血管生成素與血管內皮細胞生長因子在乳腺癌中的表達及臨床意義△

河北北方學院成人教育學院(張家口 075000) 劉正泉 薄愛華

研究表明任何腫瘤體積達到 2～ 3mm3時,要繼續生長必須依賴內部新的血管形成,這些新血管不光為腫瘤細胞提供營養,同時為癌細胞的轉移提供通道[1]。因此新生血管的建立,是癌細胞培殖、浸潤和轉移的重要過程,該過程受到多種細胞因子的調節,其中血管生成素(Angiogenin,Ang)家族和血管生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在血管新生過程中有重要作用。目前它們已成為抗腫瘤治療的重要靶點[2]。為了探討 Ang和 VEGF在乳腺良、惡性腫瘤內表達狀況、意義以及它們的相關性,本實驗利用SABC免疫組織化學方法,檢測了乳腺癌 76例,乳腺腺瘤 36例,現將結果分析報告如下。

材料與方法

1 臨床資料 自 2007年 6月至 2009年 4月收集張家口市河北北方學院附屬第一醫院、第三附屬醫院和張家口市第五醫院外科乳腺癌手術切除標本 76例,腺瘤標本 36例,其乳腺癌患者年齡分布為 27～ 72歲,平均 54歲 ,中位年齡為 50.5歲。腺瘤患者年齡分布 25～ 61歲,平均 42歲,中位年齡 42.5歲。

2 標本處理及染色 將新鮮標本固定于 10%中性甲醛液內(24h),常規石蠟包埋,切片厚度 5 μ m。裱片后 37℃保存、待染。免疫組化染色 鼠抗人 Ang-2和VEGF單克隆抗體、SP免疫組織化學試劑盒和 DAB顯色劑均購自北京中杉金橋生物技術公司。染色程序嚴格按照試劑盒規程要求進行。陽性對照為已知 Ang,VEGF陽性胃癌切片。陰性對照以 PBS代替Ⅰ抗。

3 結果判斷 VEGF,Ang陽性者癌細胞質呈棕黃色,近胞膜處著色更深;凡 10個高倍視野(×400)陽性細胞＞5%者為陽性病例;陽性細胞少于 5%者為陰性病例。

4 統計學處理 采用 SPSS10.0軟件進行統計學檢驗,以P＜0.05為有顯著性差異,P＜0.01為有極顯著性差異;相關性分析采用四格聯列表法,相關系數 r＞0.5為高度正相關。

結 果

1 Ang-2、VEGF在乳腺良惡性腫瘤中的表達見表 1。乳腺癌組 Ang-2陽性率為 67.11%(51/76),顯著高于腺瘤中的陽性率[33.33%(12/36),P＜0.05]。VEGF在乳癌中陽性率為 60.52%(46/76),顯著高于腺瘤組中的陽性率[19.44%(7/36),P＜0.05]。

2 Ang-2和 VEGF表達與病理類型及臨床分期等生物學特性的關系 見表 2。

表1 Ang-2、VEGF在乳腺良、惡性腫瘤表達與患者年齡的關系 [n(%)]

表2 Ang-2,V EGF在乳腺癌過表達與生物學特性的關系[n(%)]

經四格聯列表法統計 Ang-2與 VEGF相關系數為 0.63(r=0.63),說明兩者在乳腺癌中表呈顯顯著正相關,說明它們在促進血管新生和腫瘤轉移方面有協同作用。

討 論

1 Ang家族及其在新生血管中的作用 Ang是血管生成因子中具有核糖核酸酶(RNase)活性的因子,是一種分泌型單鏈堿性蛋白。分布于血漿和腫瘤組織中[3]。 Ang有 4個亞型 (Ang1,2,3,4)它們有共同的受體即酪氨酸激酶受體(Tie),目前對 Ang1,2研究較多,該實驗觀察的為 Ang-2在乳腺癌和腺瘤中的表達狀況。

Ang-2基因定位在 8號染色體(8p21),分子量為75kD,在腫瘤細胞及血管內皮細胞中表達。 Ang參與血管形成的全過程,在初始階段它們促進內皮細胞由原血管向新生血管處遷移;在第二階段 Ang與受體結合激活內皮細胞中絲裂原蛋白酶,導致細胞中骨架結構重建,增強細胞遷移力。同時內皮細胞中的 Ang伙同受體形成的復合物,在多種蛋白的協助下進入細胞核(稱為核轉移過程),發揮核糖核酸酶(RNase)活性作用,參與 RNA調控作用,促進內皮細胞增殖。Sfilgoi等[4～6]發現高水平 Ang-2表達的乳腺癌患者易發生腋下淋巴結轉移,對預后判斷有重要意義。

本實驗表明乳腺癌中 Ang-2陽性率明顯高于乳腺瘤;在乳腺癌臨床分期Ⅲ、Ⅳ期組和淋巴轉移組陽性率顯著高于分期Ⅰ、Ⅱ期組和無淋巴轉移組。因此,提示 Ang-2陽性表達是乳腺癌早期診斷和提示后不良的重要指標。

2 VEGF性質及其在乳腺癌高表達的意義VEGF是近年來發現的一種細胞分裂素,它以同源二聚體的方式存在,是一種糖蛋白,具有很強的血管通透劑作用[7]。其家族包括 5個成員,分別命名為 VEGFA、B、C、D和 piGF,分子量不同,其范圍為 34～45kD[A]。VEGF通過與血管內皮細胞上三種酪氨酸激酶 受體 VEGFR-1(FLT-1)、VEGFR-2(FLT-2)和VEGFR-3(FLT-3)結合,從而引起一系列信號傳導,促進內皮細胞增殖與遷移,最終引起血管和淋巴管形成,并且使血管通透性增高[8,9]。為腫瘤細胞浸潤和轉移提供了條件。亦有報告[10],VEGF能上調腫瘤細胞中 BCL-2基因,抑制細胞凋亡,從而促進腫瘤增長。

本實驗表明乳腺癌中 VEGF陽性率達 60.52%,明顯高于腺瘤。臨床分期高(Ⅲ、Ⅳ期)組和淋巴結轉移組陽性率高于分期(Ⅰ、Ⅱ期)組和無淋巴轉移組。提示VEGF高表達是提示患者預后不良的重要指標。

3 VEGF和 Ang-2的相關性 有研究表明 Ang-2對血管生成的作用和 VEGF是否存在有重要關系。當 VEGF不存在時 Ang-2無明顯促血管生成作用;只有當 VEGF存在時 Ang-2誘導內皮細胞分裂,移位和新的血管形成[11]。本實驗證明乳腺癌中 EGFR和Ang-2表達是顯著正相關,提示 EGFR和 Ang-2在乳腺癌內血管新生過程中有協同效應。因此臨床采用VEGF和 Ang-2抑制劑是效果良好的靶向治療。據Oliner等[12]研究用 Ang-2抗體治療小鼠腫瘤,發現腫瘤內血管內皮細胞增生受到抑制,腫瘤體積縮小。目前從臨床試驗獲得的數據表明,針對 V EGF的抗腫瘤藥物達到了如下效果[13,14]:①破壞腫瘤血管;②使腫瘤血管及血管微環境正常化;③減少血液循環中的內皮細胞及其祖細胞。總之,采用抗腫瘤血管形成的治療策略已在抗癌治療中初見端倪,今后仍應在機制研究方面深入一步,為推廣“饑餓”療法提供科學依據。

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