宮頸癌患者人乳頭瘤病毒基因分型的研究

陳仲波,羊正炎,俞 華,朱筧青,牟翰舟,呂衛國

宮頸癌是一種常見的嚴重危害婦女健康的惡性腫瘤,人乳頭瘤病毒 (HPV)感染是引起宮頸癌及其癌前病變的主要原因[1],但 HPV基因型與宮頸癌的關系尚待進一步探討。由于受分型技術的限制,我國宮頸癌 HPV基因型的流行病學資料較為有限。本研究應用可檢測 21種 HPV基因型的導流雜交基因芯片技術對 1 169例宮頸癌患者進行 HPV檢測和分型,為宮頸癌的預防、高危人群篩查和特異性疫苗的研制提供一定的實驗依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇 2007—2008年在浙江省腫瘤醫院就診并經病理學確診的 1 169例浸潤性宮頸癌患者為研究對象。年齡22～86歲,平均 48.2歲。按 1995年為際婦女科聯合會 (FIGO)標準[2]分期:I期,413例;Ⅱ期,526例;Ⅲ期,224例;Ⅳ期,6例。組織學類型按 2003年 WHO分級標準分型[3]:鱗癌 1 092例,腺癌 41例,腺鱗癌 25例,其他 11例(包括:透明細胞癌 9例,小細胞癌 2例)。

1.2 方法

1.2.1 標本采集及保存 使用專用的 HPV采樣刷采集非月經期宮頸癌患者的宮頸脫落細胞標本,采樣前 3 d內無陰道用藥史,采樣前 1 d禁止性生活。以專用細胞保存液保存標本。采集的標本置 4℃冰箱保存,2周內檢測。

1.2.2 HPV分型檢測 用凱普導流雜交技術及其配套試劑(潮州凱普生物化學有限公司提供),對21種常見的 HPV基因型進行分型檢測,包括 13種高危型 HPV(16、18、31、33、35、39、45、 51、 52、 56、 58、 59和 68),5種低危型 HPV(6、11、42、43和 44)和 3種中國人常見的 HPV基因型(53、66和 CP8304)。檢測過程包括:樣本 DNA提取;PCR擴增;導流雜交;酶標顯色;結果判斷,根據芯片上 HPV基因型分布相應位點判斷為何種基因型。

1.3 統計學方法 采用 SPSS 12.0軟件進行統計處理,HPV基因型感染率比較采用 χ2檢驗,以 P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 宮頸癌患者 HPV感染率及 HPV各致病基因型的感染率 1 169例宮頸癌患者檢出 1 072例 HPV,HPV感染率為91.70%。HPV感染者各基因型的感染率:感染 HPV16為62.10%(726/1 169);感染 HPV18為 10.95%(128/1 169);感染 HPV58為 10.52%(123/1 169);隨后的 HPV基因型從高到低依次為 HPV52為 7.96%(93/1 169);HPV33為3.93%(46/1 169);HPV31為3.76%(44/1 169);HPV68為1.88%(22/1 169);HPV53為1.88%(22/1 169);HPV45為 1.20%(14/1 169);HPVCP8304為 1.20%(14/1 169);HPV66為 0.77%(9/1 169);HPV59為 0.68%(8/1 169);HPV6為 0.60%(7/1 169);HPV39為 0.43%(5/1 169);HPV11為 0.43%(5/1 169);HPV56為 0.26%(3/1 169);HPV42為 0.26%(3/1 169);HPV35為 0.17%(2/1 169)和 HPV44為 0.17%(2/1 169);未檢測到 HPV35及HPV51。

2.2 HPV基因型單一感染、多重感染情況 1 169例宮頸癌患者檢出 902例單一 HPV基因型感染,HPV單一基因型感染率為 77.16%;170例患者 HPV基因型混合感染,HPV基因型混合感染率為 14.54%;其中二重感染 143例,二重感染率為12.23%;三重感染 15例,三重感染率為 1.28%;四重感染 9例,四重感染率為 0.77%;五重感染 3例,五重感染率為0.26%(見表 1)。

2.3 宮頸癌組織類型與 HPV基因型的關系 宮頸癌患者中以宮頸鱗癌為主,故將宮頸癌患者分為鱗癌和非鱗癌兩組。宮頸非鱗癌組患者 HPV18基因型感染率為 12.99%,鱗癌組HPV18基因型感染率為 6.87%,兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05,見表 2)。

3 討論

目前發現的 HPV基因型達 200多型,其中約 50型與生殖道黏膜病變有關,對宮頸癌 HPV基因型的研究發現不同地區之間存在差異。2003年 Clifford等[4]對 85項涉及全球范圍的10 058例宮頸癌的研究進行 Meta分析,發現在全世界范圍內HPVl6是最主要的基因型,其次是 HPVl8。除這兩個基因型外,其他 HPV基因型的分布存在明顯的地區差異,非洲較為流行的是 HPV45和 33,歐洲較為流行的是 HPV45,南、北美洲是 HPV31、33和 45,在亞洲較為流行的是 HPV58和 52。我國宮頸癌 HPV基因型的流行病學資料報道較少,近年來僅有湖北[1]、四川[5]、臺灣[6]、廣東[7]等為數不多的地區有報道,且樣本量較小,浙江省尚無大樣本的研究報道。本研究顯示宮頸癌患者 HPV16基因型感染率為 62.10%,居首位;HPV18基因型感染率為 10.52%,居第二位,但低于 Prétet等[8]報道的 19%;HPV58和 HPV52的感染率為 10.52%和 7.96%,居第三、四位,本地區宮頸癌患者常見 HPV基因型的分布符合亞洲地區研究結果。

表 1 1 169例宮頸癌患者 HPV基因型感染情況Table 1 Prevalence of HPV genotypes in 1 169 cases of cervical cancer

表 2 宮頸鱗癌和非鱗癌患者 HPV基因型的感染率比較 [n(%)]Table 2 Comparison of cervical squamous cell cancer and nonsquamous cell cancer in HPV genotype infection rate

宮頸癌患者的 HPV基因型多重感染并不少見,但各家報道的檢出率并不一致,除與研究的人群及地域有關外,主要還與檢測方法有關[9]。本研究發現宮頸癌脫落細胞中 HPV基因型多重感染率為 14.54%,與 Cai等[1]報道的 11%相近。有學者報道 HPV16是多重感染中最常見的基因型,HPV16、18、33常有多重感染,故認為 HPV的多重感染與 HPV基因型有關[10]。本研究顯示,在 170例 HPV多重感染中發現絕大部分含 HPV16、18,表明 HPV16、18是多重感染中最常見的基因型。

宮頸癌的惡性程度與 HPV感染類型有關,感染 HPV18基因型的宮頸癌患者的病情進展快,轉移早,預后差[11-12]。本研究發現非鱗癌組患者 HPV18基因型感染率高于鱗癌組,HPV16基因型感染率與鱗癌組患者無差異。有報道顯示,HPV16基因型多見于宮頸鱗癌,而 HPV18基因型多見于宮頸腺癌[13]。宮頸腺癌中以 HPV18基因型居多,這可能是其生物學行為如趨于年輕化、內生型生長、易于向宮頸組織深間質浸潤、侵犯血管淋巴間隙、較早發生轉移、對治療的反應差及預后比宮頸鱗癌差的病原學原因,HPV18基因型在宮頸腺癌與宮頸鱗癌中表達的不同可能有助于解釋兩者臨床病理特征的不同。

由于 HPV與宮頸癌之間有較為明確的病因學聯系,使研究者將目光投向針對病因的預防性措施——HPV疫苗,希望其可用于加強 “初級預防 -篩查 -治療”的癌癥控制規劃,以減少宮頸癌發生對社會和家庭造成的負擔。美國食品藥品監督局 (FDA)批準上市的默克 (Merck)公司四價疫苗 (Gardasil)及正接受 FDA評估的葛蘭素史克 (Glaxo Smith Kline,GSK)公司二價疫苗 (Cervarix),但疫苗的整體預防效果取決于 HPV的基礎感染型別[14]。因此,宮頸癌 HPV基因型分布的研究,有助于確定宮頸癌發生的高危因素、高危人群,為政府制定預防政策提供依據,也為本地區 HPV疫苗的推廣、研發提供理論依據。

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