數碼成像技術在ABO血型檢測中應用

彭繼紅，錢 榕，方昌志，熊麗紅

(江西省血液中心，江西 南昌 330077)

ABO定型的方法有紙片法、試管離心法、U型微板法、梯形微板法、微柱凝膠法。經典的試管離心方法目前仍被認為是最可信賴的ABO定型方法[1]，但同紙片法一樣不適合血站系統大批量的結果處理，不僅費時，而且易出現人為因素所致的差錯事故。微柱凝膠法由于利用了分子篩凝膠技術將凝集和游離的紅細胞完全隔離開來，操作簡單且可標準化操作，結果清晰可靠，便于保存，適合臨床推廣使用，但不適合于血站大批量檢測。U型微板法使用較為廣泛，相比過去的手工檢測法，已向前邁了一大步，但我們在使用過程中發現該方法的檢測有一定的局限性。本中心新引進Xantus加樣器與Poseidon數字血型儀聯合組成的一體機，利用梯形微板法血型檢測系統(采用數碼成像技術)，不僅能完成ABO正反定型，且檢測反定型弱凝集狀態樣本的靈敏度較高，現介紹如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 2010年1月～2010年6月的無償獻血者全血標本27882人份，采用EDTA-Na2抗凝。

1.2 試劑和設備 標準抗A、抗B血清 (批號為200903035、200911148)和標準 A、B、O 紅細胞(濃度為 2 ～5% ， 批 號 為 201001014、201002031、201003036、201003054、201004058、201006103、201007111、201008124)均由北京金豪生物技術有限公司生產。Xantus加樣器與Poseidon數字血型儀一體機(深圳愛康公司)。

1.3 方法 用全自動加樣系統將標準紅細胞和待檢血漿分別加入梯形微板中，振蕩混勻，靜置反應后，用數字血型分析儀讀板。分析反應圖像，根據ABO血型定型原則判定反定型結果。

根據血型判讀儀已設定的凝集與非凝集臨界值，隨機選用常規A、B、O、AB型血樣各15份，5ml/份，對標本紅細胞稀釋濃度、標準血清稀釋度、紅細胞與血漿加樣比例、反應靜置時間采用正交實驗優化試驗參數，記錄在各種參數條件下正確判讀血型的血樣數，再通過綜合分析得出試驗最佳條件。

1.3.1 反定型試驗條件 加樣比例，標準紅細胞37μl和標本血漿13μl、標準紅細胞30μl和標本血漿 20μl、標準紅細胞 25μl和標本血漿 25μl；震蕩后在室溫(18～25℃)分別靜置 45、60、75min。

1.3.2 正定型試驗條件 應正、反定型試驗在同一塊微板上試驗，所以靜置時間定為1h，考慮以下因素對試驗的影響。標本紅細胞稀釋濃度設為2%、2.5%、3.0%；標準血清稀釋度為 1:7、1:10、1:13；加樣比例，標本紅細胞37μl和標本血漿13μl、標準紅細胞 30μl和標本血漿 20μl、標準紅細胞 25μl和標本血漿 25μl。

2 結果

2.1 試驗條件 標準紅細胞 37μl和標本血漿13μl靜置60分鐘為正定型最佳條件；2%標本紅細胞稀釋濃度、1:10標準血清稀釋度、加樣比例標準紅細胞25μl和標本血漿25μl為反定型最佳條件。

2.2 準確率 采用上述最佳試驗條件進行正反定型，27882人份一次判讀中有15例血型正反定結果出現異常，1例為冷凝集、2例為溶血、12例為重度脂肪血，準確率為99.94%。

2.3 可重復性 隨機選用常規A、B、O、AB型血樣各15份，5ml/份，重復加樣檢測3次，每次所有標本均能一次性判讀正確，具有良好的可重復性。

3 討論

目前血站常用的批量檢測ABO血型方法為U型微板法、梯形微板法。梯形微板技術是利用孔壁呈梯狀的特殊V字型微孔板(10×12孔)，當相應的抗原、抗體發生凝集時，會均勻分布于孔壁，未發生抗原抗體反應的紅細胞則沿階梯滾落于孔底中央，形成圓點，Poseidon軟件將每個反應孔分解成6300個像素點，并且按其白度、灰度和黑度3個區域進行分類，分別計算出相關區域的像素數量，再運用模糊數學的方法分析判斷，經CCD系統圖像數字化處理后,即數碼成像后得出血型鑒定結果。U型微板法運用酶標儀僅在微孔直徑1個方向上讀取30～40個值，再計算相對透光率判斷血型結果。比較而言，梯型微板法的判讀方式更為完善準確,其準確性也優于U型微板法。從本中心的實驗結果看，梯形微板法的準確率達99.94%與有關報道相符[2]；具有良好的可重復性。從引起血型誤判的因素分析，溶血和脂肪血仍是影響血型檢測準確率的重要因素，為保證血型的準確性，對標本的接收和處理過程至關重要。除溶血和脂肪血影響血型檢測外，加樣儀吸取的血漿樣本量少，堵針或血液樣本中纖維蛋白析出均會導致吸樣不成功而造成假陰性結果，因此應做好加樣儀的日常維護與保養工作，并在加樣時注意觀察，防止漏加，梯形微板法操作簡單，且更節約成本，如抗血清僅需U型微板法的1/10，加之其檢測采用自然沉降反應，無需離心和反復振蕩，使凝集反應在靜置狀態完成，反應時間更充裕，從而提高了弱凝集樣本的檢出率。由于正反定型在一塊梯形板上批量完成，實現了正反定型自動校正，防止了錯判和誤判。檢測結果數碼成像并數字化處理，原始數據以圖象的形式的保存并可打印，從而使血型檢測具有長期的可追溯性。

[1]高 峰主編.輸血與輸血技術[M].人民衛生出版社,2003:90-91.

[2]王福成,施之雍,蔡雋等.梯形微板技術在ABO血型檢測中的應用[J].中國輸血雜志,2007,20(1):53-55.