血脂平沖劑對HLP大鼠補體調節蛋白CD55、CD59表達的影響*

劉鋒 張紅 齊斌武 許愛英

（1陜西中醫學院2008級碩士研究生 咸陽712046；2陜西中醫學院 咸陽712046）

心腦血管病是現代社會對人類健康危害較大的疾病之一，尤其是冠心病（CHD）居所有疾病的死亡率之首。而CHD則由動脈粥樣硬化(AS)引起為最常見。大規模、多中心的臨床流行病學及實驗研究證實，高脂血癥（HLP）是AS的首要危險因素，參與了AS的發生、發展及病變惡化的全過程[1]，與CHD、腦血管疾病（CVD）的發病率有直接關系。所以，HLP治療成為解決此類病變的研究重點，頗受醫學界關注，已日益引起廣大學者的高度重視。血脂平沖劑[2]由蒲黃、澤瀉、山楂、何首烏、白術、決明子等中藥組成，經多年的臨床觀察有較好的降脂效果，該方具有化痰祛瘀、健脾益腎的功效。本文旨在通過對血脂平沖劑作用機理的探討，為心腦血管病預防與治療的新藥開發應用提供科學的理論依據。

1 實驗材料

1.1 試劑 總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）測定試劑盒由南京建成生物制品研究所提供；單克隆抗體CD55-PE、CD59-FITC試劑盒由美國caltag公司提供。

1.2 藥物 辛伐他汀片，浙江海正藥業股份有限公司生產；血脂平沖劑，陜西中醫學院門診部提供。

1.3 實驗動物 昆明種雄性SD大鼠60只,體重180～220g,西安交通大學醫學院實驗動物中心提供。1.4 儀器與設備 流式細胞儀（型號：C3K、3KVA），全自動生化分析儀，臺式高速離心機等。

2 實驗方法

2.1 實驗分組 隨機分為六組，每組10只：A組（空白對照組）、B組（高脂病理模型組）、C組（辛伐他汀組）、D組（血脂平沖劑大劑量組）、E組（血脂平沖劑中劑量組）、F組（血脂平沖劑小劑量組）。

2.2 飼料配方 普通飼料：由西安交通大學醫學院實驗動物中心提供。脂肪乳劑：參考高脂飼料配方[3]，并略加改進：膽固醇2%、豬油10%、丙基硫氧嘧啶0.2%、吐溫80.2%，加防腐劑、水制成乳劑。

2.3 模型建立及給藥 60只SD大鼠普通飼料于20～24℃、濕度40%～60%動物留觀室內適應喂養7d。實驗開始繼續普通飼料喂養，除A組大鼠灌胃等體積的生理鹽水外，其余五組灌胃脂肪乳劑5mL/kg。造模4周后，除A、B組給予等體積生理鹽水灌胃外，其余各組每天上午灌胃給藥，C組給予辛伐他汀灌胃，D、E、F組分別給予血脂平沖劑大、中、小劑量灌胃，劑量分別為C組0.625g/kg，D組10mL/kg，E 組 4mL/kg，F 組 2mL/kg，灌胃 6 周后停藥，用戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈、靜脈采血。

2.4 檢測方法 用酶法檢測血清中 TC、TG、HDL-C、LDL-C；用流式細胞儀測白細胞 CD55、CD59的表達，即以熒光標記細胞平均強度（MFI）來反映CD分子的表達。

2.5 統計學處理 實驗數據用SPSS12.0軟件包進行統計學處理，統計結果用均數±標準差 (±S)表示，并用t檢驗比較組間差異性。

3 結果與分析

3.1 血脂平沖劑對HLP大鼠血脂水平的影響 從表1可以看出，高脂病理模型組大鼠TC、TG和LDL-C含量較空白對照組均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），HDL-C 略有降低（P ＜0.05），表明本次實驗造模成功。實驗結果表明，血脂平沖劑具有顯著的調脂效果，并且大劑量組效果最好。

表1 血脂平沖劑對HLP大鼠血脂水平的影響 (±S)mmol/L

表1 血脂平沖劑對HLP大鼠血脂水平的影響 (±S)mmol/L

注：與空白組比較，▲P ＜0.01，▲▲P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.01，△△P ＜0.05。

組別 n 劑量 TC TG HDL-C LDL-C A 10 — 1.81±0.29 0.39±0.08 0.52±0.09 0.83±0.09 B 10 — 2.21±0.25▲ 0.70±0.18▲ 0.39±0.08▲▲ 0.98±0.05▲▲C 10 0.625g/kg 1.82±0.29△△ 0.48±0.09△△ 0.51±0.08△△ 0.85±0.10△△D 10 10mL/kg 1.83±0.29△△ 0.42±0.09△ 0.53±0.05△ 0.79±0.14△E 10 4mL/kg 1.88±0.26△△ 0.49±0.09△△ 0.52±0.08△△ 0.85±0.12△△F 10 2mL/kg 2.15±0.28 0.51±0.10△△ 0.41±0.08 0.96±0.04

3.2 血脂平沖劑對HLP大鼠CD55、CD59表達的影響 從表2可見，與高脂病理模型組相比，血脂平沖劑能使HLP大鼠白細胞CD55、CD59的表達明顯上調，且呈現出明顯的量效正相關關系。

表2 血脂平沖劑對HLP大鼠CD55、CD59的影響 (±S)

表2 血脂平沖劑對HLP大鼠CD55、CD59的影響 (±S)

注：與空白組比較，▲P ＜0.01；與模型組比較，△P ＜0.01，△△P ＜0.05。

A B C D E F CD55 2.40±0.25 1.81±0.12▲ 2.47±0.39△ 2.34±0.20△ 2.20±0.15△ 1.88±0.14 CD59 2.39±0.21 2.00±0.09▲ 2.78±0.19△ 2.76±0.12△ 2.69±0.39△ 2.17±0.14△△

4 討論

補體是機體免疫系統的重要組成部分，補體系統的過度激活則會直接或間接地導致機體自身正常組織的損傷。補體調節蛋白是調節補體功能的補體抑制因子，能夠抑制補體的過度激活，保護宿主細胞免受補體介導的免疫損傷[4]。TC、TG增高是HLP的顯著標志，以往治療該病均以調節TC、TG為主。隨著分子免疫學的發展，大量研究證實HLP中補體參與非常活躍，補體激活在AS的發生發展中起重要作用[5]，實驗報道也證實補體活化可促進AS的進展和不穩定斑塊的形成[6]。國內研究發現，HLP患者血清C3、C4升高并與血脂水平相關，表明高脂血癥患者存在補體生成升高，提示補體系統功能活躍，這與國外研究結果相一致[7]。唐氏等[8]認為補體C3參與腎臟疾病患兒血脂代謝的調節。補體調節蛋白可抑制補體的活性，尤其是CD55、CD59。CD55又稱衰變加速因子（DAF），具有促進C3、C4轉化酶衰變的活性，可阻止補體C3、C4轉化酶的形成，并且可使已形成的C3、C4轉化酶失去其穩定性，避免補體對自身組織細胞的溶解、破裂[9]；CD59又稱保護素，可阻礙補體C7、C8與相應受體的結合,抑制膜攻擊復合體（MAC）的形成，使自身正常組織細胞免受補體損傷[10，11]。

本研究結果顯示病理模型組CD55、CD59平均熒光強度明顯降低，隨著CD55、CD59表達的上調，血脂含量明顯下降，表明血脂水平與補體調節蛋白CD55、CD59具有相關性，并且具有顯著的量效關系。血脂平沖劑降脂、調脂作用可能是通過促進CD55、CD59高表達實現的，其詳細機理還需要更為深入的基礎研究。HLP患者CD55表達下調，降低了機體對補體活化的抑制作用，有利于AS的形成[12]。而血脂平沖劑可促進CD55、CD59的表達上調，則說明血脂平沖劑可抑制補體的活性，可直接干預AS的發生。

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