細葉桉葉超臨界CO2萃取揮發(fā)油的GC-MS分析Δ

周燕園，朱小勇，鐘振國，賀海東（廣西中醫(yī)學(xué)院，南寧市 530001）

細葉桉又名小葉桉、柳葉桉[1]、褐桉樹[2]、羊草果樹[3]。細葉桉葉為桃金娘科桉屬植物細葉桉Eucalyptus tereticornis Smith.的葉。原產(chǎn)澳大利亞，我國福建、廣東、廣西有栽培[4，5]。細葉桉葉味辛，微苦，性平，具有宣肺發(fā)表、理氣活血、解毒殺蟲之功效，用于治療感冒發(fā)熱、咳喘痰嗽、脘腹脹痛、瀉痢、鉤端螺旋體病、跌打損傷、瘡瘍、丹毒、乳癰、疥瘡、癬癢等病[3]。現(xiàn)代研究表明細葉桉葉揮發(fā)油具有較強的抑菌活性[6]。超臨界流體萃取（Supercritical fluid extraction，SFE）技術(shù)是近年來迅速發(fā)展被人們所認知的一種新型“綠色分離”技術(shù)。超臨界流體兼有液體和氣體雙重特性，密度與液體相近，滲透性好，擴散系數(shù)為液體的10～100倍，故能對多種物質(zhì)進行溶解和浸取，減壓后溶解能力又大大降低，整個過程兼具提取和蒸餾雙重作用。因此，SFE技術(shù)應(yīng)用于天然產(chǎn)物方面的研究日趨活躍[7，8]。目前，國內(nèi)、外對SFE-CO2法提取細葉桉葉揮發(fā)油成分的研究尚未見報道。本試驗利用SFE-CO2技術(shù)提取廣西細葉桉葉中揮發(fā)油成分，應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用技術(shù)分析提取物成分，為細葉桉葉的進一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

5973N-6890型GC-MS聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；HL-（5+1）/50MPa-ⅡAQ型SFE-CO2儀（杭州華黎公司）；LG16-W型高速微量離心機（北京醫(yī)用離心機廠）。

1.2 試藥

乙醚（分析純，北京化工廠）；無水硫酸鈉（分析純，上海化學(xué)試劑公司）；CO2（純度≥99.5%，廣西南寧藍天醫(yī)用氣體有限責(zé)任公司）。細葉桉葉采自廣西南寧市高峰林場，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院劉壽養(yǎng)副教授鑒定為桃金娘科植物細葉桉E.tereticornis Smith.的葉，樣品經(jīng)自然陰干后備用，標本存于廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)中心實驗室。

2 方法與結(jié)果

2.1 細葉桉葉萃取方法及條件

取細葉桉葉適量，粉碎，過10目篩，取120 g，采用SFECO2技術(shù)萃取揮發(fā)油等成分。本試驗以揮發(fā)油得率為指標，考察不同萃取釜、分離釜1、分離釜2的壓力和溫度，萃取時間，CO2流量對揮發(fā)油得率的影響，比較最佳萃取條件。最終篩選并確定SFE-CO2法萃取細葉桉葉揮發(fā)油的最優(yōu)化工藝條件：萃取釜壓力28 MPa（溫度51℃），分離釜1壓力5.5 MPa（溫度40 ℃），分離釜2壓力7 MPa（溫度30 ℃），CO2流量9.0 kg·h-1，萃取時間100 min。從分離釜收集得棕黃色萃取物共0.69 g，得率0.58%。取適量萃取物，加重蒸乙醚溶解并稀釋10倍，用無水硫酸鈉除去水分，離心后取上清液1 μL注入GC-MS聯(lián)用儀進行分析。

2.2 細葉桉葉萃取物GC-MS分析

2.2.1 GC條件 色譜柱：HP-5MS毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫：初始溫度70℃保持3 min，以3 ℃·min-1升至85℃，保持5 min，再以3℃·min-1升至135℃，保持5 min，以5℃·min-1升至160℃，保持1 min，最后升溫至260℃，溶劑延遲3.0 min；進樣口溫度：250℃；載氣：高純氦；載氣流量：1.0 mL·min-1；進樣量：1 μL；無分流比。

2.2.2 MS條件 接口溫度：280℃；電離方式：EI；電子能量：70 eV；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；倍增器電壓：1247 V；掃描范圍：45～550 amu；掃描間歇：2.94 次·s-1。

2.2.3 細葉桉葉萃取物分析 經(jīng)GC-MS分析后得到總離子流圖，見圖1。

圖1 細葉桉葉揮發(fā)油總離子流圖Fig 1 Total ions current chromatogram of E.tereticornis

對總離子流圖中的各峰經(jīng)MS掃描后得MS圖，經(jīng)NIST02/WILEY275標準譜圖庫進行檢索，人工譜圖解析，并查對有關(guān)資料，從基峰相對豐度等幾個方面進行比較，從而確定出細葉桉葉揮發(fā)油中的化學(xué)成分；再按照峰面積歸一化法計算各成分的相對含量。結(jié)果，共鑒定出28個化合物，占色譜峰總面積的88.13%，其中以桉油精（33.99%）、冰片（8.88%）、α-蒎烯（5.39%）、石竹烯（4.51%）、（+）-4-蒈烯（4.19%）為主。SFE-CO2法萃取細葉桉葉揮發(fā)油的化學(xué)成分分析結(jié)果見表1。

3 討論

在本文試驗條件下，采用SFE-CO2技術(shù)所得萃取物主要為單萜和倍半萜類化合物及其衍生物。這些萜類化合物具有止血、抗炎、止痛、消腫、健胃、清熱、解毒等多種功效，這與細葉桉葉的藥效基本一致；而且其多數(shù)具有較強的香氣和生物活性，是醫(yī)藥、食品、化妝品工業(yè)的重要原料。尤其是單環(huán)單萜類化合物桉油精（33.99%），含量高，且萃取時間短。可見，SFE技術(shù)適合廣西細葉桉葉中桉油精的提取，該法具有提取率高、產(chǎn)品純度好、流程簡單、工藝穩(wěn)定、耗能低、無有機溶劑殘留的特點。

表1 SFE-CO2萃取細葉桉葉揮發(fā)油的化學(xué)成分分析結(jié)果Tab 1 Component analysis of essential oil extracted with supercritical CO2from E.tereticornis

[1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草（第五冊）[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：638.

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[3]《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編（下）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1978：753.

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[5]劉玉明，李素芳，吳玉田.桉屬藥用植物資源調(diào)查[J].中草藥，2003，34（10）：957.

[6]葉 舟.林木精油對幾種植物病原菌抑制作用的初步研究[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2007，29（6）：928.

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