2種丙泊酚注射液犬體內(nèi)藥動學(xué)研究

宋桂娥，何海霞（1.山西省電力公司醫(yī)保處，太原市 030001；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床藥理研究室，重慶市 400016）

丙泊酚（Propofol）為烷基酚類的短效靜脈麻醉藥，臨床上主要用于全身麻醉的誘導(dǎo)或短時麻醉的維持。丙泊酚目前制劑主要有脂肪乳注射劑，其微乳制劑為新近研究的產(chǎn)品，無明顯破乳現(xiàn)象，更適于臨床使用。為比較2種制劑的作用，筆者在本文中以Beagle犬為研究對象，首先對其進行了體內(nèi)藥動學(xué)比較研究，以為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 試藥

實驗制劑丙泊酚微乳注射液（簡稱MBF，北京世橋生物制藥有限公司提供，批號：20071003，pH 6.7，規(guī)格：100 mg·10 mL－1）；參比制劑丙泊酚脂肪乳注射液（商品名得普利麻，簡稱DBF，阿斯利康公司生產(chǎn)，批號：EX109，規(guī)格：100 mg·10 mL－1）；丙泊酚對照品（北京世橋生物制藥有限公司提供，批號：931028，純度：＞99.5%）；甲醇、乙腈均為色譜級，硫酸銨為分析純，水為三蒸水。

1.2 動物

健康合格Beagle犬12只，♀♂各半，體質(zhì)量9～10 kg，個體間體質(zhì)量不超過±10%；由四川養(yǎng)麝研究所提供，環(huán)境設(shè)施合格證和質(zhì)量合格證號分別為川實動管第64號及川實動管質(zhì)第63號。

1.3 儀器

1100系列高效液相色譜儀，包括G1321A型熒光檢測器及色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國Agilent公司）；SK30型低溫離心機（美國Sigma公司）；BS210S電子天平（德國Sartorius公司）；QL-901旋渦混勻器（上海醫(yī)療器械六廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱：Agilent ZORBAX-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；預(yù)柱：C18（250 mm×4.6 mm，30 μm）；流動相：甲醇-水（75 ∶25）；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：ex：276 nm，em：310 nm。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取丙泊酚對照品10 mg，置于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，制備為0.1μg·mL－1標(biāo)準(zhǔn)貯備液備用。

2.3 樣品處理[2]

取血漿0.2 mL置于1.5 mL帶蓋EP管內(nèi)，加飽和硫酸銨、甲醇、乙腈各0.2 mL，漩渦振蕩1 min，15000 r·min－1離心15 min，取上清液0.1 mL進樣，記錄峰面積，以外標(biāo)法定量。

2.4 丙泊酚濃度測定方法學(xué)考察

2.4.1 色譜行為。取“2.2”項下對照品溶液及空白血漿、空白血漿+對照品及血漿樣品進樣分析，色譜結(jié)果詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.空白血漿；C.空白血漿+對照品；D.血漿樣品 ；1.丙泊酚Fig 1 HPLC chromatographyA.reference substance；B.blank plasma；C.blank plasma spiked with reference substance；D.plasma sample；1.propofol

由圖1可見，在本實驗所采用的色譜條件下，血漿中丙泊酚的tR為11.5 min左右，且峰形良好，不受血漿內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與最低定量濃度。在空白血漿中分別添加丙泊酚對照品溶液，使血藥濃度相當(dāng)于0.01、0.05、0.25、0.5、1.5、3.5、7.0 μg·mL－1，按照“2.3”項下方法進行處理和分離測定，所得數(shù)據(jù)用加權(quán)最小二乘法進行線性回歸，得丙泊酚峰面積（Y）與丙泊酚濃度（X）的回歸方程：Y＝446.5850X－4.5506（r＝0.9999）。結(jié)果表明，丙泊酚血漿檢測濃度線性范圍為0.01～7.0 μg·mL－1，最低定量濃度0.01 μg·mL－1。

2.4.3 回收率及日內(nèi)與日間精密度。于空白血漿中加入高、中、低（7.000、1.500、0.050 μg·mL－1）3種濃度的丙泊酚對照品溶液，按相關(guān)方法進行實驗，評價本法測定血漿中丙泊酚濃度的方法回收率、萃取回收率及日內(nèi)、日間RSD，結(jié)果見表1。

表1 回收率及精密度實驗結(jié)果Tab 1 Results of recovery and precision test

由表1可見，3種濃度的回收率為（79.85～110.12）%，日內(nèi)、日間RSD小于15.67%。

2.4.4 穩(wěn)定性實驗。用空白犬血漿制備含丙泊酚濃度為0.05、1.5、7.0 μg mL－1的血漿樣品，在室溫、凍融條件下放置，室溫分別在0、4、8、14、20、24 h取樣，凍融分別在0、5、10、15 、21、28 d時取樣，測定丙泊酚的峰面積。結(jié)果表明，3種濃度樣品在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為2.42%、3.92%、5.28%；在凍融條件下放置28 d內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為4.11%、3.51%、5.03%。

2.5 實驗方案

采用隨機交叉實驗設(shè)計，單劑量靜脈注射給藥。將12只Beagle犬隨機分為實驗制劑組和參比制劑組，每組6只，在Ⅰ、Ⅱ階段分別交叉靜脈注射2種制劑，2次給藥間經(jīng)1周清洗期。實驗前禁食12 h后，于次日晨靜脈注射4 mg·kg－1實驗制劑或參比制劑。給藥后4 h后統(tǒng)一進食。實驗期間禁食一切非實驗藥物，并由研究人員進行監(jiān)護，觀察記錄給藥后犬的一般體征狀況。于給藥后1、3、5、10、20、40、60、90、120、180、240、360、480 min采靜脈血1.5 mL，分離血漿，低溫保存（－20℃），待測。間隔1周后交叉靜注另一種制劑，按前述方法采集靜脈血。

2.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用3p97計算軟件，計算各個體的藥動學(xué)參數(shù)，AUC按梯形面積法計算。對2種制劑的AUC進行方差分析，雙單側(cè)t檢驗，（1－2α）置信區(qū)間法進行統(tǒng)計分析，判斷兩者是否存在差異。

2.7 藥-時曲線

12只Beagle犬交叉靜脈注射2種制劑4 mg·kg－1后，2組平均血藥濃度-時間曲線見圖2。

圖2 靜脈注射2種丙泊酚制劑后的平均藥-時曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of propofol after intravenous administration

由圖2可見，2種丙泊酚制劑在Beagle犬體內(nèi)的藥-時曲線均呈二室模型，藥動學(xué)過程較為接近。

2.8 藥動學(xué)參數(shù)

采用3p97計算機軟件（中國數(shù)學(xué)藥理學(xué)會），計算各個體的主要藥動學(xué)參數(shù)，結(jié)果見表2。

表2 2種丙泊酚制劑在Beagle犬體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù)（n＝12）Tab 2 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of propofol preparations in Beagle dogs（n＝12）

2.9 藥動學(xué)參數(shù)比較

對2種制劑的AUC經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進行方差分析、雙單側(cè)t檢驗及計算（1－2α）置信區(qū)間。結(jié)果，實驗制劑MBF與參比制劑 DBF 的 AUC（0～∞）分別為（29.33±13.55）、（28.66±13.76）μg·min·mL－1，經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換方差分析結(jié)果表明，差異無顯著性，F(xiàn)（1，10）為0.2042，P＞0.05；雙單側(cè)t檢驗t1＝3.956，t2＝3.054，均大于t0.05＝1.812；（1－2α）置信區(qū)間為[91.7%～115.5%]。

MBF 與 DBF的 AUC（0～t）分別為（27.67±9.60）、（21.90±10.10）μg·min·mL－1，經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換方差分析結(jié)果表明，差異無顯著性，F(xiàn)（1，10）為1.8235，P＞0.05；雙單側(cè)t檢驗t1＝7.231，t2＝4.530，均大于t0.05＝1.812；（1－2α）置信區(qū)間為[98.3%～112.8%]。以上結(jié)果表明2種制劑在犬體內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)AUC無顯著性差異。

3 討論

有關(guān)丙泊酚濃度測定的方法已有報道[1]，本文在現(xiàn)有的實驗室條件下，對文獻方法進一步驗證，在所建立的色譜方法下，主藥的峰形良好，且與血漿內(nèi)源性物質(zhì)分離好，回收率高，專屬性強，完全能滿足藥動學(xué)研究要求。

由圖2及表2可見，2種丙泊酚制劑在犬體內(nèi)藥動學(xué)過程較為接近，藥動學(xué)參數(shù)經(jīng)3種統(tǒng)計學(xué)方法處理表明，2種制劑無顯著性差異。本實驗為新劑型丙泊酚微乳注射液的應(yīng)用提供了藥動學(xué)依據(jù)。

[1]王增濤.3歲以下兒童丙泊酚藥動學(xué)研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2006，23（2）：132.

[2]余松林主編.醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：330.