復方虎杖半固體骨架膠囊中主要有效成分含量測定方法研究Δ

趙瑞芝，焦玉紅，周莉玲（1.廣州中醫藥大學第二附屬醫院中藥制劑實驗室，廣州市 51010；.山東濰坊市金通醫藥有限公司，濰坊市 61000；.廣州中醫藥大學中藥學院，廣州市 510006）

復方虎杖膠囊由虎杖、龍膽等藥組成，具有活血化瘀、增強神經功能康復等功效[1～7]，為廣州中醫藥大學第二附屬醫院治療腦出血后神經功能康復的有效制劑。由于服用量較大，故筆者在篩選有效部位的基礎上將其劑型改革為半固體骨架膠囊，可有效減少服用量，增強患者用藥依從性。為了控制產品質量及進行制劑質量評價，筆者建立了復方虎杖半固體骨架膠囊中4種主要有效成分大黃素、白藜蘆醇、虎杖苷、龍膽苦苷的含量測定方法。

1 儀器與試藥

CS9301型薄層掃描儀（日本島津公司）；半自動點樣儀、自動成像系統、自動展開系統（瑞士CAMAG公司）；硅膠G（青島海洋化工廠）；預制薄層板（美國Merck公司）。

復方虎杖半固體骨架膠囊（廣州中醫藥大學第二附屬醫院中藥制劑實驗室自制，復方虎杖浸膏在70℃加入聚乙二醇6000等熔融，混合均勻，以注射器分裝于明膠硬膠囊中，即可）；大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，含量：98%，批號：0756-200009）；白藜蘆醇標準品（美國Sigma公司，含量：99%，批號：111535-200502）；虎杖苷標準品（西安寶賽生物制品公司，含量：99%，批號：1535-2000）；龍膽苦苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，含量：98%，批號：0623-199967）；其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

分別取大黃素、白藜蘆醇、虎杖苷、龍膽苦苷對照（標準）品約2、4、8、7 mg，精密稱定，以無水乙醇分別定容于25、10、10、5 mL量瓶中，作為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取樣品10粒，除去膠囊殼，將內容物混合。取內容物約0.02 g，精密稱定，加無水乙醇5 mL，溶解洗滌，過濾，殘渣以無水乙醇反復洗滌至無色，合并洗滌液，水浴濃縮至干，以無水乙醇溶解定容于2 mL量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 色譜分析條件

硅膠G薄層板；展開劑（1）：石油醚-乙酸丁酯-甲醇-冰醋酸（4∶1∶0.7∶0.03）；展開劑（2）：氯仿-甲醇（7∶2）。展開劑（1）可使大黃素、白藜蘆醇與其它成分基線分離，薄層掃描圖（掃描波長293 nm）見圖1。展開劑（2）可使龍膽苦苷、虎杖苷與其它成分基線分離，薄層掃描圖（掃描波長270 nm）見圖2。掃描方式：反射式線性掃描，SX＝3；檢測波長：大黃素為285 nm，白藜蘆醇為293 nm，龍膽苦苷為270 nm，虎杖苷為313 nm。

2.4 線性關系考察

取對照品，分別點樣0.5、1、2、3、4、5 μL，大黃素、白藜蘆醇以展開劑（1）展開，龍膽苦苷、白藜蘆醇以展開劑（2）展開，分別掃描，得對照品標準曲線：大黃素為A＝105.65X+2.16（r＝0.999），白藜蘆醇為A＝292.20X+87.77（r＝0.999），虎杖苷為A＝364.39X－36.58（r＝0.999），龍膽苦苷為 A＝61.725X+107.23（r＝0.999）；線性范圍：大黃素為0.088～0.528 μg，白藜蘆醇為0.156～0.78μg，虎杖苷為0.312～1.56μg，龍膽苦苷為0.71～7.1μg。

2.5 掃描穩定性及點樣精密度試驗

取同一濃度樣品點5個斑點，展開，掃描，計算點樣精密度，得RSD值：大黃素為2.15%，白藜蘆醇為2.34%，虎杖苷為1.98%，龍膽苦苷為2.21%。將上述薄層板每隔30 min掃描1次，根據不同時間峰面積積分值考察穩定性，結果在3 h內穩定。

2.6 樣品含量測定

大黃素與白藜蘆醇同板測定，虎杖苷與龍膽苦苷同板測定。點樣采用瑞士CAMAG公司半自動點樣儀，點樣速度為50μL·min-1，點樣形狀為條帶樣，帶寬為5 mm；展開采用瑞士CAMAG公司全自動展開儀，溫度為12℃，相對濕度為65%，飽和時間為10 min，展開距離為8 cm，吹干時間為10 min。過程如下：在已活化的硅膠G薄層板上點對照品適量（大黃素1、6 μL，白藜蘆醇0.5、2 μL，虎杖苷0.5、2 μL，龍膽苦苷0.5、2 μL）與樣品5 μL，分別以展開劑（1）、（2）掃描，測定。復方虎杖半固體骨架膠囊有效成分含量測定結果見表1。

2.7 回收率試驗

在已經測定含量的樣品中加入對照品適量，照“2.2”項下方法提取，定容，照“2.7”項下方法測定，計算提取回收率，結果見表2。

表1 復方虎杖半固體骨架膠囊有效成分含量測定結果（n＝3）Tab 1 Content determination of four components in Compound P.cuspidatum semisolid matrix capsule（n＝3）

表2 回收率試驗結果（n＝3）Tab 2 Results of recovery test（n＝3）

3 討論

復方虎杖半固體骨架膠囊中輔料主要為聚乙二醇6000，加熱時可熔融，并溶于乙醇，會給樣品處理帶來干擾；若在室溫提取則由于乙醇難以浸入到樣品內部，導致提取時間較長。而白藜蘆醇、虎杖苷對光均較敏感，過長的提取時間對其穩定性不利。采用超聲提取的方法，結果發現對白藜蘆醇、虎杖苷、大黃素均有不利影響；后采用水浴（50℃）先讓聚乙二醇熔融，然后室溫冷卻，使提取溶劑與樣品充分接觸而又避免將輔料溶于供試品溶液中，較好地解決了這個問題。

龍膽苦苷與虎杖苷極性較接近，以石油醚-乙酸丁酯-甲醇-冰醋酸（4∶2∶1∶0.1）為展開劑不能將虎杖苷與龍膽苦苷分離（此展開劑可使白藜蘆醇與虎杖中其它成分基線分離），改變展開劑組成仍不能改善分離效果；改用氯仿-甲醇（7∶2）為展開劑，虎杖苷可與龍膽苦苷基線分離，但龍膽苦苷與虎杖中其它成分又難以分離；后采用美國Merck公司預制薄層板才使龍膽苦苷與其它成分基線分離，達到了分析測定的目的。

[1]杜寶新，鄭國慶，盧 明，等.腦脈Ⅱ號對腦出血大鼠神經功能缺損分級及超微結構的影響[J].中國老年學雜志，2007，27（5）：408.

[2]杜寶新，鄭國慶，盧 明，等.腦脈Ⅱ號膠囊抑制腦出血后腦水腫的機制研究[J].廣州中醫藥大學學報，2007，27（4）：297.

[3]王 艷，鄭國慶.腦脈Ⅱ號膠囊對急性腦出血大鼠腦微血管、膠質細胞、神經元超微結構的影響[J].現代中西醫結合雜志，2007，16（21）：2981.

[4]鄭國慶，黃培新.腦脈Ⅱ號膠囊對急性腦出血大鼠PAR-1動態表達的影響[J].中國中藥雜志，2006，31（15）：1265.

[5]陶雙友，劉茂才.腦脈Ⅱ號膠囊對腦出血所致腦心綜合征大鼠血漿皮質醇的影響[J].中國中醫急癥，2005，14（6）：558.

[6]陶雙友，劉茂才，盧 明，等.腦脈Ⅱ號膠囊對腦出血所致腦心綜合征大鼠血漿內皮素的影響[J].江西中醫藥，2005，36（4）：61.

[7]杜寶新，施曉耕.腦脈Ⅱ號膠囊對高血壓腦出血患者預后的影響[J].湖北中醫學院學報，2001，3（1）：31.