SDS-AGE尿蛋白電泳技術在腎臟疾病中的應用研究

楊小燕，吳泳泳，呂 春，雷文輝

(江西省贛州市人民醫院檢驗科，江西贛州 341000)

蛋白尿是腎臟疾病的常見臨床表現，尿蛋白的選擇性在一定程度上反映腎臟病變的程度。腎活檢診斷腎臟疾病的準確性雖然高，但由于腎活檢屬創傷性診斷技術，存在很多不足，如患者的恐懼；顧慮；可能造成出血；感染等。因此，本文采用十二烷基硫酸鈉-瓊脂糖凝膠(SDS-AGE)進行非濃縮尿蛋白電泳技術分析，在一定程度上可反映腎臟病變的部位及程度，對臨床診斷和早期診斷腎臟疾病，特別對未開展腎活檢的基層醫院有重要臨床意義。

1 資料與方法

1.1 標本采集

1.1 .1病例組 60例腎病患者均來自我院腎內科2008年1月～2008年12月住院病人，年齡10～70歲，平均42歲，男38例，女22例。

1.1 .2對照組 健康人5例，無腎臟病史及其他慢性病史，尿蛋白含量0～100mg/24h。

1.2 儀器與試劑

1.2 .1儀器 法國Sebia公司產HYDRASYS全自動程序化瓊脂糖凝膠電泳儀。

1.2 .2試劑 均使用該公司提供的專用標準液和試劑。

1.3 方法

1.3 .1 樣品采集及處理 收集新鮮晨尿5～10ml，標本如不能及時測定放冰箱時間不超過1周，先用尿蛋白篩選定量法測定蛋白含量，如蛋白質高于2g/L，則用生理鹽水稀釋至1.5g/L。

1.3 .2 操作步驟 取20μl SDS-溴酚藍稀釋液加入80μl已處理尿液，混勻，吸取5μl加入凝膠中(5孔/板)，擴散10min。打開電泳儀裝上緩沖條帶，置凝膠于電泳板上啟動，電泳15min。取出凝膠置染色缸烘干；染色；脫色；固定；掃描；報告結果。

1.3 .3 SDS-AGE尿蛋白電泳圖譜分析 根據尿蛋白分子量分布特點，以相對分子量為70KDa為界限，分為：(1)選擇性腎小球性蛋白尿(分子量為5～10KDa)：尿中主要為白蛋白；轉鐵蛋白和極少量分子量較大的IgG，IgA；(2)非選擇性腎小球性蛋白尿(分子量為7～20KDa)：尿中出現大量大分子蛋白質，如IgM，α-巨球蛋白等；(3)腎小管性蛋白尿(分子量為 1～5KDa)：主要為低分子量蛋白條帶，一般白蛋白不超過總蛋白的40%，如 β-微球蛋白(β-MG)，視黃醇結合蛋白(RBP)，游離輕鏈等；(4)混合性蛋白尿(分子量為 1～20KDa)：低，中，高分子蛋白條帶均同時出現；(5)溢出性蛋白尿(分子量分別為25KDa

表1 腎活檢與SDS-AGE尿蛋白電泳分析結果

和50KDa)：主要是游離輕鏈；(6)生理性蛋白尿：淡染的白蛋白區帶或未見蛋白區帶。

表2 SDS—AGE尿蛋白電泳結果

2 結果

2.1 12例腎活檢患者SDS-AGE尿蛋白電泳結果,見表1。

2.2 我院腎內科住院60例患者SDS-AGE尿蛋白電泳結果，見表2。

3 討論

SDS-AGE尿蛋白電泳技術，是利用SDS是一種陰離子型表面活性劑，蛋白質與其連接，形成SDS-蛋白質復合物，這種復合物蛋白本身的構造已經破壞，他們都表現出相同的構造和相同的負電荷。當這種SDS-蛋白質復合物在具有篩選功能的瓊脂糖凝膠介質上電泳時，蛋白質按它們的分子量大小進行分離，通過區分不同位置蛋白區帶，判斷尿蛋白分子的大小，進而判斷為生理性，腎小管性，腎小球性，混合性，溢出性蛋白尿[1]。 SDS-AGE利用瓊脂糖凝膠的選擇成分及多孔性結合蛋白質相對分子量區分不同蛋白組分，根據尿蛋白分子量不同，將尿蛋白分為小分子蛋白(β2微球蛋白，α1微球蛋白，視黃醇結合蛋白)；中分子蛋白(白蛋白，轉鐵蛋白)；大分子蛋白(IgG，IgA，IgM，α2-巨球蛋白)。當腎小球通透性增加或濾膜缺損時，尿中出現中，大分子蛋白，稱為腎小球性蛋白尿；當腎小管受損時，腎小管重吸收功能減弱，尿中出現中，小分子蛋白，稱為腎小管性蛋白尿；當腎小球和腎小管同時發生病變時，尿中即出現大，中，小分子蛋白，稱為混合性尿；而生理性蛋白尿則多以中分子蛋白為主。

本文5例健康對照者電泳后均未見任何電泳條帶。60例蛋白尿患者電泳結果顯示：35例為腎小球性蛋白尿 (其中20例為選擇性腎小球性蛋白尿，15例為非選擇性腎小球性蛋白尿)；8例為腎小管性蛋白尿；10例為混合性蛋白尿；2例為溢出性蛋白尿；5例為生理性蛋白尿。同時作腎活檢的12例患者其病理結果顯示：6例為腎小球性蛋白尿(其中3例為選擇性腎小球性蛋白尿，3例為非選擇性腎小球性蛋白尿)，尿蛋白電泳出現大分子蛋白區帶，白蛋白為主；3例為腎小管性蛋白尿，電泳結果以小分子蛋白為主；3例為混合性蛋白尿，表明損傷同時累及腎小管和腎小球，電泳結果出現大，中，小分子蛋白。由此可見，尿蛋白電泳結果與腎活檢結果是相吻合的。腎活檢診斷腎臟疾病準確性雖然高，但由于腎活檢屬創傷性診斷技術，存在很多不足，如患者的恐懼；顧慮；可能造成出血；感染等。本文結果表明尿蛋白電泳與腎活檢結果有很高的符合率，與陳立等的研究結果一致[2]，且尿蛋白電泳對患者無任何損傷，取材方便，報告快速準確，掃描后圖形和膠片可永久保存，便于分析比較。因此，使用SDS-AGE尿蛋白電泳技術可區分尿中蛋白的組分，判斷尿蛋白來源，有助于早期診斷腎臟疾病，特別對未開展腎活檢的基層醫院具有廣泛的臨床應用前景。

[1]沈 霞,張敏華,汪 萍,等.非濃縮尿蛋白電泳的臨床應用[J].中華檢驗醫學雜志,2001,24(5):266～268.

[2]陳 立,莊葉萍.SDS-AGE非濃縮尿蛋白電泳的建立和應用[J].天津醫科大學學報,2002,8(1):109.