補腎健脾法治療原因不明復發性流產臨床研究*

李愛青 焦榕芳 劉潔 曾怡

（南昌大學第四附屬醫院 江西南昌330003）

生殖免疫學觀點認為，妊娠是一種成功的半同種移植，而流產被設想為半同種移植的失敗，妊娠的成功有賴于妊娠婦女對胚胎半同種抗原免疫耐受。近年來很多研究表明CD4+CD25+Tr細胞在人類體內對誘導和維持免疫耐受起著中樞作用[1]。現代中醫臨床和實驗證明中醫中藥具有調節內分泌免疫等多系統功能，補腎健脾法為傳統的安胎治法，臨床證明切實有效。本研究觀察補腎健脾對URSA患者治療前后外周血CD4+CD25+Tr表達頻率的變化，探討補腎健脾中藥在安胎治療中發揮的免疫調節作用，為補腎健脾法安胎治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象 URSA患者20例，2008年1月～2009年12月就診于南昌大學第四附屬醫院，年齡（28.3±3.59）歲，中醫辨證為脾腎兩虛型。入選標準：(1)流產次數2次或2次以上。(2)夫婦雙方和(或)胚胎染色體正常，無家族遺傳病史。(3)婦科檢查、超聲檢查和(或)子宮輸卵管造影等檢查排除器質性病變和生殖器官解剖畸形。(4)月經周期正常，基礎體溫雙相，超聲監測排卵正常。(5)男方精液分析正常。(6)性激素、甲狀腺功能、空腹血糖、胰島素等內分泌檢查均正常。(7)排除生殖道感染性疾病，如假絲酵母菌、支原體、衣原體等感染。(8)自身抗體包括：抗核抗體(ANA)、抗可提取核抗原(ENA)抗體、抗心磷脂抗體(ACL)。(9)與血凝有關的檢查：包括血小板聚集實驗(PagT)、D-二聚體、血小板顆粒膜蛋白-140（GMP-140)、血凝系列、全血分析均正常。(10)巨細胞病毒、弓形蟲等病原體檢查為陰性。(11)全身免疫功能狀態檢查，包括IgG、IgM、IgA、C3、C4、CH50、B 因子均正常。

1.2 實驗方法

1.2.1 服藥及采血時間 孕前2個月開始服用補腎健脾中藥（補腎固沖丸為基礎方隨證加減），月經周期第5天開始服藥，20d為1個療程，第3個月鼓勵患者自然受孕，受孕后連續服藥至孕3個月，B超顯示有胎心胎動，隨訪至妊娠結束。服中藥前及孕2個月時分別抽取患者外周血1mL進行流式細胞檢測，治療過程中失敗者流產時抽血檢測。

1.2.2 流式細胞檢測方法 抽取外周靜脈血1mL 48h內檢測，取肝素抗凝血50μL加入CD4-PE(BD PharMingen,USA)及CD25-FITC(BD PharMingen，USA)各 5μL，混勻，室溫下避光 15min；加入 1mL紅細胞裂解液，混勻，室溫下避光10min；以1 000r/min離心5min，棄上清，懸浮細胞，PBS液1mL洗滌；以1 000r/min離心5min，棄上清，懸浮細胞，上機檢測。

2 結果

補腎健脾安胎后URSA外周血中CD4+CD25+Tr表達頻率較治療前明顯升高，差異有顯著性意義（P＜0.05），CD25+mean即 CD25+平均熒光強度差異無顯著性（P＞0.05），CD4+CD25+/CD4+較治療前升高（P＜0.05）。URSA患者中藥治療后，其中10例保胎成功，5例患者妊娠后再次流產，成功妊娠者CD4+CD25+Tr細胞表達頻率顯著高于妊娠失敗者（P＜0.05）。見表1。

表1 20例URSA患者中藥治療前后CD4+CD25+Tr表達頻率的比較 (±S)

表1 20例URSA患者中藥治療前后CD4+CD25+Tr表達頻率的比較 (±S)

注：治療前后比較，*P ＜0.05，△P ＞0.05。

CD4+CD25+(%) CD25+mean CD4+CD25+/CD4+20） 7.32±1.57 21.36±3.67 3.96±1.46治療后（n=20） 11.23±3.58* 23.12±3.252△ 5.69±1.67*

3 討論

隨著生殖免疫學科的興起，發展，中西醫結合學者對流產的免疫學病因病理、診斷及治療進行較為系統研究。復發性流產中醫學屬“滑胎”范疇，流產主要源于腎不載胎，脾失攝養，對流產的治療除注重補腎外還必健脾益氣，使脾與腎、先天與后天相互促進以固胎元。生殖免疫學角度的研究發現，補腎益氣安胎中藥可能通過雙相調節Th細胞因子網絡的平衡，來調控母胎界面免疫內分泌網絡以維持妊娠[2]，補腎健脾藥可以增強母胎保護性免疫功能，降低母胎損壞性免疫功能，調節內分泌，對妊娠細胞因子有著重要影響[3,4]。本研究著重從補腎健脾法入手，采用補腎固沖丸為基礎方補腎健脾調沖任以安胎，方中菟絲子、續斷、巴戟天、杜仲、鹿角霜補腎固沖；當歸、熟地、枸杞、阿膠養肝滋血；黨參、白術、大棗補脾益氣；砂仁理氣調沖：全方腎脾肝氣血同治，使腎氣壯實，胎有所系，氣血充足，胎有所養，先天與后天相互支持，相互促進以益沖任之本。

近代生理免疫學研究發現，CD4+CD25+Tr細胞是機體以主動方式獲得和維持自身免疫耐受的一種重要方式，Tr細胞可通過抑制自身反應性T細胞的免疫反應，抑制傳統T細胞的活動以及促進一些抑制性細胞因子，在維持機體內環境的穩定、誘導移植物的耐受中發揮重要作用[5]。有研究報道，URSA和正常早孕婦女孕早期外周血CD4+CD25brightTr均顯著高于正常未孕婦女，URSA患者外周血和蛻膜CD4+CD25brightTr均顯著低于正常早孕婦女，CD4+CD25brightTr參與了正常妊娠的維持，有可能是調控母胎界面局部免疫耐受形成的一個重要因素[6]。人類調節性T細胞僅存在于CD4+CD25bright亞群，而CD4+CD25dimT細胞亞群主要是正常活化的T細胞[7,8]。本研究辨證采用補腎健脾法治療脾腎兩虛型URSA患者，通過檢測治療前后及不同妊娠結局外周血中CD4+CD25+Tr細胞的變化，發現補腎健脾中藥安胎后，URSA患者血中CD4+CD25+Tr數量較治療前明顯升高（P＜0.05），且妊娠成功婦女CD4+CD25+Tr顯著高于妊娠失敗者（P＜0.05），CD25+平均熒光強度無明顯變化，提示補腎健脾中藥可能提高了外周血CD4+CD25brightTr細胞數量，降低了CD4+CD25dimTr細胞數量，參與了母胎免疫調控，增強母體保護性免疫，有利于維持內環境的穩定，從而維持了妊娠。

目前，對URSA的研究表明，該病與母胎外周系統免疫及母胎界面局部免疫密切相關，本研究僅從外周血中Tr細胞角度探討補腎健脾治法對機體的免疫調節作用，對是否參與其他免疫環節的調控尚有待進一步研究。

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