高效液相色譜法測(cè)定鹽酸氯哌丁片的含量

劉 珠，高振強(qiáng)

（1.河北省藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050011；2.河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院，河北 石家莊 050051）

鹽酸氯哌丁片又名咳平片，是中樞性鎮(zhèn)咳藥，主要用于治療干咳等。1987年版《中國(guó)藥典（二部）》[1]采用非水滴定法測(cè)定鹽酸氯哌丁的含量。實(shí)際操作中由于輔料的干擾而采用提取后非水溶液滴定法，該法提取操作煩瑣、費(fèi)時(shí)，且提取過(guò)程易引入誤差，所使用的氯仿還會(huì)污染環(huán)境。為此，筆者在參考文獻(xiàn)[2]的基礎(chǔ)上，采用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸氯哌丁片的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-2010 AhT型全自動(dòng)高效液相色譜儀，包括2010 A四元泵，2010 A自動(dòng)進(jìn)樣器，2010 A紫外檢測(cè)器，2010 A柱溫箱，2010 A工作站；Milli-labo純水儀；Sartorius BP211 D型電子天平。鹽酸氯哌丁對(duì)照品（自制，含量為99.86％）；鹽酸氯哌丁片（市售品，批號(hào)分別為031211，031212，031213，規(guī)格均為10mg/片）；甲醇、磷酸為色譜純；三乙胺為分析純；水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5!m）；流動(dòng)相：0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇（30∶70，三乙胺1.0mL，用磷酸調(diào)pH至3.5）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10!L。在此色譜條件下，鹽酸氯哌丁色譜峰的理論塔板數(shù)為6 785，色譜峰保留時(shí)間適中，峰形對(duì)稱，制劑輔料對(duì)含量測(cè)定無(wú)干擾（圖1）。

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的鹽酸氯哌丁對(duì)照品適量，用水稀釋成0.102 5 g/L，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取同批號(hào)鹽酸氯哌丁片20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量，用水稀釋成約含鹽酸氯哌丁0.1 g/L的溶液，搖勻，濾過(guò)，即得供試品溶液。按處方比例，精密稱取除主藥外的輔料適量，置100 mL量瓶中，加水適量，振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得陰性對(duì)照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液5.0，10.0，15.0，20.0，25.0mL，分別置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10!L，注入色譜儀，記錄色譜圖，以色譜峰峰面積（A）對(duì)質(zhì)量濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=25 650C+14 807，r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明鹽酸氯哌丁質(zhì)量濃度在5.125～25.625!g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取含量測(cè)定項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，在擬訂的色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD=0.17％（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取含量測(cè)定項(xiàng)下的同一供試品溶液，在擬訂的色譜條件下分別于0，2，4，8h時(shí)測(cè)定。結(jié)果峰面積的 RSD=0.1％（n=4），說(shuō)明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為031211）樣品，依法平行測(cè)定6份。結(jié)果鹽酸氯哌丁的含量為93.37％，RSD=0.5％（n=6）。

專屬性試驗(yàn)：取鹽酸氯哌丁原料10 mg，精密稱定，置10 mL刻度試管中，加0.1mol/L鹽酸溶液或0.1mol/L氫氧化鈉溶液至5mL，煮沸20min，冷卻，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液或0.1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至中性，加流動(dòng)相稀釋至刻度（酸破壞或堿破壞）；取鹽酸氯哌丁原料10 mg，精密稱定，置10 mL刻度試管中，加30％過(guò)氧化氫1 mL，煮沸2h，冷卻，加流動(dòng)相稀釋至刻度（氧化破壞）；將供試品置100℃烘箱中放置2 d，取10 mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度（熱破壞）；將供試品于4 500 lx光線下照射48h，取10mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度（光照破壞）。取空白輔料溶液和上述5種溶液各20!L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖2）。結(jié)果經(jīng)酸、堿、氧化、高溫、光照破壞的產(chǎn)物，均能與鹽酸氯哌丁的主峰完全分離，互不干擾。

圖2 樣品破壞后有關(guān)物質(zhì)色譜圖

峰純度檢查：利用DAD檢測(cè)器對(duì)鹽酸氯哌丁片含量測(cè)定項(xiàng)及有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下的供試品溶液主峰的起點(diǎn)、頂點(diǎn)、終點(diǎn)進(jìn)行峰純度檢測(cè)。結(jié)果顯示主峰為一純峰，表明本試驗(yàn)中的輔料、雜質(zhì)對(duì)鹽酸氯哌丁的含量測(cè)定及有關(guān)物質(zhì)檢查無(wú)干擾。

回收率試驗(yàn)：取已知含量（批號(hào)031211）的樣品20片，精密稱定1.541 7 g，平均片重為0.770 8 g，研細(xì)，精密稱定細(xì)粉適量（約相當(dāng)于1片的量）共9份，分成3組，分別置100mL量瓶中，分別加入對(duì)照品適量（約相當(dāng)于樣品中鹽酸氯哌丁含量的80％，100％，120％），加適量水振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精取10mL至100mL量瓶中，加水稀釋至刻度搖勻，精密量取續(xù)濾液10!L，注入色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品20片，除去包衣，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于鹽酸氯哌丁10mg），置100mL量瓶中，加水振搖溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精取10mL至100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度搖勻作為供試品溶液；另取經(jīng)105℃干燥至恒重的鹽酸氯哌丁對(duì)照品約10mg，精密稱定，用水稀釋成含鹽酸氯哌丁20!g/mL，作為對(duì)照品溶液，按上述色譜條件各進(jìn)樣10!L，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（標(biāo)示量的％，n=4）

3 討論

為了得到良好的色譜圖形和適宜的出峰時(shí)間，分別考察了配比為20∶80，30∶70，40∶60的甲醇-水，結(jié)果發(fā)現(xiàn)保留時(shí)間均較短；以0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液代替水并用磷酸調(diào)pH分別為2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0，經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，隨著流動(dòng)相pH降低，其保留時(shí)間縮短，pH增大，保留時(shí)間延長(zhǎng)，但當(dāng)pH為3.5，0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液與甲醇配比為30∶70時(shí)主峰對(duì)稱，無(wú)拖尾現(xiàn)象，保留時(shí)間亦適宜。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1987：117.

[2]夏前利，彭韻余，游文素.紫外分光光度法測(cè)定鹽酸氯哌斯汀片的含量[J].華西藥學(xué)雜志，2000，15（3）：237.