復進樣5次。結果3種質量濃度峰面積的 RSD分別為0.8% ，1.1%，1.2% （n=5）。

重現性試驗：取同一批樣品（批號為050201），按2.2項下方法平行制備供試品溶液并依法測定。結果平均標示含量為99.5%，RSD=0.56% （n=6）。

回收率試驗：在已知含量（10 μg/mL）供試品溶液中，分別加入一定量的鹽酸川芎嗪對照品，配成高、中、低3種質量濃度溶液（15，20.0，25 μg/mL），按 3.1 項下試驗，測得回收率分別為 99.6%，100.2%，100.3%，RSD 分別為 0.69%，0.54%，0.82%（n=3）。

穩定性試驗：取2.2.1項下同一供試品溶液（批號為050201），置室溫下于不同時間（1，2，3，4，6，8 h）分別進樣 20 μL。結果峰面積的 RSD為1.02%（n=6），表明供試品溶液在8 h內基本穩定。

2.2.3 樣品含量測定

取3批樣品，照2.2.1項下方法測定。結果見表1。

2.3 有關物質檢查

2.3.1 測定法

將鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液（0.4 mg/mL）作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，加流動相稀釋成每1 mL中含鹽酸川芎嗪4.0 μg的溶液，作為對照品溶液。取對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20%～25%；再取供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。供試品溶液色譜圖中若顯示雜質峰，則各雜質峰面積總和不得大于對照品溶液主峰的面積（1.0%）。

2.3.2 方法學考察

專屬性考察：分別將樣品在60℃溫度、強光[照度為（4 500±500）lx]、相對濕度為95%的環境下放置10 d，各取上述破壞試驗溶液20 μL注入色譜儀，記錄色譜圖至鹽酸川芎嗪峰保留時間的3倍。結果樣品的破壞產物和主峰可實現基線分離，分離度均大于1.5，不干擾有關物質的測定，說明本色譜條件適用性良好，可用于鹽酸川芎嗪注射液有關物質的檢查。

檢測限確定：取鹽酸川芎嗪對照品適量，精密稱定，用流動相制成每1 mL中含0.01 mg的溶液，精密吸取5 μL，注入液相色譜儀，此時信噪比約等于3，故檢測限為50 ng。

進樣精密度試驗：取質量濃度為4.0 μg/mL的對照品溶液，依法測定。結果對照品溶液主峰面積的 RSD為0.81%（n=5），表明方法的進樣精密度良好。

重現性試驗：精密吸取樣品20 μL，依法測定。結果雜質含量的RSD為2.06%（n=6），表明方法重現性良好。

2.3.3 樣品有關物質測定

依法對3批樣品進行有關物質檢查。結果見表1。

表1 3批樣品測定結果（n=3）

3 討論

目前測定川芎嗪含量的方法有HPLC法[3-4]、紫外分光光度法[5]、毛細管電泳法[6]等。2005年版《中國藥典（二部）》[7]也收錄了磷酸川芎嗪片、磷酸川芎嗪膠囊、磷酸川芎嗪注射液，分別采用電位滴定法和紫外分光光度法進行含量測定，但沒有對有關物質進行控制。本試驗所建立的HPLC法方法簡便、快速、準確，對鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液質量的全面控制提供了一個有價值的參考。

[1]張國清，趙江花.川芎嗪在心血管疾病中的藥理作用研究進展[J].中國當代醫藥，2009，16（4）：142.

[2]何 晶.川芎嗪的藥理作用及臨床應用[J].首都醫藥，2005，12（23）：31-32.

[3]李小燕.RP-HPLC法測定鹽酸川芎嗪注射液的含量[J].廣西醫學，2003，25（6）：925-927.

[4]王貴發.高效液相色譜法測定磷酸川芎嗪葡萄糖注射液中川芎嗪的含量[J]. 醫藥導報，2004，23（8）：583-584.

[5]吳 艷，劉建輝，吳 振.注射用磷酸川芎嗪凍干粉含量測定的研究[J]. 黑龍江醫藥，2006，19（2）：81-82.

[6]韓風梅，楊 新，李 捃，等.鹽酸川芎嗪注射液中鹽酸川芎嗪的毛細管電泳測定[J]. 湖北大學學報（自然科學版），1999，21（1）：67.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學工業出版社，2005：89.