反相高效液相色譜法測(cè)定止嗽掃痰丸中鹽酸麻黃堿含量

張 虹，謝俊峰，樊鈺庫(kù)

（1.寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院，寧夏 銀川 750001； 2.寧夏回族自治區(qū)隆德縣人民醫(yī)院，寧夏 隆德 756003；3.寧夏回族自治區(qū)固原市人民醫(yī)院，寧夏 固原 756000）

止嗽掃痰丸收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第四冊(cè)）》，具有宣肺定喘、止咳祛痰的功效，用于治療咳嗽氣喘、痰多胸悶。筆者對(duì)方中具有發(fā)汗散寒、宣肺平喘功效的麻黃[1]進(jìn)行了含量測(cè)定方法研究，為進(jìn)一步完善該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters-Alliance 2695-2487型高效液相色譜儀；Waters-Brzze 1525-717-2996型高效液相色譜儀；UV-2550型可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)。水為超純水，乙腈、甲醇為色譜純，乙醚、鹽酸、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉均為分析純。鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)為171241-200303，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；止嗽掃痰丸（市售品）；缺麻黃陰性空白樣品（按處方及制法自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，用磷酸調(diào)pH 為 2.7）- 乙腈（100 ∶5）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：207 nm；進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，色譜圖見(jiàn)圖1。可見(jiàn)，理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿計(jì)算不低于5 000，鹽酸麻黃堿與相鄰色譜峰的分離度大于1.5，拖尾因子符合要求。

2.2 溶液制備

取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相制成每1 mL含50 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取樣品適量，研細(xì)，取粉末2.0 g，精密稱(chēng)定，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理（250 W，40 kHz）30 min，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸至近干，加水20 mL溶解轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加濃氨試液1 mL，用乙酸乙酯萃取5次，每次15 mL，合并萃取液，蒸至近干，加鹽酸乙醇溶液（1→20）1 mL，低溫蒸干，用流動(dòng)相溶解并定容至10 mL，用0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液。取陰性空白樣品 2.0 g，精密稱(chēng)定，按供試品溶液制備方法同法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液，按擬訂的色譜條件測(cè)定。結(jié)果供試品溶液在與對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間有一致的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液則無(wú)此峰（圖 1）。

線性關(guān)系考察：取質(zhì)量濃度為67 μg/mL的對(duì)照品溶液，按擬訂的色譜條件，分別進(jìn)樣 1，2，5，10，15，20，30，50，100 μL，記錄色譜圖，計(jì)算峰面積，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=1 932 347.79 X-40 425.66，r=1.000 0（n=9）。結(jié)果表明鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量在0.067～6.700 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液，于24 h內(nèi)分別進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果平均峰面積為1 538 117，RSD為0.18%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果平均峰面積為1 584 685，RSD為0.10%（n=6），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)的樣品，按擬訂的方法重復(fù)測(cè)定6 次。結(jié)果平均含量為 0.639 mg/g，RSD=1.47%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（鹽酸麻黃堿含量為0.639 mg/g）適量，研細(xì)，取約1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入質(zhì)量濃度為0.364 8 mg/mL的對(duì)照品溶液2 mL，揮干，按供試品溶液制備方法制成待測(cè)溶液，依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

依法測(cè)定5批樣品，結(jié)果每g樣品中鹽酸麻黃堿的含量分別為 0.639，0.602，0.563，0.547，0.616 mg（n=2）。依據(jù)測(cè)定結(jié)果，每g樣品中鹽酸麻黃堿的含量可以暫訂為不少于0.50 mg。

3 討論

取鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液，以流動(dòng)相為空白溶液，在紫外分光光度計(jì)上于190～300 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果鹽酸麻黃堿在207.1 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇207 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

選擇提取溶劑時(shí)，先用甲醇提取，可以除去部分脂溶性雜質(zhì)，甲醇提取液蒸干后加水溶解，再用乙酸乙酯萃取，又可除去部分水溶性雜質(zhì)。分別以乙醚、氯仿、乙酸乙酯為提取溶劑依法制備供試品溶液并測(cè)定含量，結(jié)果氯仿、乙酸乙酯提取的含量明顯高于乙醚提取，考慮氯仿的毒性較大，選擇以乙酸乙酯作為提取溶劑。以乙酸乙酯作為提取溶劑，分別提取3～7次并測(cè)定含量，結(jié)果樣品提取5～7次的含量無(wú)明顯差別。

曾對(duì)不同比例的流動(dòng)相進(jìn)行了考察，并參考文獻(xiàn)[2-5]優(yōu)化條件，以文中流動(dòng)相時(shí)pH恒定，出峰穩(wěn)定性及峰形均好。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：223.

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