女貞子多糖的超聲波提取工藝研究

郭留城

（漯河醫學高等專科學校，河南漯河 462002）

女貞子是我國傳統的扶正固本藥物，早在《神農本草經》中就有記載。女貞子多糖是女貞子具有多重功效的物質基礎之一，現代藥理研究表明多糖具有抗氧化、抗衰老、增強免疫等功效。利用溶劑法進行女貞子多糖的提取分離已有文獻報道[1]，但存在提取時間長，效率低、溶劑用量大等缺點，而超聲波提取具有設備簡單、提取方便、效率高、節能環保等優點，已經廣泛應用于中草藥有效成分的提取[2]。本文利用超聲波對女貞子進行有效成分提取，用分光光度法測定多糖的含量，并對提取條件進行了正交試驗的研究。

1 儀器與試藥

KQ5OODE型醫用超聲波 (昆山市超聲儀器有限公司)；752型紫外可見分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）；RE3000型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）；DZF-6020型真空干燥箱 （上海基瑋試驗儀器有限公司）；LDZ4-0.8型醫用離心機(北京醫用離心機廠)；女貞子(藥用，購于漯河市廣惠和醫藥有限公司)，其他試劑均為國產分析純。

2 方法與結果

2.1 多糖含量測定

采用硫酸-蒽酮法[3]測定所提取的女貞子多糖中多糖含量，經驗證葡聚糖的線性范圍為0.5～90.0 mg/L。然后根據所用女貞子的質量（2 g）計算出女貞子中多糖得率。

2.2 回收率試驗

精密量取上述已知含量的女貞子提取液，準確加入葡聚糖對照品1.00 mg，后按樣品含量測定方法進行測定，得到葡聚糖的回收率為97.9%。

2.3 提取工藝流程及方法

女貞子 (40目)→稱量→加雙蒸水調配→超聲提取多糖→離心除去雜質→濃縮→乙醇沉淀→干燥→粗多糖。

2.4 超聲波樣品提取液的制備

2.4.1 工藝設計 利用四因素三水平正交設計L9(34)正交實驗，選取超聲功率(A)、溶媒用量 (B)、提取時間(C)和提取次數(D)四因素，以多糖含量為測定指標。設計試驗因素和水平見表1。

表1 正交試驗設計

2.4.2 制備工藝 取女貞子2.0 g，精密稱定9份，分別按正交實驗法進行實驗，用雙蒸水浸泡30 min后，超聲提取，合并提取液，離心除雜，濃縮，醇沉，濾過，真空干燥，得到1～9號超聲樣品。

2.5 樣品含量測定

將超聲波提取液按“2.1”項下含量測定法進行測定。結果見表2。

2.6 驗證實驗

取女貞子2.0 g，精密稱定6份，分別用溶劑提取法和優化后的超聲提取法，提取女貞子中的多糖。結果見表3。

3 討論

由表2可知，超聲波的功率和溶媒的用量是影響超聲提取的主要因素，而超聲提取時間和超聲提取次數的影響較小。方案最佳：A2B2C2D1，即在功率80%條件下，用5倍的溶媒，超聲25 min，提取1次為最佳工藝條件。

表2 正交試驗結果

表3 不同提取方法提取結果

由表3可知，采用優化后的超聲提取法提取女貞子中的多糖與傳統的溶劑提取法比較，提取效率提高了約1.4倍，耗時短，且實驗方法簡單易行，操作穩定性好。

女貞子主要含有多糖、萜類、黃酮等化合物。女貞子多糖的成分為鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖及巖藻糖等[4]。由于雙蒸水能廣泛地溶解多糖，故本試驗以雙蒸水為溶媒，采用超聲提取和溶劑提取兩種方法，通過對多糖提取含量的比較得出，超聲提取多糖含量明顯高于溶劑提取法，這可能是聲波破壞了女貞子細胞結構的緣故，而且超聲提取法操作簡易，無污染，成本低，是一種理想的多糖提取方法。

目前報道的測定中草藥中多糖含量的方法中，苯酚-濃硫酸法和蒽酮-濃硫酸兩種方法應用最廣[5]，用其測定女貞子多糖含量的方法亦有報道[1]。苯酚-濃硫酸比色法的顯色不穩定，測定誤差較大；而蒽酮-濃硫酸比色法的顯色穩定，線性關系比較好。因此，蒽酮-濃硫酸比色法為檢測女貞子多糖的一種理想方法[6]。

[1]邱榮麗,李璘.女貞子多糖的提取工藝[J].中成藥,2008,30(4):612-614.

[2]董嘉德.超聲波在中藥提取中的應用[J].中國藥業,2002,11(11):55.

[3]李淑梅,揚帆,湯波,等.太行山黃芪多糖的提取工藝[J].光譜實驗室,2008,25(3):335-337.

[4]張振明,葛斌,許愛霞,等.女貞子多糖的抗衰老作用[J].中國藥理學與毒理學雜志,2006,20(2):108.

[5]黃瑞松.中草藥多糖含量測定方法概述[J].中國藥師,2005,8(1):68.

[6]楊莉,王志華,陶健生.黃芪中黃芪多糖含量測定方法的比較[J].中國醫藥工業雜志,2005,36(9):562-563.