肝康顆粒的醇提工藝研究

葉卯祥，嚴雪黎

（湖北省中醫院，湖北 武漢 430074）

肝康顆粒是由丹參、郁金等5味常用中藥組成的純中藥制劑，處方來源于臨床應用多年的民間驗方，具有活血止痛、涼血舒肝、益年補虛的功效，主要用于治療肝纖維化、慢性肝炎所致的瘀熱癥。方中丹參和郁金所含與處方功能主治相關的成分多為脂溶性，為保證制劑質量，筆者進行了兩者的乙醇提取工藝研究，報道如下。

1 儀器與試藥

Agileng－1100型高效液相色譜儀；超聲波提取器（北京醫用設備廠）；Mettler－Toledo AG285型天平（Mettler－toledo Gmbh，Laboratory＆Weighing Technologies，Switzerland）。丹參酮ⅡA與姜黃素對照品均為中國藥品生物制品檢定所提供；其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 藥材吸醇量測定

按處方比例稱取丹參、郁金等藥材，加適量80％乙醇浸泡，每隔30min觀察1次，共冷浸1.5h，直至藥材不再吸收為止。將吸醇飽和后的藥材加熱回流1h，求得藥材的吸醇量為藥材量的2倍。2.2 乙醇體積分數考察

為考察不同體積分數乙醇對提取效果的影響，根據有效成分性質并參閱文獻[1－2]，按處方比例稱取丹參和郁金藥材數份，分別以70％，80％，90％的乙醇進行回流提取2次，第1次加8倍量乙醇，第2次加6倍量，合并所得藥液，用350目濾布濾過，濾液在同等條件下減壓回收乙醇，以蒸餾水定容至250 mL，備用。結果見表1?？梢?，采用80％和90％的乙醇提取時，丹參酮ⅡA和姜黃素的提取率較高。為了節約乙醇、降低成本、保證安全生產，確定采用80％乙醇回流提取丹參和郁金藥材。

2.3 評價指標測定

2.3.1 丹參酮ⅡA[3]

色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇－水（75∶25）為流動相；檢測波長270 nm，柱溫35℃，流速1mL/min。理論板數按丹參酮ⅡA峰計算應不低于2 000。

表1 不同體積分數的乙醇提取效果考察（n=3）

溶液制備：精密稱取丹參酮ⅡA對照品10mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為40μg/mL的對照品溶液。精密量取提取液5 mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

測定方法：精密量取對照品溶液1，3，5，7，9，11μL，注入色譜儀中，記錄色譜圖和峰面積值，以進樣量（μg）對峰面積值（A）進行線性回歸，得回歸方程 C=1.818 9×10－4A+4.191 7×10－3，r=0.999 7（n=6）。取供試品溶液10μL，同法測定，記錄色譜圖，計算即得。

2.3.2 姜黃素[3]

色譜條件與系統適用性試驗：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇－水－磷酸（75∶25∶0.002）為流動相，檢測波長424 nm，柱溫30℃，流速1mL/min。理論板數按姜黃素峰計應不低于2 000。

溶液制備：精密稱取姜黃素對照品5 mg，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為20μg/mL的對照品溶液。精密量取提取液5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

測定方法：精密量取對照品溶液1，3，5，7，9，11μL，注入色譜儀，記錄色譜圖，以進樣量（μg）對峰面積值（A）進行線性回歸，得回歸方程 C=1.272 8×10－4A－2.039 6×10－3，r=0.999 2（n=6）。取供試品溶液10μL，同法測定，記錄色譜圖，計算即得。

2.4 乙醇提取條件篩選

選定乙醇的體積分數后，乙醇用量（因素A）、提取時間（因素B）、提取次數（因素C）則為影響提取效果的主要因素，各取3個水平，按照L9（34）正交表安排試驗，其中首次提取時另加2倍量乙醇以補充藥材的吸附量。因素水平見表2。因丹參為方中君藥，丹參酮ⅡA是其主要有效成分，也是本方重要的活性成分之一，姜黃素也是明確的抗肝纖維化活性成分，故以丹參酮ⅡA和姜黃素含量為指標進行綜合評分，根據實際情況并參照常用比例將二者權重系數分別定為0.6和0.4，從而篩選得出最佳工藝條件。正交試驗結果見表3，方差分析結果見表4。由直觀分析可知，提取效果的影響因素大小順序為提取次數、提取時間、乙醇用量。方差分析結果表明，提取次數為影響提取效果的主要因素，乙醇用量和提取時間對提取效果的影響不大，且提取工藝A2B2C2為佳，即分別加5倍量的80％乙醇，加熱回流提取2次，每次1h。

表2 因素水平表

表3 正交試驗結果表

表4 方差分析結果表

2.5 醇提工藝驗證試驗

以最佳醇提工藝進行試驗，結果見表5?？梢?，驗證試驗與正交驗結果一致，說明提取工藝穩定。

表5 醇提最佳工藝驗證試驗結果

3 討論

本研究結果表明，用乙醇回流提取的丹參和郁金中脂溶性成分為棕褐色，質量佳。由于藥渣中還含有水溶性成分，通過水煎煮提取，還可提高肝康顆粒的功效。

[1]張 軍，劉 璐，賴小平，等.丹參制劑的研究現狀及其開發的幾點思考[J].中草藥，2001，32（10）：954－955.

[2]徐淑卿，孫艷秋，陳桂范.用正交實驗法優選丹參脂溶性成份的提取工藝[J].中成藥，1999，21（3）：152－153.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業出版社，2005：附錄ⅥD.