東北地區捕食線蟲真菌調查1)

王偉 劉雪峰 王天亮 劉雪英

(東北林業大學，哈爾濱，150040)

捕食線蟲真菌是植物病原線蟲的一類捕食性天敵，以營養菌絲特化形成的粘性網、粘性球、非收縮環、收縮環、粘性菌絲、粘性分枝、冠囊體等捕食器官捕捉線蟲。捕食線蟲真菌在動植物線蟲及食用菌線蟲的生物防治中起著非常重要的作用，并取得了很好的成績［1］。捕食線蟲真菌的生物防治前景被許多線蟲防治研究者所認可，也越來越多地被各個國家和地區所重視。我國東北地區在自然景觀上表現出冷濕的特征，有著大面積針葉林、針闊葉混交林和草甸草原，肥沃的黑色土壤，廣泛分布的凍土和沼澤等，地理位置和植被獨特。目前，對該地區捕食線蟲真菌的報道比較少［2－4］。為了更好地保護東北地區的自然植被，筆者對東北地區的捕食線蟲真菌資源進行了調查，為以后生物防治線蟲提供依據和參考。

1 材料和方法

1.1 樣品采集

從遼寧省千山，吉林省長白山、吉林市、松原，黑龍江省漠河、圖強、牡丹江、肇東等地采集土壤、朽木和立木樣品827份。其中:土壤樣品599份，立木和朽木樣品228份。

1.2 試驗材料

培養基弱玉米培養基(CMA):玉米粉20 g，瓊脂18 g，水1 L。培養線蟲培養基:燕麥片20 g，水40 mL。

誘餌線蟲誘導捕食器官的誘餌線蟲為Panagrellus redivirus。

制備線蟲懸液用貝曼漏斗法洗出培養基中的線蟲，適當稀釋。作為誘導線蟲。

分離培養①土樣采用常規撒土法培養［5］。②朽木揉碎后用鑷子隨即取出大小適中的10塊，整齊地排列在培養皿中，每個樣品5個重復。③立木(枯死樟子松和枯死云杉)將每棵樹隔一段鋸一個圓盤，每個圓盤分為皮、心材和邊材3部分，每一部分作為一個樣用剪刀剪成1.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的長方體，整齊排列在培養皿中。

將誘餌線蟲加到培養皿中，每皿大約5 000條。靜止兩天后倒置于恒溫箱中25℃培養2～3周。

純化在解剖鏡下對每個平板全面鏡檢，用玻璃針挑取捕食線蟲真菌單個分生孢子，接種到CMA平板上，倒置于恒溫箱中培養1～4周，獲得純培養。

保存鑒定將一部分純培養轉入CMA試管斜面。25℃培養2周，斜面長好后置于冰箱中4℃保存。

小室培養法［6］誘導捕食器。

Scholler［7］依據18S rDNA、5.8S rDNA和ITS區間的序列分析結果提出了捕食線蟲真菌新的分類系統，認為捕食器類型比其它形態特征更能恰當地反映其自然的演化系統。Yan Li［8］根據28S rDNA、5.8S rDNA和β－tubu－lin基因序列分析結果重新修訂了捕食線蟲真菌的分類系統，補充了Scholler分類系統的不足。筆者按照文獻［8］的分子系統學分類方法對研究菌株重新劃分屬。

1.3 數據處理

檢出率=該菌出現的樣品數/總樣品數×100%;

總檢出率=各菌檢出率之和。

計算出現頻率，統計物種豐富度。

采用Srensen相似性指數(S')評價不同基質的群落相似性。采用Shannon－Weiner指數(H')和Simpson指數(D)評價捕食線蟲真菌的多樣性。計算公式分別如下:

式中:S為采樣點的物種總數;a、b分別為基質A、B的物種數;c為2個基質相同的物種數;Pi為第i種所占百分數。

2 結果與分析

2.1 東北地區捕食線蟲真菌種類及分布特點

從827份樣品中共分離出捕食線蟲真菌3屬15種，黑龍江省3屬13種8個新記錄種，優勢種為Arthrobotrys oligospora(15.96%)、A.cladodes(5.19%)、A.superba(4.43%)、A.dendroides(4.23%);吉林省3屬9種8個新記錄種優勢種是A.oligospora(7.58%);遼寧省3屬5種4個新記錄種，優勢種為Drechslerella.dactyloides(31.25%)。各個真菌的檢出率及在各立地條件下的分布情況見表1。

各省新記錄種

A.superba

鑒定菌株:黑龍江mwl18，mwl3，mwl19，mwl3，mbh10，2p52，5b52，1p11，1b11，5b73，5x51，5p22，4zp0，4zx5，z62，z47，z50，z43，z46，z14，z8，m35，m12。

A.cladodes

鑒定菌株:吉林jmg60。

A.musiformis

鑒定菌株:吉林yj27;遼寧lqs4，lqs76，lqs6，lqs67，lqs70。

A.dendroides

鑒定菌株:黑龍江5b7，1b4，5p2，5p4，5p2，5x3，5b1，5p6，5b2，5p6，1x1，5p8，5x6，3p12，1p3，1x2，2zx2，2zp0，3zb5，4zp2，2zb4，1zx6。

A.indicum

鑒定菌株:黑龍江z53。

A.cystosporium

鑒定菌株:黑龍江z78，z23，z76，sr6，sr3，sr4;吉林yj25，yj35，yj27，yj31。

A.cionopagum

鑒定菌株:吉林yj22，yj21，jmy13，jl23，jzk3，jzk15;遼寧lqs58，lqs24，lqs4，lqs38。

A.gephyrophagum

鑒定菌株:吉林jz2，jz23。

Drechslerella.dactyloides

鑒定菌株:黑龍江4mh13，4mh53，m7，mr5，mr8;吉林jz2 jmg10 jym22 jym2 jym3 jz2;遼寧lqs32，lqs19，lqs39，lqs22，lqs53，lqs56，lqs13，lqs29，lqs67，lqs72，lqs38，lqs8，lqs12，lqs11，lqs49，lqs37，lqs33，lqs70，lqs24，lqs28，lqs31，lqs57，lqs75，lqs32，lqs31。

Dr.stenobrochum

鑒定菌株:黑龍江mm9。

Dactylellina.ellipsosporum

鑒定菌株:黑龍江4mh1，4mh5，z56，cf15，cf12，cf7;吉林jzl3，jl2，jym3，jl17，jmg5，jz13，jz9，jmg7，jmg1，jz11，jzy21;遼寧lqs57，lqs75，lqs7，lqs33，lqs76，lqs46，lqs43，lqs18，lqs31，lqs28。

Da.leptospora

鑒定菌株:黑龍江z60。

表1 捕食線蟲真菌分布情況

2.2 捕食線蟲真菌在木頭和土壤中的分布比較

試驗采集了木頭標本228份，土壤標本599份。木頭上共檢出捕食線蟲真菌2屬6種，優勢種為A.oligospora(19.30%)、A.cladodes(10.53%)和A.dendroides(9.65%);土壤中檢出捕食線蟲真菌3屬13種，優勢種為A.oligospora(10.85%)、Dr.dactyloides(5.51%)和Da.ellipsosporum(4.45%)。從表2中可以看出:木頭中捕食線蟲真菌的檢出率(47.99%)高于土壤中捕食線蟲真菌(29.09%)。土壤和木頭中捕食線蟲真菌的多樣性指數(H'、D)、相似性指數(S')及其它比較見表2。

2.3 鹽堿地中捕食線蟲真菌的分布

從吉林省松原采集鹽堿地土壤樣品，共分離出4種捕食線蟲真菌，優勢種為A.oligospora(15%)和A.cystosporium(10%)。其中在生長堿草的鹽堿地捕食線蟲真菌的檢出率最高，種類也最多，而生長堿蓬的鹽堿地中沒有發現捕食線蟲真菌。詳情見表3。

表2 木生、土生捕食線蟲真菌檢出結果

表3 捕食線蟲真菌在鹽堿地中的分布情況%

3 討論

3.1 東北地區捕食線蟲真菌的分布

資料顯示［9］，捕食線蟲真菌的分布并沒有嚴格的地理氣候限制。東北地區氣候雖冷濕，但捕食線蟲分布也很豐富，如A.oligospora(13.18%)在本地區的檢出率最高，為本地區的優勢種。

從東北地區各地采樣分離捕食線蟲真菌，其中從朽木上分離出來的Dr.dactyloides、Da.ellipsosporum的分生孢子大小與文獻記載［10］都有一定的出入，但從孢子形態、捕食器特征等方面來看，沒有差別，所以定為相應的種。這種變化可能是由于其生活的生境變化引起的一種適應性改變。

3.2 木生和土生捕食線蟲真菌的相互關系

Gray［11－12］記載，捕食線蟲真菌能在多種基質上分離得到。在東北地區，木生捕食線蟲真菌的檢出率(47.99%)要高出土生的捕食線蟲真菌(29.09%);A.dendroides只在樹上分離得到，并且具有很高的分離率(9.65%)。4種共有種中，其中3種即:Dr.dactyloides、A.oligospora、A.superba在兩種基質出現頻率上也有一定的相關性。這說明土生和木生捕食線蟲真菌有著潛在的聯系，木生捕食線蟲真菌有可能是從土壤中遷移而來，但由于木、土基質上不同的生活環境也形成了它們獨有的種類。

3.3 鹽堿土中捕食線蟲真菌的分布

土壤微生物的數量隨著土壤鹽堿度的增大而減少［13］，捕食線蟲真菌隨著鹽漬化程度的加深也呈下降趨勢。農田中捕食線蟲真菌的種類和檢出率都比較低，可能是人為干擾的原因。

在本次試驗過程中，由于污染原因導致一些菌株未能鑒定到種，對吉林和遼寧地區采樣也相對較少。

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