正交試驗法優選消婦炎膠囊的煎煮工藝

邱 洪，王利平，張天監，張永萍(.中國人民解放軍第44醫院，貴州 貴陽 550009；.貴陽春科藥業技術研發有限公司，貴州 貴陽 55008；.貴陽中醫學院，貴州 貴陽 55000)

消婦炎膠囊處方來源于貴州省少數民族民間驗方，由頭花蓼、地稔、黃柏、延胡索、當歸、五指毛桃、益母草7味藥組方，具有清熱解毒、除濕止帶、行氣止痛的功效，民間用于婦女帶下等癥。帶下癥相當于現代醫學的婦女盆腔炎、附件炎、宮頸炎等婦科生殖器炎癥。本方經貴州省黔南州中醫院民族醫藥研究所臨床應用，表明對治療婦科帶下病有很好的療效，且未見任何不良反應。本試驗以干浸膏得率和方中主藥的有效成分沒食子酸提取率為指標，采用正交試驗法優選煎煮工藝條件，旨在為該制劑的生產提供依據，報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，包括SeriesⅢ型泵、Mode500型紫外檢測器(美國生產)；TG332A型十萬分之一天平(上海)。甲醇(色譜純，天津大茂)；水(重蒸餾，臨用前制備)；磷酸(分析純，天津大茂)；沒食子酸(中國藥品生物制品檢定所，批號為110831－200302)。

2 方法與結果

2.1 正交試驗設計

選用L9(34)正交表，以沒食子酸含量、干浸膏得率和60%乙醇浸出物含量為考察指標，考察提取工藝條件中以加水量(因素A)、煎煮時間(因素B)、煎煮次數(因素C)為3個主要因素，每個因素設3水平。因素水平表見表1。2.2 樣品制備

表1 因素水平表

取1/10處方量藥材，共計145g，按表1各正交試驗條件進行水提，藥液用300目濾布過濾后，濃縮并定容至100mL，備用。2.3 干浸膏得率測定

精密量取各正交試驗濃縮后的藥液25mL，分別置已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，殘渣于105℃干燥3 h，取出，置干燥器中放置30min，稱重，計算干膏收率。

2.4 60%乙醇浸出物測定

精密量取各正交試驗濃縮后的藥液50mL，分別加乙醇，使含醇量達到60%，靜置冷藏24 h，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣于105℃干燥3 h，取出，置干燥器中放置30min，稱重，計算浸出物收率。

2.5 沒食子酸含量測定

2.5.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇－0.04%磷酸溶液(4∶96)；檢測波長：274 nm；流速：1mL/min；柱溫：35℃。理論板數按沒食子酸峰計算應不低于3 000。

2.5.2 溶液制備

精密稱取沒食子酸對照品適量，加甲醇制成每1mL含15μg的溶液，即得對照品溶液。精密吸取2.2項下樣品各2mL，置50mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.5.3 方法學考察

線性關系考察：精密稱取沒食子酸對照品適量，加50%甲醇制備得質量濃度為0.010 22 mg/mL的對照品溶液，分別精密吸取2.5，5.0，10.0，15.0，20.0μL，注入色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積積分值，以對照品進樣量 X為橫坐標、峰面積積分值 Y為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為 Y=1 735 620X－788.84，r=0.999 9 (n=5)。結果表明，沒食子酸進樣量在0.025 55～0.204 4μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液10μL(0.012 4mg/mL)，重復進樣6次，測定沒食子酸峰峰面積積分值。結果的 RSD=0.61% (n=6)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗：精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10μL，測定沒食子酸峰峰面積積分值，計算含量。結果的 RSD=1.9%(n=6)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗：在室溫下每隔一段時間進樣供試品溶液10μL，測定沒食子酸峰峰面積值。結果的 RSD=0.77%(n=6)，表明沒食子酸在12 h內基本穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的同一批樣品6份，稱取各約0.25g，精密稱定，精密加入沒食子酸對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，精密吸取10μL，依法測定含量。結果平均回收率為98.15%，RSD為1.1%(n=6)。

2.5.4 樣品含量測定

分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10μL，注入色譜儀，記錄，計算沒食子酸含量。

2.6 正交試驗結果與分析

結果見表2及表3。方差分析結果顯示，各因素作用主次為A＞B＞C，最佳煎煮工藝為A2B3C2，即加10倍量水，煎煮2次，每次煎煮2 h。

2.7 驗證試驗

由于優選的最佳工藝未包括在正交設計表的9次試驗中，故對其進行驗證。取正交試驗同一批藥材，按A2B3C2進行試驗，共驗證3批。結果見表4。可見，該工藝浸膏收率、60%乙醇浸出物含量和沒食子酸提取量都較穩定，可作為提取的最佳工藝。

3 討論

消婦炎膠囊為復方制劑，處方中藥味較多，成分復雜。沒食子酸為方中君藥地稔和頭花蓼的共有成分，且是地稔[1]和頭花蓼[2]的有效成分。現代研究表明，沒食子酸具有收斂、抗炎的藥理作用，因此把沒食子酸的提取量作為正交試驗評價指標。

處方中藥材還含有黃酮、生物堿等脂溶性活性成分，為了充分反映提取效果，測定了提取物中60%乙醇浸出物的含量，并也以其作正交試驗評價指標；另外，干膏收率也是評價提取效果的常規指標，它直接影響日服劑量和單服劑量的規定，故也以其作為正交試驗評價指標之一。

表2 煎煮工藝正交試驗結果表

表3 方差分析結果

表4 最佳工藝驗證結果

本試驗采用綜合評分法進行工藝條件優選，由于干膏收率與效量不成正比關系，規定其權衡分為20分，沒食子酸和60%乙醇浸出物為方中有效成分，能直接反映提取效果，故規定這兩個指標的權衡分均為40分。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京：化學工業出版社，2005：152.

[2]孫長生.頭花蓼研究進展[J].中藥研究與信息，2005，7(4)：26－28.