不同培養(yǎng)基對(duì)硫酸慶大霉素注射液含量的影響

何作民，申 放，黃旺潮

（廣東省佛山市藥品檢驗(yàn)所，廣東 佛山 528000）

硫酸慶大霉素為氨基苷類(lèi)抗生素，2005年版《中國(guó)藥典（二部）》規(guī)定[1]其含量測(cè)定方法為抗生素微生物檢定法，包括管碟法和濁度法。管碟法是目前最常用的方法。由于管碟法測(cè)定抗生素效價(jià)的影響因素較多，除檢驗(yàn)操作技術(shù)、抑菌圈的測(cè)量、供試品與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制等人為因素外，培養(yǎng)基的質(zhì)量也是重要的影響因素之一。鑒于目前生產(chǎn)干粉培養(yǎng)基的廠(chǎng)家較多，為探討培養(yǎng)基對(duì)檢定結(jié)果的影響情況，筆者對(duì)使用的干粉培養(yǎng)基進(jìn)行了比對(duì)檢測(cè)分析，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

ZY-300IV型多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀（北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開(kāi)發(fā)公司）；Metlier AE240型電子天平；HHBⅡ420型電熱恒溫培養(yǎng)箱。硫酸慶大霉素注射液（規(guī)格為2 mL∶4萬(wàn)單位，批號(hào)為0601022，市售品）；慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為130326-200314）；培養(yǎng)基為干粉抗生素檢定培養(yǎng)基I號(hào)（A廠(chǎng)產(chǎn)品批號(hào)分別為 050304，060328，060613，060614；B 廠(chǎng)產(chǎn)品批號(hào)為20060213）；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉均為分析純；短小芽孢桿菌[CMCC（B）63202]（中國(guó)藥品生物制品檢定所）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

精密量取硫酸慶大霉素注射液，精密稱(chēng)取慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，分別加滅菌水定量制成每1 mL中約含1 000單位的溶液，臨用前用滅菌磷酸鹽緩沖液（pH=7.8）稀釋至每1 mL含5單位和10單位的溶液，作為供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2 培養(yǎng)基配制

稱(chēng)取干粉抗生素檢定培養(yǎng)基I號(hào)適量，按說(shuō)明書(shū)配制，調(diào)節(jié)最終pH為7.9～8.0。

2.3 檢驗(yàn)方法

按照《中國(guó)藥典（二部）》抗生素微生物檢定法（附錄ⅪA）管碟法的二劑量法，以短小芽孢桿菌為試驗(yàn)菌，以干粉抗生素檢定培養(yǎng)基I號(hào)為檢定培養(yǎng)基，用ZY-300 IV型多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀測(cè)量抑菌圈，硫酸慶大霉素注射液按慶大霉素計(jì)算標(biāo)示量的百分含量，將符合藥典要求的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2.4 檢驗(yàn)結(jié)果

采用不同廠(chǎng)家及同一廠(chǎng)家不同批號(hào)的培養(yǎng)基檢測(cè)硫酸慶大霉素注射液的含量，比較不同批號(hào)間的結(jié)果差異，結(jié)果見(jiàn)表1。兩人采用同一批號(hào)培養(yǎng)基，在相同條件下檢測(cè)硫酸慶大霉素注射液的含量，比較不同人員測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 采用不同廠(chǎng)家及同一廠(chǎng)家不同批號(hào)培養(yǎng)基的測(cè)定結(jié)果

表2 不同操作人員檢測(cè)結(jié)果

3 討論

從測(cè)定結(jié)果可見(jiàn)，不同廠(chǎng)家與同一廠(chǎng)家生產(chǎn)不同批號(hào)的培養(yǎng)基檢測(cè)結(jié)果均有差異，其中A廠(chǎng)家060613批與B廠(chǎng)20060213批產(chǎn)品的平均含量相差超過(guò)5%；同廠(chǎng)家生產(chǎn)的不同批號(hào)培養(yǎng)基測(cè)定的結(jié)果也有明顯差異，其中050304批與060613批產(chǎn)品的平均含量相差4%。不同人采用同一批號(hào)培養(yǎng)基在相同條件下檢測(cè)同一批的供試品，結(jié)果差異不明顯，重現(xiàn)性較好。

目前，培養(yǎng)基生產(chǎn)廠(chǎng)家較多，各廠(chǎng)家所選用的原料、生產(chǎn)工藝和條件、控制培養(yǎng)基的pH等不同，即使同一廠(chǎng)家不同批次的產(chǎn)品也會(huì)有差別，這將會(huì)導(dǎo)致不同廠(chǎng)家或同一廠(chǎng)家生產(chǎn)不同批號(hào)的培養(yǎng)基質(zhì)量會(huì)有一定的差異。由于培養(yǎng)基質(zhì)量的差異會(huì)直接影響抗生素效價(jià)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，尤其對(duì)仲裁或判斷邊緣產(chǎn)品是否符合規(guī)定時(shí)加大了難度。因此，筆者認(rèn)為，培養(yǎng)基除用于藥品檢驗(yàn)外，還廣泛用于醫(yī)院臨床檢驗(yàn)、預(yù)防醫(yī)學(xué)、動(dòng)植物檢驗(yàn)、微生物學(xué)等各領(lǐng)域，為了減少由培養(yǎng)基引起的實(shí)驗(yàn)誤差，建議對(duì)各種培養(yǎng)基特別是用于含量測(cè)定的培養(yǎng)基制訂國(guó)家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：731，附錄Ⅺ.