甲狀腺乳頭狀癌組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達(dá)與微血管密度的關(guān)系

底旺 李清懷 張凱麗 嚴(yán)麗

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一組由結(jié)締組織細(xì)胞分泌的，參與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)降解的Zn2+依賴性的蛋白酶家族。實(shí)驗(yàn)證明MMPs與腫瘤的發(fā)病及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［1］。有研究證實(shí)，MMPS的表達(dá)水平或活性在惡性腫瘤中增高。MMP-2是MMPs的一員，能降解細(xì)胞外基質(zhì)和基膜的主要成分，在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移及血管生成過程中起重要作用［2］。甲狀腺乳頭狀癌是頸部常見病。我們通過SP免疫組織化學(xué)技術(shù)及形態(tài)定量分析方法，檢測上述兩類良惡性腫瘤組織中MMP-2的表達(dá)，并在CD34染色切片上檢測間質(zhì)微血管密度(MVD)，分析MMP-2表達(dá)與甲狀腺腫瘤血管生成的關(guān)系。

1 材料與方法

1．1 材料 標(biāo)本選自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院病理科1996至2004年手術(shù)切除標(biāo)本的存檔蠟塊90例，男52例，女38例;年齡16～70歲。其中甲狀腺腺瘤35例，甲狀腺乳頭狀癌55例。

1．2 試劑 鼠抗人MMP-2單克隆抗體(MAB-0244)、鼠抗人CD34單克隆抗體(MAD-0034)及S-P試劑盒均購于邁新生物試劑有限公司。

1．3 方法及結(jié)果判定 采用SP免疫組織化學(xué)法。實(shí)驗(yàn)步驟按說明書進(jìn)行，用已知陽性片作陽性對照。以PBS緩沖液取代一抗作陰性對照。(1)MMP-2參考標(biāo)準(zhǔn)按鏡下陽性細(xì)胞所占組織細(xì)胞的百分比，觀察5個視野(×200)取均值，陽性細(xì)胞＜25%為+，25% ～50%為++，＞50%為+++。(2)MVD計(jì)數(shù)采用Weidner等［3］的方法判斷陽性結(jié)果，以與背景明顯有別的任何一個染成棕色的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞群作為一個血管。先在低倍鏡下(10×10)尋找腫瘤內(nèi)血管最高密度區(qū)(hot spot)，然后在高倍鏡下(10×40)計(jì)數(shù)5個血管最高密度區(qū)的微血管數(shù)，取均值代表MVD。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以ˉx±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P ＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 MMP-2測定結(jié)果 MMP-2在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)較強(qiáng)，周圍間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)較弱，在腫瘤細(xì)胞與間質(zhì)交界處及腫瘤浸潤的前緣有很強(qiáng)的陽性反應(yīng)。甲狀腺腺瘤組織中MMP-2陽性率為28．6%(10/35)，甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性率為67．3%(37/55)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。

2．2 MVD測定結(jié)果 CD34在甲狀腺腫瘤的血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)著色，微血管分布呈異質(zhì)性，且密集區(qū)多位于腫瘤浸潤的前緣。甲狀腺腺瘤的MVD平均值為(45±3)個/HP，甲狀腺乳頭狀癌為(62±4)個/HP，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。

2．3 甲狀腺腫瘤MMP-2與MVD的關(guān)系 90例甲狀腺腫瘤組織中MMP-2陽性47例，MVD值(68±4)個/HP;高于 MMP-2陰性43例的值(45±4)個/HP，兩者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0．01)。

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病率較低，僅為全部惡性腫瘤的1%，并占全身癌瘤的第25位，病死率僅0．4%，但居全部內(nèi)分泌及頭頸部惡性腫瘤的首位［4］。其侵襲和轉(zhuǎn)移是造成患者死亡的主要原因，而腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵之一是通過MMPs破壞由細(xì)胞間基質(zhì)及基膜構(gòu)成的ECM，導(dǎo)致癌細(xì)胞可進(jìn)出周圍組織，使腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移，并可以形成新生血管，從而形成腫瘤轉(zhuǎn)移的通道。ECM尤其是基底膜是阻礙腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵組織屏障，在浸潤和轉(zhuǎn)移過程中，癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用，溶解ECM，經(jīng)ECM缺損處向外擴(kuò)散引起浸潤和轉(zhuǎn)移。此過程中MMP-2和微血管生成發(fā)揮了重要作用。MMP-2作為MMPs的重要成員之一，主要降解Ⅳ、Ⅴ型膠原及明膠等ECM，促進(jìn)微血管生成及腫瘤細(xì)胞生長［5，6］。MMP-2在癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移中的意義在于MMPs通過破壞基質(zhì)的降解平衡而促進(jìn)癌細(xì)胞突破基底膜和ECM構(gòu)成的組織化學(xué)屏障，侵襲周圍組織;通過促進(jìn)腫瘤新生血管的形成，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)處組織［7，8］。本研究結(jié)果顯示，甲狀腺乳頭狀癌組織中MMP-2的表達(dá)高于甲狀腺腺瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，提示甲狀腺乳頭狀癌可能具有較強(qiáng)的分泌MMP-2的能力。由于腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性，MMP-2與CD34在腫瘤組織中的表達(dá)也呈現(xiàn)不均一性。本研究中MMP-2陽性組MVD值高于MMP-2陰性組，提示MMP-2可能通過促進(jìn)腫瘤間質(zhì)血管生成來加速腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。因此，通過抑制MMP-2活性來控制腫瘤進(jìn)展有可能成為腫瘤治療的強(qiáng)有力手段。此外，通過檢測MMP-2活性可以為判斷腫瘤患者預(yù)后提供依據(jù)。

1 張彥榮，畢偉，李錳，等．實(shí)驗(yàn)性重癥急性胰腺炎繼發(fā)損傷時(shí)基質(zhì)屬蛋白酶-9的變化．河北醫(yī)藥，2008，30:278．

2 花少棟，杜江，劉秀青，等．基質(zhì)金屬蛋白酶2和基質(zhì)蛋白酶9在生兔高氧機(jī)械通氣肺損傷中的表達(dá)．中國全科醫(yī)學(xué)，2008，11:2043．

3 Weidner N，Semple JP，Welch WR，et al．Tumor angiogenesis and metastasis correlation in invasive breast carcinoma．N Eng JMed，1991，324:1-8．

4 李樹玲主編．頭頸部腫瘤診斷、治療及預(yù)后．第1版．天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社，1983．316-318．

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8 王璐，張麗紅，李玉林，等．基質(zhì)金屬蛋白酶9及其mRNA在胃癌中的表達(dá)與血管新生的關(guān)系．中華醫(yī)學(xué)雜志，2003，83:782-786．